国家自然科学基金(30700841) 作品数:21 被引量:67 H指数:5 相关作者: 熊蠡茗 邵增务 杨述华 周建国 郭兵 更多>> 相关机构: 华中科技大学 深圳市第三人民医院 赣州市人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用(英文) 被引量:7 2008年 背景:研究表明,烟酰胺能够对白细胞介素1β或肿瘤坏死因子α致椎间盘退变起到保护作用,但烟酰胺对椎间盘细胞凋亡与增殖的保护机制尚不很清楚。目的:观察烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制。设计、时间及地点:随机对照分组设计,于2007-04/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室及协和医院干细胞中心完成。材料:2~3月龄日本大白兔10只,体质量1.5~2.0kg,取L1~L6节段椎间盘内髓核细胞,体外培养髓核细胞凋亡模型。方法:实验分为6组,正常对照组:不加任何药物;烟酰胺组:加入0.5g/L烟酰胺;白细胞介素1β组:加入10μg/L白细胞介素1β;白细胞介素1β+Caspase抑制剂组:加入10μg/L白细胞介素1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FM;白细胞介素1β+小剂量烟酰胺组:加入10μg/L白细胞介素1β及0.05g/L烟酰胺组;白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组:10μg/L白细胞介素1β及0.5g/L烟酰胺。3d后对各组细胞行AnnexinV-PI染色,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色检测及MTT检测。主要观察指标:各组细胞凋亡率、caspase-3、8、9功能染色阳性细胞率及各组细胞的吸光度。结果:①白细胞介素1β+Caspase抑制剂组和白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组较白细胞介素1β组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。②白细胞介素1β+Caspase抑制剂组、白细胞介素1β+大、小剂量烟酰胺组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色阳性细胞率较白细胞介素1β组明显下降(P<0.01或P<0.05)。③与白细胞介素1β组相比,白细胞介素1β+Caspase抑制剂组和白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组吸光度升高(P<0.01)。结论:烟酰胺可以促进髓核细胞的增殖并抑制白细胞介素1β诱导的髓核细胞凋亡,对凋亡的抑制作用主要通过抑制凋亡的线粒体途径实现。 聂克 杨述华 熊蠡茗 郭兵 周建国关键词:烟酰胺 髓核 增殖 凋亡 自噬参与压力诱导兔髓核细胞退变的研究 被引量:1 2013年 目的观察自噬是否参与压力诱导兔髓核细胞退变,探讨压力诱导髓核细胞退变机制。方法从3月龄兔胸腰段脊柱提取兔髓核细胞培养,取第2代兔髓核细胞,1Mpa压力环境下培养12、24、48h。细胞活力与细胞毒性检测观察压力对细胞生长的影响,透射电镜观察压力条件下细胞的微观结构。单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察细胞内自噬性空泡结构及自噬率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)观察自噬相关基因在压力条件下的表达。结果压力导致细胞衰老及死亡,透射电镜见细胞内存在自噬体结构,MDC染色后行流式细胞学检测显示12、24、48h自噬率分别为(1.580±0.171)%、(7.930±0.252)%、(13.530±1.206)%,PER结果显示压力诱导自噬相关基因(LC3B、Beclin-1)表达量与正常条件下表达明显增多(P〈0.05),且随着压力培养时间延长,LC3B、Beclin-1表达量也明显增多(P〈0.05)。结论自噬参与压力诱导细胞退变的过程,为压力诱导椎间盘髓核细胞退变的防治提供新的途径。 马凯歌 邵增务 王佰川 熊蠡茗 吴强 杨述华关键词:椎间盘 自噬 髓核细胞 可控轴向压力致兔腰椎间盘退变模型的建立及评价 被引量:15 2008年 目的:建立可控轴向压力诱发的椎间盘退变动物模型并考察其特性。方法:取4月龄日本大白兔40只,将其随机分入5组(每组8只)。采用基于横穿椎体的克氏针的自制加压装置,分别对2-4组动物腰椎间盘施加10kg压力1周、2周、4周及8周,第1组作为假手术对照组。Thompson分级法及兔腰椎间盘磁共振(MRI)评价退变程度,HE染色及Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化染色考察其组织学改变。另外,构建纤维环损伤致兔腰椎间盘退变模型,并对标本行HE染色以供比较。结果:①Thompson分级:第2组7只均为Ⅱ级,第3组6只Ⅲ级,第4组5只为Ⅳ级,第5组4只动物退变程度达到Ⅴ级。②MRI评分显示,第2组椎间盘以轻度退变为主;第3组椎间盘主要为中度退变。第4组、第5组则以重度退变为主。③HE染色显示,该模型椎间盘各区域的退变情况较纤维环损伤模型更为均匀。④免疫组化染色显示,退变过程中椎间盘基质成分退化的趋势与人体相符。结论:可控轴向压力致兔腰椎间盘退变模型可以高效诱发椎间盘退变,尤其在轻、中度椎间盘退变方面具有优势。该模型可供深入研究,并用于椎间盘退变的治疗研究。 熊晓芊 邵增务 裴洪 詹子睿 俞旭东 王河忠关键词:椎间盘 椎弓根螺钉用于植骨融合术治疗胸腰椎结核的临床研究 被引量:3 2015年 目的:探讨椎弓根内固定联合植骨融合术治疗胸腰椎结核的临床效果。方法:回顾性分析2013年5月至2014年5月在我院接受治疗的50例胸腰椎结核患者的临床资料,结合影像资料评价患者手术前后的红细胞沉降率、后凸畸形矫正情况、Frankel分级及术后并发症的发生情况等。结果:所有患者术后病理均证实为脊柱结核,术中27例植入大块自体髂骨,23例植入自体肋骨捆绑植骨。24例采用椎体侧前方钉棒内固定,26例采用后路椎弓根螺钉系统内固定。术中未出现脊髓、神经、血管损伤及血气胸等并发症。患者术后红细胞沉降率获得改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。术后Cobb角明显获得矫正,差异具有统计学意义(P<0.05)。患者术后脊柱损伤程度明显改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:椎弓根内固定联合椎体间植骨融合术治疗胸腰椎结核具有良好的临床效果,不仅可以改善红细胞沉降率,而且可以矫正患者脊柱后凸畸形,值得临床推广应用。 秦超 佘远举 熊健 李志浩 文文 熊晓纤关键词:胸腰椎结核 植骨融合术 椎弓根内固定 脊索细胞对类软骨细胞增殖及基质合成代谢的影响 2012年 目的观察非接触共培养条件下脊索细胞对类软骨细胞增殖及生物学特性的影响。方法无菌条件下取4只4周龄13本大白兔胸腰段脊柱,获取髓核组织,酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化的脊索细胞及类软骨细胞。取第2代类软骨细胞与脊索细胞按1:1的比例接种于共培养装置Transwell小室中,将单层培养的类软骨细胞设为对照组。培养1、3、7、10d后倒置相差显微镜下观察细胞生长状况,免疫荧光法鉴定细胞表型,细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达。结果成功分离纯化、获取脊索细胞及类软骨细胞。镜下观察见原代脊索细胞体积较大,呈圆形或椭圆形,直径10~15μm,胞质内含较多大小不等的囊泡;原代贴壁的类软骨细胞体积较脊索细胞小,呈短梭形,直径4~6μm。随着非接触共培养时间的延长,类软骨细胞增殖明显加快,以共培养7、10d明显(P〈0.05);Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达量也逐渐增高。结论脊索细胞能促进髓核类软骨细胞的增殖,其可能在阻止椎间盘退变的发生中具有一定意义。 丁凡 邵增务 熊蠡茗 马凯歌 高飞关键词:髓核 骨水泥强化椎弓根内固定治疗骨质疏松性脊柱骨折的效果 被引量:3 2015年 目的:探讨内固定与植骨融合术治疗骨质疏松性椎体骨折的临床疗效。方法:回顾性分析我院2011年7月至2012年7月收治的80例骨质疏松性椎体骨折患者的临床资料。根据固定方式,将37例采用PMMA骨水泥强化椎弓根内固定的患者作为研究组,其余43例单纯应用椎弓根内固定的患者作为对照组。收集两组患者的手术时间、术中出血量、术后疼痛程度、愈合时间等临床资料。评价患者手术前后侧位X线片椎体高度和内固定效果。术后随访24个月。结果:两组患者的手术时间、术中出血量、住院时间及骨折愈合时间等无显著性差异(P>0.05);研究组患者术后疼痛程度、椎体高度、内固定物松动及断裂情况等显著优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:骨水泥强化椎弓根螺钉治疗骨质疏松性椎体骨折具有良好的临床效果,值得推广应用。 秦超 佘远举 熊健 李志浩 文文 吴永超关键词:骨质疏松 椎体骨折 骨水泥 内固定 腺病毒载体搭载的TIMP-3基因对兔椎间盘基质的调节作用(英文) 被引量:3 2009年 [目的]考察腺病毒载体搭载的重组人组织金属蛋白酶抑制因子-3基因(RAdTIMP-3)转染兔椎间盘后对椎间盘内主要基质成分质量的影响,并探讨其用于椎间盘退变治疗的可行性。[方法]扩增Lac-Z基因标记的RAdTIMP-3和重组腺病毒载体RAd66,并进行纯化、鉴定及滴度测定。将30只日本大白兔随机分入5组,分别向L4、5、L5、6椎间盘内注射生理盐水(第1组)、1.0×1010OPU/mlRAd66(第2组)以及1.0×1010OPU/mlRAdTIMP-3(第3、4、5组)各25μl。各组分别于注射后2、2、1、2、4周收集标本,X-gal染色检测转染效率,RT-PCR检测TIMP-3及聚集蛋白聚糖核心蛋白的表达,TIMP-3及H型胶原免疫组化染色、藏红O-快绿染色及Tunel染色考察转染对椎间盘基质的调控作用。[结果](1)RAdTIMP-3经扩增和纯化后浓度可达1.9×10TM OPU/ml。(2)RT-PCR显示,3、4、5组TIMP-3基因表达均较1、2组明显增加,3、4、5组核心蛋白基因表达较1、2组略有增强。(3)Tunel染色显示各组凋亡细胞比例无明显差异。(4)第5组藏红O-快绿染色及II型胶原免疫组化染色染色强度均好于1、2组。[结论]RAdTIMP-3能够广泛而安全地在兔椎间盘内表达,并改善椎间盘基质成分的质和量,具备用于椎间盘退变治疗的潜力。 熊蠡茗 郭兵 邵增务 杨述华 谢卯 王河忠关键词:椎间盘 聚集蛋白聚糖 一氧化氮对兔纤维环细胞线粒体功能的影响及机制研究 被引量:2 2009年 目的:研究一氧化氮(NO)对兔纤维环细胞线粒体功能的影响及其与纤维环细胞生物学行为的相关性。方法:平板培养的兔腰椎间盘纤维环细胞,将其分为6组加入不同剂量的NO供体硝普钠(SNP)及烟酰胺:A组,不加入药物;B组,10μmol/LSNP;C组,100μmol/LSNP;D组200μmol/LSNP;E组,100μmol/LSNP和0.05mg/ml烟酰胺;F组,100μmol/LSNP和0.5mg/ml烟酰胺。作用72h后检测细胞增殖活力、细胞内ATP含量、细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性以及线粒体膜电位。结果:兔纤维环细胞经不同浓度的SNP作用72h后,细胞内NOS量随SNP加大而增加、ATP量则随着减小,和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);SNP组可引起纤维环细胞膜电位下降,烟酰胺组可减轻因SNP引起的膜电位下降(P<0.05);与SNP组比较烟酰胺组呈浓度依赖性促进纤维环细胞增殖(P<0.05)及改善纤维环细胞的增殖能力,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过量的NO可损害兔纤维环细胞的线粒体代谢功能,通过抑制NO的合成以及保护椎间盘细胞线粒体的功能,有助于预防椎间盘退变。 郭兵 邵增务 熊蠡茗 聂克 周建国关键词:纤维环细胞 线粒体 一氧化氮 烟酰胺 The expression of TRAIL and its receptors in osteosarcoma cells and the apoptosis effect of a combination of TRAIL, adriamycin and IFN-γ on MG-63 cells 被引量:1 2009年 Objective: This study investigated the effects of rh-TRAIL with or without chemotherapeutic drugs on the apoptosis of the osteosarcoma cell line, MG-63, and the influence of chemotherapeutic drugs on changes in the expression of DR5 and YinYang 1 (YY1) in MG- 63 cells. Methods: The effects of treatment with rh-TRAIL alone and/or chemotherapetic drugs on MG-63 cell growth inhibition and apoptosis were measured using the MTT assay, FACS analysis ofAunexin V labeled cells, and the mRNA changes of DR5 and YY1 were detected by RT-PCR. Results: Rh-TRAIL protein inhibited the growth of MG-63 cells, and this inhibition was increased by adriamycin and IFN-γ. Adriamycin and IFN-γ significantly facilitated the induction of the expression of DR5 and reduced the expression of YY1. Conclusion: The apoptosis-inducing effect of rh-TRAIL in MG-63 cells was enhanced by chemotherapeutic drugs. Chao Deng Zengwu Shao Xiaoqian Xiong Zhichuan Liu Zhicai Zhang关键词:TRAIL IFN-Γ ADRIAMYCIN 细胞老化与椎间盘退变 被引量:5 2009年 近期研究发现椎间盘细胞老化与椎间盘退变的特征性改变,如细胞数量减少,基质降解,炎性因子、基质金属蛋白酶等合成和分泌增加相关,在椎间盘退变发生发展过程中起着重要作用。椎间盘退变过程中细胞老化发生机制不同,复制老化为细胞老化的固有机制,而应激诱导早衰则加速了细胞老化,在两种机制的共同作用下最终导致椎间盘细胞染色体和基因表达变化、细胞功能障碍、增殖能力丧失及基质合成改变,椎间盘发生不可逆性变化。因此,干预椎间盘细胞老化途径,延缓椎间盘细胞老化就有可能成为椎间盘治疗的新思路。该文就椎间盘退变过程中细胞老化研究进展及潜在的治疗策略作一综述。 黄吉军 邵增务 熊蠡茗关键词:椎间盘退变 细胞老化 标志物