河南省高等学校创新人才培养工程([2011]1)
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
- 相关作者：闫若潜吴志明赵雪丽刘梅芬赵明军更多>>
- 相关机构：河南省动物疫病预防控制中心河南科技大学郑州市动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：河南省高等学校创新人才培养工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究被引量：4
- 2015年
- 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。
- 杨晓璐闫若潜李勤楠赵雪丽谢彩华刘梅芬张书阳
- 关键词：重组融合蛋白体外活性
- 鸡白细胞介素-6-2嵌合基因的融合表达及其表达产物活性的研究被引量：4
- 2014年
- 为研制具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方法对表达的rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白(重组融合蛋白)进行纯化。采用间接ELISA方法检测重组融合蛋白分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体的特异性免疫反应活性,采用MTS法检测重组融合蛋白体外促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖活性。结果显示,成功构建了ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因及其重组表达质粒rpQE-30-ChIL-6-linker-ChIL-2,表达的重组融合蛋白的分子质量约为40ku,纯化后的纯度在96%以上。该重组融合蛋白可分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体发生特异性免疫反应,并具有显著的促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞增殖活性,其活性优于任一重组蛋白对照。本研究结果初步证明了rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在对鸡免疫细胞的增殖作用方面与rChIL-6和rChIL-2蛋白的作用相似,为进一步研究rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内的活性奠定了基础。
- 张书阳谢彩华闫若潜吴志明赵明军赵雪丽刘梅芬杨晓璐张代宝张林海
- 关键词：嵌合基因活性
- 鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2013年
- 据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。
- 孔刚锐吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉
- 关键词：TAQMAN
- 重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究被引量：5
- 2019年
- 为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rChIL-6蛋白免疫增强组、rChIL-2蛋白免疫增强组及rChIL-6+rChIL-2混合蛋白免疫增强组,将鸡白细胞介素重组融合蛋白水剂与LaSota株联合接种于SPF鸡,分别采用MTS法、流式细胞术、ELISA和HA/HI法检测接种前后不同时间各组鸡外周血及脾淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量、血清中Th1/Th2型细胞因子表达水平及免疫抗体水平等指标。结果显示,接种后7～21d时,与NDV弱毒苗对照组相比,同时接种重组融合蛋白组鸡淋巴细胞增殖活性、外周血CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量比值及血清中重组鸡IL-4蛋白(rChIL-4)、ChIL-6、ChIL-2、重组鸡IFN-α蛋白(ChIFN-α)、ChIFN-γTh1/Th2型细胞因子表达水平明显提升;HI免疫抗体较NDV弱毒苗对照组提高了1.0～1.9个滴度,较单一rChIL-6、rChIL-2对照组分别提高了0.2～0.7、0.2～1.1个抗体滴度。综上所述,rChIL-6-Lin-ker-ChIL-2融合蛋白对NDV(LaSota株)活疫苗在鸡体内具有明显的免疫增强效果。
- 刘梅芬李勤楠马震原吴志明班付国闫若潜王华俊
- 关键词：免疫增强作用TH1/TH2型细胞因子
- 重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究
- <正>引言IL-6与IL-2具有相互诱导、相互调节的协同作用[1],将二者联合应用可发挥较好的协同免疫增强作用。本课题组前期已初步证明了构建表达的rChIL-6-Linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIL-6...
- 马震原闫若潜刘梅芬李勤楠
- 文献传递
- 猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
- 目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqM...
- 拜廷阳赵德明吴志明闫若潜赵明军刘梅芬
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应被引量：9
- 2014年
- 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Th)和细胞毒性T细胞(Tc)亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性ELISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3.1/ORF2质粒;在rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒或rpcDNA3.1/ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒为下一步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。
- 闫若潜王东方吴志明李桂喜刘淑敏刘梅芬赵明军王淑娟赵雪丽
- 关键词：猪圆环病毒2型猪白细胞介素2
- 重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白对鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响研究被引量：4
- 2014年
- 为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试验组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）中CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分含量以及CD4^＋/CD8^＋比值进行检测。结果表明,与对照组相比,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白在鸡体内接种后3～14d均可明显提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3^＋CD4^＋细胞百分含量,降低CD3^＋CD8^＋细胞的百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值;接种后3～7d期间,第2组鸡的CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋细胞含量及CD4^＋/CD8^＋比值与PBS对照组（第1组）相比差异均极显著（P〈0.01）,第3组与第1组相比差异均显著（P〈0.05）。以上结果表明,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白接种鸡体后均可显著影响鸡PBLC中淋巴细胞亚群百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值,增强机体的细胞免疫功能;重组融合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4^＋/CD8^＋比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于rChIFN-α蛋白;重组融合蛋白在体内发挥了鸡α干扰素和白细胞介素-2对细胞免疫功能的协同增强作用。
- 杨晓璐闫若潜吴志明刘梅芬张代宝张书阳王淑娟赵雪丽刘毅
- 关键词：T淋巴细胞亚群CD4^+/CD8^+比值免疫功能
- 重组猪α干扰素-白细胞介素-2复合蛋白在猪体内抗高致病性PRRSV活性的研究被引量：5
- 2013年
- 为了评价猪α干扰素-白细胞介素-2重组复合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)在猪体内抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP PRRSV)的效果,采用重组猪α干扰素(rPoIFN-α)-重组猪白细胞介素-2(rPoIL-2)等量混合物、单一rPoIFN-α蛋白、单一rPoIL-2蛋白、rPoIFN-α-linker-PoIL-2复合蛋白等以注射方式进行HP PRRSV的攻毒保护试验,通过分析试验猪体温变化、HP PRRS典型症状维持时间、死亡率、月增重率、病毒血症维持时间等指标,采用RT-PCR和间接ELISA检测攻毒后带毒及抗体产生情况,以评价这些制剂对攻毒猪的保护效果。结果显示,rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白、rPoIFN-α-rPoIL-2蛋白等量混合物、rPoIFN-α蛋白均可有效抑制HP PRRSV在猪体内的增殖和持续性感染,明显降低发病猪体温,缩短HP PRRS典型症状维持时间,减缓发病症状,降低死亡率;rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白对HP PRRSV的抑制作用优于单一rPoIFN-α蛋白,稍优于rPoIFN-α-rPoIL-2蛋白等量混合物,显著优于单一rPoIL-2蛋白。上述结果为进一步选取以rPoIFN-α-linker-PoIL-2复合蛋白为主要成分的猪基因工程复合抗病毒制剂研究奠定了基础。
- 刘淑敏闫若潜吴志明李桂喜王东方刘梅芬安春霞赵明军
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗病毒活性
- 重组猪α干扰素/白细胞介素2复合蛋白在猪体内抗高致病性猪繁殖与呼吸征病毒活性研究
- 为了评价猪α干扰素/白细胞介素-2重组复合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)在猪体内抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)效果,本研究采用重组猪α干扰素(rPoIFN-)和重组猪白介素-2...
- 吴志明闫若潜李桂喜王东方刘梅芬安春霞赵明军
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
