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血红素加氧酶-1抑制哮喘气道炎症的研究被引量：3: 2006年; 目的探讨血红素加氧酶-1(hemeoxygenase_1,HO_1)在小鼠支气管哮喘模型中的抗炎作用。方法用卵清蛋白(OVA)致敏、激发小鼠建立哮喘动物模型,并在致敏、激发过程中分别经Hemin、SnPP处理。分别测定激发后各组动物血清OVA特异性IgE(OVA_SIgE)、支气管肺泡灌洗液(bronchialalveolarlavagefluid,BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS),结合病理切片分析气道炎症状况。结果OVA组、Heme组、SnPP组血清OVA_SIgE和BALF中细胞总数及EOS数明显高于正常对照组,但Heme组IgE水平及BALF中细胞总数和EOS数明显低于OVA组;而OVA组和SnPP组间IgE水平及BALF中细胞总数和EOS数差异无显著性;病理切片显示OVA组、Hemin组、SnPP组气道组织均以嗜酸性粒细胞浸润为主,但Hemin组气道炎症仍明显轻于OVA组和SnPP组。结论用Hemin诱导HO_1高表达后血清OVA_SIgE明显下降,气道炎症减轻,提示HO_1在支气管哮喘中具有抗炎作用。; 钟文伟孙健乐邵洁李云珠俞善昌夏振炜; 关键词：血红素加氧酶-1 哮喘炎症

大鼠HO-1表达质粒构建、活力检测及抗HUVEC凋亡的作用研究被引量：1: 2005年; 异种移植排斥反应的主要特征为内皮细胞发生Ⅱ型激活,引起黏附分子、细胞因子和前促凝分子等基因高表达,造成血管收缩、白细胞黏附、激活、聚集和血栓形成,最终导致内皮细胞凋亡。保护基因HO-1通过抑制前炎症反应及免疫调抑作用以保护异种移植器官。因此,通过构建含剪切的野生型大鼠HO-1 cDNA的表达型质粒,用DOTAP包裹转入HUVEC中表达,测定表达量及表达产物活性;采用TNF-α诱导细胞凋亡,以及Heme和SnPP分别刺激细胞,诱导和抑制细胞内HO-1表达量,流式细胞仪测定细胞凋亡率,明确HO-1的抗细胞凋亡作用。结果显示HO-1在HUVEC中高度表达,活力为对照组5倍;TNF-α诱导细胞凋亡,但Heme处理后细胞凋亡率下降至20%以下,而SnPP处理后细胞凋亡率显著上升,最高达到95%以上,并且HO-1基因表达抑制时细胞凋亡率是诱导时的5-20倍。本实验表明Heme处理后HO-1表达上调,具有显著抗细胞凋亡作用,细胞凋亡率与HO-1表达量呈负相关,提示HO-1通过抑制细胞凋亡,对细胞有保护作用。; 夏振炜齐奇张雪洪申庆祥李云珠俞善昌; 关键词：血红素加氧酶-1 肿瘤坏死因子-Α 血红素细胞凋亡抗细胞凋亡质粒构建

血红素加氧酶-1介导CD4^+CD25^(High)调节性T淋巴细胞拮抗哮喘气道炎症的实验研究被引量：5: 2006年; 探讨血红素加氧酶-1(HO-1,hemeoxygenase-1)介导CD4+CD25High调节性T淋巴细胞(Treg,regulatoryTcells)拮抗哮喘气道炎症的作用.用卵清蛋白(OVA)致敏、激发小鼠制备并建立哮喘动物模型,并在致敏、激发过程中经氯化高铁血红素(Hemin)或锡-原卟啉(SnPP,Sn-protoporphyrin)处理.分别测定激发后各组动物血清OVA特异性IgE,支气管肺泡灌洗液中(BALF,bronchialalveolarlavagefluid)细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS,eosinophil)数及外周血CD4+CD25HighTreg细胞变化和肺组织HO-1和Foxp3mRNA表达量,结合病理切片分析气道炎症状况.结果显示:OVA组、Hemin组、SnPP组血清OVA-特异性IgE和BALF中细胞总数及EOS数明显高于正常对照组,但Hemin组IgE水平及BALF中细胞总数和EOS数明显低于OVA组;而OVA组和SnPP组间IgE水平及BALF中细胞总数和EOS数无显著性差异;病理组织学显示OVA组、Hemin组和SnPP组气道组织均见EOS浸润,但Hemin组气道炎症仍明显轻于OVA组和SnPP组;Hemin组外周血CD4+CD25HighTreg细胞比例及肺组织Foxp3mRNA相对表达量明显高于OVA组.Hemin显著上调HO-1表达.实验表明,用Hemin诱导HO-1高表达后外周血CD4+CD25HighTreg细胞比例及Foxp3mRNA相对表达量明显升高,同时血清OVA特异性IgE明显下降,BALF中细胞总数和EOS数减少,气道炎症减轻;提示HO-1可通过提高CD4+CD25HighTreg细胞比例并增强其功能来调节体内Th1/Th2平衡,在支气管哮喘中起到保护作用.; 钟文伟孙健乐邵洁申庆祥李云珠俞善昌夏振炜; 关键词：血红素加氧酶-1 哮喘炎症 CD4^+CD25^HIGH FOXP3

制备hHO-1突变体以降低胆红素水平实验研究: 2005年; 目的制备人血红素加氧酶_1(humanhemeoxygenase_1,hHO_1)突变体,探讨酶的作用机制并应用突变体降低胆红素水平,为防治新生儿期高未结合胆红素血症的发生提供新途径。方法采用PCR方法制备hHO_1His25Ala突变体(hHO_1)cDNA,构建突变体表达载体pBHO_1(M)。野生型和突变体表达载体pBHO_1和pBHO_1(M)分别转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达目的蛋白。经30%～60%(NH4)2SO4盐析、Q_SepharoseFastFlow阴离子交换树脂分离纯化,并进行酶活性测定。结果构建的载体能分别表达产物,经30%～60%(NH4)2SO4盐析后纯度提高3.6倍,再经2次Q_SepharoseFastFlow阴离子交换树脂分离纯度提高30倍,酶活性测定显示,hHO_1较野生型hHO_1(whHO_1)活性下降了91.21%。结论hHO_1的第25位组氨酸在酶与底物血红素氧化反应中起着重要作用,制备的hHO_1能明显降低胆红素水平。; 夏振炜钟文伟李云珠俞善昌崔文俊周文普张雪洪; 关键词：血红素加氧酶-1 定点突变胆红素

hHO—1结构预测及突变体的构建、表达、纯化和活性检测: 2004年; 人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)是血红素代谢的限速酶,直接调节体内胆红素水平。利用软件SPdbv程序对hHO-1进行结构模拟预测,以Ala取代第25位His残基,hHO-1活性部位的结构有较明显的改变,但据模拟推测突变后hHO-1与血红素仍然具有结合性。依据模拟结果,构建野生型和突变体表达载体pBHO-1和pBHO-1(M),并分别转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经30%-60%(NH_4)_2SO_4盐析后纯度提高3.6倍,再经两次Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离则表达产物的纯度提高30倍。酶活性测定显示,突变体hHO-1(△hHO-1)较野生型hHO-1(whHO-1)活性下降了91.21%。本研究显示hHO-1的第25位His在酶与底物血红素氧化反应中起着重要作用,为有效调控酶活性发挥其生物学作用提供依据。; 夏振炜崔文俊周文普张雪洪申庆祥李云珠俞善昌; 关键词：DH5Α 胆红素水平活性部位人血突变体 IPTG

血红素加氧酶-1抗人血管内皮细胞凋亡的实验研究被引量：2: 2005年; 目的转染pcDNA3HO1入人血管内皮细胞（HUVEC）并表达，研究血红素加氧酶-1（HO-1）保护细胞凋亡的作用。方法将构建好的质粒用DOTAP包裹转入细胞中表达：用CCLR破碎细胞后，SDS-PAGE鉴定表达量，采用TNF-α诱导细胞凋亡，以流式细胞仪测定细胞的凋亡率；采用Hemin和SnPP，分别刺激细胞，促进和抑制HO-l在细胞中的表达。结果经Hemin处理后细胞的凋亡率均在20％以下，而SnPP处理后细胞的凋亡率大幅上升，最高可达到95％以上。实验数据显示HO-1基因表达被抑制时细胞凋亡率是诱导时的5～20倍。结论细胞凋亡率与质粒转染效率和HO-l表达量均成反比，提示HO-l对细胞有保护作用，可以抑制细胞凋亡，存临床具有广泛的应用前景。; 齐奇周文普张雪洪徐宇虹夏振炜; 关键词：血红素加氧酶-1 肿瘤坏死因子-Α 血红素细胞凋亡

血红素加氧酶-1可能经诱导foxp3^+CD4^+CD25^+ Treg细胞抑制哮喘气道炎症被引量：1: 2007年; 血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)作为体内保护蛋白,在哮喘气道炎症中具有显著的抗炎作用.foxp3^+CD4^+CD25^+ T调节细胞(Tregulatory cells,Treg)是调节性细胞的主要组成部分,以抑制的方式调控其他效应细胞的活性和功能.IL-10是多种细胞分泌的抗炎细胞因子,具有免疫抑制功能.本研究探讨HO-1诱导foxp3^+CD4^+CD25^+ Treg,增加IL-10分泌以拮抗哮喘气道炎症.选用磁珠分离CD4^+CD25^+ Treg,含HO-1质粒转染或血红素(Hemin)和锡-原卟啉(Sn-protoporphyrin,SnPP)处理,RT-PCR和Western blot方法检测显示Hemin上调HO-1表达,CD4^+CD25^+ Treg foxp3表达及蛋白水平显著增加,ELISA方法测定上清液IL-10水平明显升高.卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发的哮喘小鼠,Hemin上调HO-1表达,肺和脾脏中foxp3表达及蛋白量亦增加,血清IL-10增高,而OVA特异性IgE水平降低.肺病理组织学检测、支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)计数均显示炎性细胞尤其是EOS浸润减少;CD4^+CD25^+ Treg功能抑制实验发现,OVA致敏、激发Balb/C小鼠经Hemin干预后,抑制作用显著增加;SnPP能逆转HO-1作用.IL-10剔除的B6.129P2-Il10^(tm1Cgn)/J小鼠Treg抑制作用经Hemin干预后仍未改善.但体内外实验发现TGF-β水平无变化.本研究表明:HO-1可能经诱导CD4^+CD25^+ Treg特异性转录因子foxp3表达,激活CD4^+CD25^+ Treg,促进IL-10分泌,以拮抗哮喘气道炎症.; 须丽清钟文伟李宁丽邵洁李云珠俞善昌夏振炜; 关键词：血红素加氧酶

血红素加氧酶1延长异种心脏移植存活的机制研究被引量：2: 2006年; 探讨血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在器官移植中抗急性血管排斥反应的作用。通过建立豚鼠到SD大鼠异位心脏移植模型,用血红素(hemin)分别诱导供者和受者,上调HO-1基因表达;用眼镜蛇毒因子、环孢素A抑制超急性排斥反应;观测供者心脏存活时间,并分别检测心脏组织HO-1表达、受者血清异种抗体IgM的变化及异种抗体IgM和C3在血管内膜的沉积;采用TUNEL方法检测心脏组织细胞凋亡;RT-PCR方法测定组织CD40L mRNA表达水平。结果显示:上调HO-1表达能明显延长心脏移植存活时间,抑制异种抗体IgM表达和在血管内膜的沉积,减少心肌细胞的凋亡并且抑制CD40L mRNA的表达。该结论表明HO-1通过介导CD40-CD40L共刺激途径抑制大鼠异种心脏移植后急性血管排斥反应,延长心脏移植存活时间。; 孙健乐钟文伟邵洁周光文李云珠俞善昌夏振炜; 关键词：血红素加氧酶1 异种移植凋亡共刺激分子

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国家自然科学基金(30170988)

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