国家自然科学基金(30271467)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 相关作者：何超黄学锋方炳良劳伟峰毛伟芳更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院美国MDAnderson癌症中心浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因对肝癌细胞杀伤作用及旁观者效应研究
- 2004年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)基因在诱导肝癌细胞凋亡时是否存在旁观者效应 ,以及旁观者效应的可能机制。方法 构建表达TRAIL基因的双腺病毒载体系统Ad/GT TRAIL +Ad/PGK GV16 ,通过 2 93包装细胞产生的病毒上清液将TRAIL基因转入肝癌细胞SMMC772 1细胞中 ,RT PCR检测TRAIL基因的表达 ,以MTT法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率 ;不同比例混合培养SMMC772 1/TRAIL和SMMC772 1细胞 ,检测混合细胞生长抑制率来评价TRAIL基因的旁观者效应 ,并以滤去细胞成分的转染细胞培养液培养未转染细胞 ,观测可溶性因子在TRAIL基因旁观者效应中的作用。结果 TRAIL基因对SMMC772 1细胞的生长抑制率与PBS、LacZ基因和Bax基因比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;SMMC772 1细胞的凋亡率 ,TRAIL基因与PBS、LacZ基因和Bax基因比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;混合细胞的生长抑制率 ,以SMMC772 1/TRAIL占 0 %时为 0 ,占 5 %时为 15 .9% ,占 2 5 %时为 6 7.0 % ,占 5 0 %时为 80 .2 % ,占 10 0 %时为 87.7% ;以PBS对SMMC772 1的生长抑制率为 0 ,则滤去细胞成分的转染细胞培养液对SMMC772 1的生长抑制率为 4 % ,两者差异无显著性。
- 何超劳伟峰胡晓彤徐向明许靖王琦方炳良
- 关键词：TRAIL基因肿瘤坏死因子旁观者效应基因疗法
- 端粒酶启动子肿瘤靶向基因抗大肠癌的研究
- 2004年
- 目的探讨端粒酶 (hTERT)启动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducingligand ,TRAIL)基因在大肠癌细胞DLD1的表达及肿瘤杀伤作用。方法通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TRAIL基因转入大肠癌细胞DLD1,流式细胞仪检测GFP/TRAIL的表达和DLD1细胞凋亡率。结果端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL基因和CMV启动子驱动的GFP(绿色荧光蛋白 )基因在DLD1内的表达率分别达 4 1 6 3%和 5 4 0 7% ;GFP/TRAIL基因对DLD1细胞的生长抑制率和凋亡率分别达 93 5 0 %和 5 6 97% ,与PBS和Ad/hTERT LacZ的差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论端粒酶启动子驱动的GFP/TRAIL融合基因在大肠癌细胞中能够有效地表达 ;TRAIL基因对大肠癌细胞DLD1有明显的抑制生长和促凋亡作用。
- 何超陈斌张磊胡文献劳伟峰黄学锋胡晓彤方炳良
- 关键词：基因治疗大肠癌肿瘤坏死因子凋亡诱导配体
- 不同化疗药物对结肠癌细胞获得性TRAIL基因耐药的逆转作用被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨不同化疗药物对结肠癌DLD1细胞获得性TRAIL基因耐药的逆转作用及其可能的机制。方法:将不同化疗药物联合重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因处理对Ad/gTRAIL耐药的结肠癌DLD1-TRAIL/R细胞,通过MTT法检测治疗后肿瘤细胞的存活率,以评价化疗药物对TRAIL基因耐药的逆转作用;然后进一步在体内评价该逆转策略的有效性;接着通过Western免疫印迹等方法探讨逆转耐药的可能机制。结果:在体外检测了5-氟脲嘧啶、丝裂霉素、阿霉素、氟脲苷、依立替康以及顺铂6种化疗药物对DLD1-TRAIL/R细胞TRAIL基因耐药的逆转作用,结果发现只有5-氟脲嘧啶和丝裂霉素能够使DLD1-TRAIL/R细胞对Ad/gTRAIL重新敏感。进一步的结果表明联合5-氟脲嘧啶和Ad/gTRAIL能在体内有效地抑制DLD1-TRAIL/R细胞来源的肿瘤生长,且该抑制作用明显强于其它对照组。结论:联合使用Ad/gTRAIL和5-氟脲嘧啶或丝裂霉素能在体内外有效地逆转DLD1-TRAIL/R细胞对TRAIL基因的获得性耐药,其中丝裂霉素的逆转作用可能与其诱导的Bax过度表达有关。
- 朱洪波卓文莹何超黄学锋朱玉萍王达方炳良
- 关键词：基因TRAIL结肠肿瘤
- 端粒酶启动子肿瘤靶向肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因抗人肠癌细胞的活性研究
- 2005年
- 目的：探讨端粒酶(hTERT)启动子驱动下肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related Apoptosis-inducing Ligand，TRAIL)基因在大肠癌细胞 DLD1 和 HT-29的表达及其杀细胞作用。方法：通 过腺病毒载体系统将 hTERT 启动子驱动的 TRAIL 基因转入大肠癌细胞 DLD1和 HT-29，流式细胞仪检测 GFP/ TRAIL(绿色荧光蛋白和 TRAIL 融合基因)的表达和细胞凋亡率，MTT 法检测细胞生长抑制率。结果：端粒 酶启动子驱动的 GFP/TRAIL 基因和 CMV 启动子驱动的 GFP(绿色荧光蛋白)基因在 DLD1和 HT-29内的表 达平分别达41． 63%和31． 4%；GFP/TRAIL 基因对 DLD1和 HT-29细胞的生长抑制率分别达93． 5%和74． 2%， 凋亡率分别是41． 1%和25． 8%，与 PBS 和 Ad/CMV-GFP 的差异都有显著意义(P＜0． 05) 。结论：端粒酶启 动子驱动的 GFP/TRAIL 融合基因在大肠癌细胞 DLD1和 HT-29中能够有效的表达；TRAIL 基因对大肠癌细 胞 DLD1和 HT-29有明显的抑制生长和促凋亡作用。
- 陈斌何超劳伟峰黄学锋方炳良
- 关键词：TRAIL基因结肠肿瘤基因治疗
- 结肠癌获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因耐药机制被引量：2
- 2006年
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）能杀灭众多肿瘤细胞而不损伤多数正常细胞,它的发现为肿瘤基因治疗带来了新的曙光,但深入研究发现,TRAIL基因治疗的进一步发展受到了耐药问题的困扰.了解TRAIL基因耐药机制,尤其是治疗过程中形成的获得性耐药机制,对于预防并逆转耐药具有重要意义.
- 朱洪波陈琳琳何超毛伟芳黄学锋
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体肿瘤基因治疗耐药机制获得性TRAIL基因结肠癌
- 杭白菊增强TRAIL基因诱导大肠癌细胞凋亡及机制的实验研究被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨杭白菊提取液对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因(TRAIL)抑制人大肠癌细胞株DLD-1作用的影响及其可能机制。方法:杭白菊提取液联合重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于人大肠癌细胞株DLD-1,通过倒置显微镜、MTT比色法和流式细胞仪,研究分析其对DLD-1细胞抑制作用的效果。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测杭白菊提取液作用前后DLD-1细胞TRAIL、TRAIL受体(TRAIL-Rs)mRNA以及细胞表面TRAIL蛋白表达的变化。结果:Ad/hTERT-gTRAIL对DLD-1细胞的生长抑制率和凋亡率分别为31·4%和13·5%;联合杭白菊提取液后,生长抑制率和凋亡率均显著提高,达93·1%和45·4%(P<0·05)。杭白菊提取液作用后DLD-1细胞TRAIL mRNA的表达量从作用前的0·46上调至1·01,细胞表面TRAIL蛋白表达的百分率从作用前的2·2%升高到5·0%(P<0·05)。TRAIL死亡受体(DR4、DR5)mRNA的表达量分别从0·70和0·22上调至1·10和0·83(P<0·05),而TRAIL诱骗受体(DcR1、DcR2)mRNA的表达量从0·60和1·15下调至0·19和0·78(P<0·05)。结论:杭白菊提取液联合重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因(Ad/hTERT-gTRAIL)能有效诱导DLD-1细胞的凋亡。杭白菊提取液上调TRAIL死亡受体表达以及下调TRAIL诱骗受体的表达可能在增强TRAIL诱导的凋亡作用中起着重要作用。
- 胡文献毛伟芳何超张磊黄学锋杜卫东方炳良
- 关键词：杭白菊结直肠肿瘤细胞凋亡
- 端粒酶启动子肿瘤靶向TNF相关凋亡诱导配体基因抗大肠癌细胞HT-29的活性研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨在端粒酶(hTERT)启动子驱动下TRA IL基因在大肠癌细胞HT-29的表达及其杀细胞作用。方法:通过腺病毒载体系统将hTERT启动子驱动的TNF相关凋亡诱导配体(TRA IL)基因转入大肠癌细胞HT-29,流式细胞仪检测GFP/TRA IL的表达和HT-29细胞凋亡率。结果:端粒酶启动子驱动的GFP/TRA IL基因和CMV启动子驱动的GFP(绿色荧光蛋白)基因在HT-29内的表达率分别达31.4%和67.0%;GFP/TRA IL基因对HT-29细胞的生长抑制率和凋亡率分别达74.2%和25.8%,与PBS和A d/CMV-GFP比差异都有显著性意义(P<0.05)。结论:端粒酶启动子驱动的GFP/TRA IL融合基因能在大肠癌细胞中有效表达;TRA IL基因对大肠癌细胞HT-29有明显的抑制生长和促凋亡作用。
- 陈斌何超劳伟峰黄学锋方炳良
- 关键词：基因疗法
- 膜结合配体依赖的TRA IL抗肿瘤细胞旁观者效应被引量：4
- 2006年
- 目的:研究TRAIL基因抗肿瘤作用旁观者效应的发生机制。方法:腺病毒Ad/Lac-Z转染肿瘤细胞后作为标记的旁观者细胞,腺病毒Ad/g-TRAIL转染肿瘤细胞作为效应细胞,在6孔Transwell培养板上同一孔内应用隔离或混合培养旁观者细胞和效应细胞的方法,通过检测旁观者细胞Lac-Z酶的活性,以明确TRAIL基因旁观者效应的发生机制。结果:检测了不同来源的肿瘤细胞株,包括大肠癌细胞株DLD1和Lovo、肺癌细胞株A549、肝癌细胞株HepG2、乳腺癌细胞株MDA-MB231、卵巢癌细胞株DOV13。各株肿瘤细胞转染Ad/g-TRAIL后ELISA方法均未检测出培养液中出现可溶性TRAIL(s-TRAIL);隔离培养效应细胞与旁观者细胞,旁观者细胞的Lac-Z活性与PBS及腺病毒Ad/CMV-GFP对照组无明显差异,而混合培养组其活性明显低于对照组(P<0.05);混合培养效应细胞与旁观者细胞(1∶1),发现高密度细胞生长组其旁观者效应明显大于低密度生长组(P<0.05);FACS检测Sub G0/G1发现DOV13细胞在高密度生长组显著高于低密度生长组(P<0.05);荧光及相差显微镜下观察发现TRAIL转染细胞可诱导周围旁观者细胞发生凋亡而自己并不首先发生凋亡。结论:腺病毒介导的TRAIL基因的旁观者效应是通过TR IAL蛋白表达并定位于细胞膜上,通过细胞接触结合于邻近肿瘤细胞膜上的TRAIL受体而诱导旁观者肿瘤细胞的凋亡,而不是通过水解膜配体形成s-TRAIL而发生旁观者效应,这种作用是细胞接触依赖的。
- 黄学锋何超王达劳伟锋朱洪波毛伟芳方炳良
- 关键词：TRAIL旁观者效应
