北京市自然科学基金(7062053)
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 相关作者：吕双红王常勇段翠密郝彤徐斌更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军第二炮兵总医院北华大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
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- 壳聚糖水凝胶局部注射对心梗的治疗作用研究被引量：9
- 2007年
- 目的观察心梗部位局部注射壳聚糖水凝胶的促血管生成及心肌保护作用。方法将19只Wistar大鼠随机分为壳聚糖水凝胶注射组、单纯心肌梗死模型组、PBS注射组。结扎大鼠冠状动脉致心肌梗死30min后,心肌缺血处注射壳聚糖水凝胶。术后1、2、4周,分别处死动物进行组织学、免疫组织化学检查。结果壳聚糖水凝胶注射1、2周后有明显存留,4周后已降解吸收,无明显残留,但注射后明显提高了心梗部位的心室壁厚度,梗死部位的血管密度明显增加,存活的心肌数量增多,结缔组织增生程度减轻。结论心梗部位注射壳聚糖水凝胶可明显促进血管增生,有利于梗死部位心肌细胞的存活,适宜作为可注射性组织工程化心肌的支架材料。
- 徐斌卢文宁郝彤吕双红王常勇
- 关键词：心肌梗塞局部注射
- 纤维蛋白胶对干细胞心肌梗死修复移植影响的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:应用可注射性纤维蛋白胶(fibrin glue,FG)液态支架材料联合人胎盘间充质干细胞(placent mesen-chymal stem cells,PMSCs)进行心肌内注射,观察其对细胞滞留、存活的影响,探讨其作为可注射性心肌组织工程支架的可行性。方法:(1)分离、培养、扩增人PMSCs备用;(2)建立大鼠急性心肌梗死模型并注射FG,观察其在心肌梗死区域存留及降解情况;(3)大鼠急性心肌梗死模型随机分为4组,对照组(PBS组)、FG组、PMSCs+PBS组、PMSCs+FG组,对移植24h后细胞滞留、4周后细胞的存活及局部新生血管的密度进行测量。结果:(1)FG组织相容性好,心肌内降解时间1周左右。(2)PMSCs+FG组细胞24h滞留率显著增高,4周存活细胞数量显著增高、心肌梗死区域新生血管密度显著提高(P<0.01)。结论:可注射性纤维蛋白胶可以提高移植细胞在心肌梗死部位的滞留及存活,发挥微环境调控作用并刺激心肌梗死部位微血管生成,是良好的可注射性心肌组织工程支架材料。
- 卢文宁谢晓华段翠密吕双红徐斌李德雪
- 关键词：心肌梗死干细胞移植心室功能纤维蛋白组织黏着剂
- 组织工程心肌研究中心肌肌钙蛋白T及细胞间隙连接蛋白43免疫组化检测结果的观察与分析
- 2009年
- 目的建立组织工程心肌研究中系统观察免疫组化检测结果的程序与方法。方法取新生大鼠心脏制作石蜡组织切片;用0.25%胰酶消化法分离原代新生大鼠心肌细胞,一部分进行细胞爬片培养,一部分与液态胶原混合构建组织工程心肌并施加力学拉伸刺激,制作组织工程心肌石蜡组织切片。对三者分别进行心肌肌钙蛋白T(cTnT)及细胞间隙连接蛋白43(Cx43)抗体的免疫组化染色。比较观察天然心肌组织、体外培养心肌细胞及组织工程心肌组织免疫组化的检测结果,对其形态结构的变化进行综合分析。分别选取5个不同视野对细胞总数和cTnT阳性细胞进行计数,计算百分比。在细胞和再造心肌组织培养过程中观察自发收缩的细胞区域与cTnT着色区域的关系。结果天然心肌和组织工程心肌切片分别反映了天然在体心肌和体外构建心肌的细胞形态和组织结构特征;心肌细胞爬片显示了体外心肌细胞与非心肌细胞的形态,以及随体外培养时间的延长其形态和数量比例的改变。细胞在体外培养时间越长,成纤维细胞比例越高。尽早将分离的原代新生大鼠心肌细胞与液态胶原混合体外再造心肌组织进行三维拉伸培养有助于抑制其中的成纤维细胞的增殖速度。将分离细胞爬片培养4h后可相继观察到能自发收缩的细胞,其收缩区域与染色片中cTnT的着色区域基本相符;再造的组织工程心肌的收缩自拉伸后48h开始,逐渐从单个细胞到肌束再到整条再造心肌,频率逐渐加快,从1～2/min到5～10/min。结论建立了观察与分析组织工程心肌免疫组化结果的程序和方法,为优化实验设计与条件提供了客观参数,也为构建其他组织的形态学观察与分析方法提供了有利借鉴。
- 段翠密李颖王海滨周瑾刘志强江红王常勇
- 关键词：心肌肌钙蛋白T连接蛋白43
- 抗坏血酸体外诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨抗坏血酸作为诱导剂对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响,建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法:采用直接悬浮培养法使mESC形成拟胚体(EBs),用含不同浓度抗坏血酸的分化培养基对其进行诱导分化,摸索最佳的诱导分化条件。结果:抗坏血酸诱导mESC分化为心肌细胞的最佳浓度为0.1mg/ml,约为70%的EBs出现跳动的心肌合胞体,显著高于不添加任何诱导剂的对照组。抗坏血酸诱导产生的心肌细胞表达多种心肌蛋白,具有心肌细胞的结构特征。结论:抗坏血酸能够促进mESC向心肌细胞分化,应用抗坏血酸体外诱导mESC向心肌细胞分化是一种较为理想的体外诱导方法。
- 何文俊王晶波王常勇段翠密李晶吕双红
- 关键词：抗坏血酸胚胎干细胞细胞分化
- 壳聚糖水凝胶的研制及其与C2C12细胞粘附、支持作用的实验研究被引量：7
- 2008年
- 研制可注射的壳聚糖水凝胶材料,并对该材料的理化特性进行检测,同时检验其是否能粘附并支持C2C12细胞生长。对不同温度下的壳聚糖溶液进行pH值的测定,并以壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠溶液为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,对该材料的粘度及37℃成胶时间进行测定,显微镜下观察水凝胶材料的结构,通过C2C12细胞在其表面上的粘附与生长情况,判定该材料是否具有良好的细胞相容性。结果表明:该材料具有温度敏感性,即室温下为液态,37℃变为固态。当壳聚糖溶液浓度为2%时,加入45%β-甘油磷酸钠溶液后的成胶作用时间最短,约为15min。C2C12细胞在壳聚糖水凝胶材料上的粘附与生长情况良好。壳聚糖水凝胶可作为可注射性组织工程化心肌的支架材料,用于携带有效细胞进行缺血性心脏病的治疗。
- 徐斌段翠密郝彤吕双红王常勇
- 关键词：温敏性C2C12细胞可注射性
- 体外构建组织工程化心肌片层的实验研究被引量：1
- 2007年
- 探索以液态胶原作为支架材料,体外构建组织工程化心肌片层的可行性。用含0.04%EDTA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与Ι型胶原M、atrigel和2×DMEM混合,注入方形模具内,制备心肌细胞-胶原复合体,体外培育1周后,施加外力,拉伸刺激条件下继续培养1周。通过光学显微镜下观察H、.E.染色、激光共聚焦和透射电镜观察等对构建的组织工程化心肌片层进行评价。结果表明:心肌片层在培养的第2天出现自发性的跳动,随时间的延长,跳动的区域逐渐增多,并于外力拉伸后的第4天形成一致跳动。激光共聚焦研究结果表明:在构建的工程化心肌组织中,肌原纤维显示排列有序,多数沿拉伸方向伸展,其形态类似于心肌组织。电镜观察显示:拉伸的心肌片层中的心肌细胞含有较多的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰可见。采用新生大鼠心肌细胞与液态Ι型胶原复合方式,可在体外再造出片层状心肌组织,构建的组织工程化心肌片层具有与心肌组织类似的结构和特性。
- 王静王常勇何文俊段翠密吕双红
- 关键词：心肌细胞工程化心肌组织
- 兔子宫内膜片层体外构建的实验研究
- 2008年
- 探索以扩增培养的子宫内膜细胞为种子细胞、以液态胶原为支架材料,构建组织工程化子宫内膜片层的可行性。体外分离并规模化扩增子宫内膜上皮细胞与基质细胞,以Ⅰ型液态鼠尾胶原为支架,按自然子宫内膜的结构在体外重建具有两层结构的组织工程化子宫内膜,体外培养14天时进行H.E.染色与免疫组化鉴定。H.E.染色与免疫组化染色结果表明:再造子宫内膜片层在胶原材料中能够较好地维持双层结构,上皮层呈CK18阳性,在某些部位还能够形成极化的柱状上皮。利用体外扩增培养的子宫内膜上皮细胞与基质细胞构建的组织工程化子宫内膜片层具有子宫内膜组织的双层结构与极化上皮特征。
- 段翠密王海滨吕双红章烨李德雪郝彤王滟濛王常勇
- 关键词：细胞培养子宫内膜胶原
- 兔子宫内膜中标记滞留细胞的初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:利用鉴定标记滞留细胞(LRC)的方法分析兔子宫内膜中可能存在的成体干细胞及其分布。方法:首先用促性腺激素处理兔,将子宫内膜调整到增殖期,并采用免疫组织化学方法鉴定增殖期子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,以评价子宫内膜的增殖期状态。BrdU标记后追踪8周,以鉴定LRC细胞的存在与分布。结果:增殖期子宫内膜较促性腺激素处理前明显增厚,子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体与PCNA的表达明显升高。8周追踪后,子宫内膜中有(2.1±2.4)%的细胞核为BrdU阳性,即LRC细胞。这些LRC细胞主要存在于腔上皮组织中。结论:在成年兔子宫内膜中有LRC存在,子宫内膜成体干细胞可能存在于这些LRC中。
- 王海滨段翠密王常勇章烨李德雪郝彤王滟濛吕双红
- 关键词：促性腺激素子宫内膜标记滞留细胞成体干细胞
