国家重点基础研究发展计划(2005CB523201)
- 作品数：47 被引量：235H指数：8
- 相关作者：刘在新卢曾军常惠芸孙普曹轶梅更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒前导蛋白的研究进展被引量：4
- 2007年
- FMDV基因组编码的所有蛋白质是以多聚蛋白质的形式产生的。前导蛋白是FMDV基因组编码的第一个具有酶切活性的蛋白质。它是剪切多聚蛋白质的共翻译分子内部的一个蛋白酶。FMDV是在多聚蛋白质的N端剪切前导蛋白。此外,前导蛋白不仅能剪切病毒编码的多聚蛋白,而且能降解宿主细胞中特定的蛋白质,由此极大提高了病毒的毒力。前导蛋白可以抑制I型干扰素的分泌,降低免疫监视系统对FMDV的监视能力,以此逃避宿主的非特异性免疫系统的攻击。关于前导蛋白与细胞凋亡的关系,细胞凋亡产生的eIF4G片段与前导蛋白裂解eIF4G产生的碎片是不同的。
- 周建华丛国正高闪电常惠芸
- 关键词：口蹄疫病毒
- 口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立被引量：8
- 2009年
- 目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果:回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R=0.99,检测范围为5～1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论:该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。
- 李永亮卢曾军杨苏珍田美娜谢宝霞刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体非结构蛋白
- 用原位杂交技术对牛组织中FMDV RNA检测和定位
- 2007年
- 采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等其他组织中均没有阳性染色，表明牛舌上皮和喉咽部上皮组织中感染了FMDV，本研究为进一步阐明FMDV在宿主体内的持续感染机理提供极有价值的线索。
- 邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁
- 关键词：FMDV原位杂交
- 环介导等温扩增技术及其在分子诊断中的应用被引量：32
- 2007年
- 环介导等温扩增技术作为新兴的分子生物学技术,已经广泛应用于各种病原微生物的分子水平的研究,并且取得了令人鼓舞的成绩。文中就环介导等温扩增技术的原理及在分子诊断中的应用作一综述。
- 邵军军周广青常惠芸
- 关键词：环介导等温扩增技术分子生物学
- 口蹄疫新型疫苗研究进展被引量：2
- 2009年
- 口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展方向。本文结合实验室在FMD新型疫苗研究方面所开展的探索性研究工作,综述了国内外在FMD基因工程弱毒苗或灭活苗、蛋白质和合成肽疫苗、空衣壳疫苗、细胞因子增强型疫苗等研究领域所取得的进展。
- 曹轶梅卢曾军田飞鹏刘在新
- 关键词：口蹄疫新型疫苗
- 基于FMDV IRES的双顺反子载体的构建及体外表达分析被引量：1
- 2007年
- 利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20～48h,在紫外显微镜下观察,能够看到典型的绿色荧光,表明载体能够体能够利用FMDV的IRES能够介导非帽依赖性表达外源基因。并通过流式细胞仪,与同样是CMV启动转录egfp的pGFPN1质粒在细胞中的表达水平进行了比较。该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础,并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力。
- 郑海学郭慧琛靳野刘湘涛谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒IRES双顺反子
- 应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体被引量：5
- 2008年
- 目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。
- 李永亮田美娜卢曾军杨苏珍刘在新
- 口蹄疫病原免疫学的分子基础被引量：1
- 2009年
- 杜平尚佑军贺延玉孙晓林马军武
- 关键词：分子基础免疫学单股正链RNA病毒内部核糖体进入位点非编码区病原
- 口蹄疫病毒反向遗传学研究进展被引量：7
- 2009年
- 反向遗传学操作技术在口蹄疫病毒(FMDV)病原学基础研究领域的应用,使得人们能够在基因组整体水平上研究病毒基因的功能。得益于反向遗传学系统的不断完善和发展,目前人们对FMDV分子病原学也有了更加深入的认识和理解。本文结合实验室在FMDV反向遗传学方向上所开展的探索性研究工作,综述了国内外利用反向遗传学操作技术在研究FMDV分子致病机制、病毒毒力与变异的关系、病毒复制的影响因素、新型FMD基因疫苗的研制等领域所取得的进展,展望FMDV反向遗传学研究新动向。
- 白兴文李平花刘在新刘湘涛谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒反向遗传学感染性分子克隆
- 口蹄疫病毒3D基因的克隆及其编码蛋白的结构和功能预测被引量：4
- 2009年
- 采用RT-PCR技术,对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的3D基因进行克隆,并对其序列进行比对,同时利用Ex-pasy等生物软件对3D蛋白的二级、三级结构及生物学特性进行预测和分析.结果表明:3D蛋白在口蹄疫各血清型间高度保守,分子中含有一个糖基化位点及多个酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸位点,并存在一个单股正链RNA病毒依赖RNA多聚酶的催化区;结构特点显示3D蛋白为口蹄疫病毒复制所需的多聚酶.
- 杜平尚佑军贺延玉孙晓林马军武
- 关键词：口蹄疫病毒3D基因生物信息学
