国家自然科学基金(30772309)
- 作品数：5 被引量：27H指数：3
- 相关作者：徐惠成王荥王延洲梁志清刘晓芳更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院解放军第113医院第三军医大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Deltex-1对骨髓间充质干细胞增殖及其向平滑肌细胞分化的影响被引量：2
- 2018年
- 目的探讨Deltex-1对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMSCs)增殖及其向平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)分化的影响。方法分离培养大鼠骨髓bMSCs,采用流式细胞仪检测鉴定。通过Deltex-1过表达腺病毒载体p Ad/Deltex-1感染bMSCs后,采用CCK-8(cell count kit-8)法检测Deltex-1过表达对bMSCs增殖的影响;将未感染、经Deltex-1病毒感染及经空病毒感染的bMSCs与SMCs共培养,采用免疫荧光细胞化学、RT-PCR及Western blot分别检测其bMSCs中SMCs标志物平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)及Notch信号通路相关因子Notch-1的表达,单纯培养的bMSCs、SMCs的相同检测作正常对照。结果成功分离、培养大鼠bMSCs。CCK-8检测证实:与对照比较,经Deltex-1病毒感染的bMSCs生长减慢,48 h开始显得更为明显(P<0.05,P<0.01);免疫荧光细胞化学、RT-PCR及Western blot检测显示:与对照比较,经Deltex-1病毒感染的bMSCs与SMCs共培养后显著表达SMCs的标志物SM-MHC,较弱表达Notch信号通路相关因子Notch-1(P<0.01)。结论 Deltex-1过表达可抑制bMSCs的增殖,并促进其向SMCs分化。
- 王荥王延洲刘禄斌徐惠成
- 关键词：骨髓间充质干细胞平滑肌细胞细胞分化
- deltex-1腺病毒载体的构建及其在大鼠bMSCs中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的构建deltex-1基因腺病毒载体并研究其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,bMSCs)中的表达。方法采用高保真酶PCR扩增deltex-1基因并测序,亚克隆至pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体后在BJ5183细菌中进行重组,挑选正确的重组子在FT293细胞中包装成病毒。以CsCl2方法纯化病毒,并进行滴度测定。将目的基因病毒感染bMSCs细胞后收集总RNA及蛋白,用PCR及Western blot方法检测目的基因表达水平。结果①成功扩增了大小为1 883 bp的大鼠deltex-1,并成功构建了大小为4.5 kb的同源重组腺病毒穿梭载体,滴度为1.23×1011 IU/ml;②对培养的大鼠bMSCs进行流式检测,结果为CD90、CD44阳性表达,分别为99.57%和85.66%,而CD45表达阴性,阳性率为0.35%;③荧光显微镜观察deltex-1转染效率为60%～70%,RT-PCR及Western blot检测结果显示转染后deltex-1表达明显增强,说明转染成功。结论成功构建deltex-1基因腺病毒载体并能在bMSCs中高表达。
- 王荥王延洲徐惠成
- 关键词：腺病毒载体骨髓间充质干细胞
- 脱细胞膀胱基质复合大鼠骨髓间充质干细胞体外构建组织工程化吊带治疗压力性尿失禁的初步研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨脱细胞膀胱基质(urinary bladder matrix,UBM)复合大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesen-chymal stem cells,BMSCs)构建组织工程化吊带治疗压力性尿失禁的可行性。方法采用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离、培养和扩增BMSCs,流式细胞术检测BMSCs免疫表型,将第3代BMSCs与UBM复合培养,7 d后通过光镜和电镜观察细胞在材料上的生长情况,进一步应用万能力学测试仪检测所构建吊带的最大负荷、杨氏模量、伸展性等机械特性,另以UBM负载大鼠膀胱平滑肌细胞株(smooth muscle cells,SMCs)构建SMCs吊带、单纯UBM及聚丙烯材料行效果比较。结果分离培养的BMSCs呈长梭形,折光性好,增殖旺盛,具有成体干细胞特性,细胞表面标志物CD29阳性,CD45和CD31阴性。UBM去细胞彻底,复合BMSCs或SMCs均可获得生长良好的细胞。机械性状检测表明,单纯UBM和复合BMSCs的UBM吊带与SMCs吊带及聚丙烯材料相比,最大负荷下降[(0.025±0.003)、(0.018±0.004)kN vs(0.030±0.003)、(0.143±0.034)kN,P<0.01];杨氏模量下降[(170.820±61.735)、(103.624±52.779)MPa vs(490.730±80.969)、(900.100±192.402)MPa,P<0.01];伸展性提高[(16.418±1.014)、(22.684±6.848)mm vs(9.498±1.384)、(2.975±0.401)mm,P<0.01]。结论成功分离、培养了大鼠BMSCs,并鉴定了其干性。构建的干细胞吊带与SMCs吊带及聚丙烯材料相比,其伸展性良好。
- 王颖楠范雪梅赵敏徐惠成
- Notch信号通路对干细胞分化的影响被引量：11
- 2011年
- 干细胞的增殖分化受到自身或外在、远程或近程多种信号通路的调控,而细胞之间的相互通讯在此过程中起到重要作用。Notch通路就是通过相邻细胞之间相互通讯调控细胞分化的重要信号通路之一,众多研究显示,该通路的活化在干细胞分化过程中发挥了重要调节作用,本文就此相关研究进展作一简要综述。
- 王荥徐惠成
- 关键词：NOTCH通路干细胞分化
- 细胞间接触诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化的实验研究被引量：8
- 2010年
- 目的通过两种细胞的共培养探讨细胞间接触对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化的影响。方法分别采用密度梯度离心法和胶原酶消化法分离培养了骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)和膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)。并对其进行了鉴定。在此基础上以单独培养的BMSCs和BSMCs分别作为阴性和阳性对照组,将获得的BMSCs和BSMCs在体外通过接触与非接触共培养作为实验组,对诱导后的BMSCs是否向平滑肌(smooth muscle cells,SMCs)分化通过免疫荧光和Western blot进行鉴定。结果对BMSCs进行流式细胞术检测结果显示CD90、CD44表达阳性率分别为99.78%,60.27%,CD45表达阴性,阳性率为0.21%。在BMSCs与BMSCs共同培养的实验中,Western blot结果显示:BMSCs本身表达少量calponin蛋白,接触组calponin的表达随培养时间的延长逐渐增多,非接触组无明显变化;免疫荧光显示:接触组在共培养第8天部分细胞抗calponin阳性,非接触组与诱导前无明显变化。结论初步认为BMSCs与BMSCs接触共同培养能诱导BMSCs向平滑肌分化。
- 刘晓芳王延洲徐惠成梁志清
- 关键词：微环境骨髓间充质干细胞平滑肌细胞
