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人肠上皮细胞耐受内毒素的分子机制被引量：3: 2004年; 目的　观察人肠上皮细胞对内毒素刺激的反应性 ,探讨其耐受内毒素的分子机制。方法　分别用凝胶迁移阻滞法 (EMSA)和酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测系列浓度的内毒素刺激人小肠上皮细胞株 (HIC) 1h后细胞核转录因子 (NF κB)的活性变化和刺激 18h后细胞白细胞介素 8(IL 8)的分泌水平。用核糖核酸酶保护法 (RPA )检测HIC内毒素相关受体———Toll样受体 4(TLR4)、CD14和MD 2mRNA的表达。将转入TLR4、CD14和MD 2表达质粒的HIC经内毒素刺激后 ,检测细胞NF κB和IL 8水平的变化。结果　用系列浓度的内毒素刺激HIC后 ,均检测不到NF κB的活性和IL 8的分泌 ;HIC不表达TLR4、CD14和MD 2mRNA ;转染TLR4、CD14和MD 2质粒的HIC受脂多糖 (LPS)刺激后 ,可检测到较强的NF κB活性和明显的IL 8分泌(2 17.3 3± 3 3 .2 1)ng/L。结论　HIC呈内毒素无反应性 ,其表面内毒素相关受体TLR4、CD14和MD 2不表达是其耐受内毒素作用的重要分子机制。; 张道杰蒋建新陈永华朱佩芳; 关键词：内毒素 CD14 耐受 MD-2 分子机制 IL-8

内毒素相关受体基因共转染肠上皮细胞最佳转染条件的探索被引量：1: 2006年; 目的探讨内毒素(LPS)相关受体CD14、Toll样受体4(TLR4)和MD-2基因共转染人小肠上皮细胞株(HIC)的最佳转染条件。方法用核糖核酸酶保护法(RPA)检测基因转染效率,分别研究质粒DNA的量、FuGENE 6转染试剂与质粒DNA的比例、转染试剂-质粒DNA复合物与靶细胞的作用时间及培养液中血清存在与否对转染效果的影响。结果FuGENE 6转染试剂转染HIC的最佳转染条件是:每种质粒DNA的量为2.0μg(使用6 cm培养皿)、转染试剂与质粒DNA的比例为4∶1、转染试剂-质粒DNA复合物与HIC的作用时间为5 h,而培养液中血清存在与否对转染效率无明显影响。结论建立了CD14、TLR4和MD-2三种表达质粒共转染HIC的优化转染方法。; 张道杰蒋建新陈永华; 关键词：基因转染肠上皮细胞

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国家重点实验室开放基金(200311)