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神经母细胞瘤细胞生物学检测和荷瘤鼠模型的建立被引量：2: 2005年; 目的用新鲜肿瘤组织,建立原发瘤的神经母细胞瘤体外细胞系和不同浓度的细胞悬液,制作荷瘤鼠模型,并建立起鼠神经母细胞瘤体外细胞系。方法取新鲜肿瘤标本,用酶消化法,建立体外细胞系和细胞悬液,进行生物学检测,接种于裸鼠(n=14)和SCID小鼠(n=3)后肢前下方的皮下及腹膜后。结果人神经母细胞瘤原发瘤体外细胞系建立成功。裸鼠(5/11)和SCID小鼠(n=2/3)荷瘤成功。结论建立神经母细胞瘤细胞系和动物模型对于研究其转基因诱导分化、神经母细胞瘤的分子生物学特征及其肿瘤自消机制打下了良好的基础。; 郝希伟董蒨鹿洪亭; 关键词：神经母细胞瘤荷瘤鼠动物模型细胞悬液细胞生物学

ATRA诱导神经母细胞瘤细胞分化的实验研究: 2003年; 目的　观察不同浓度全反式维甲酸 (ATRA)体外对自建神经母细胞瘤 (NB)细胞系细胞增殖抑制和形态分化的影响。方法　取住院手术的 NB患儿的新鲜标本 ,进行原代细胞培养 ,并对培养的细胞进行分离与纯化 ,建立细胞系 ,作为细胞模型。通过台盼蓝拒染计数活细胞 ,用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化。结果　 5 μm/ L、2 0 μm/ L ATRA作用 NB细胞后 ,细胞形态发生显著变化 ,并对体外增殖有抑制作用。结论　所建立的 NB细胞系为可诱导分化型 (即 N型 ) ,ATRA能抑制细胞增殖并诱导其分化 ,而且有剂量依赖关系 ;5 μm/ L ATRA对 NB细胞体外增殖有抑制作用并诱导其分化。; 鹿洪亭董蒨; 关键词：神经母细胞瘤细胞分化全反式维甲酸原代细胞

神经母细胞瘤体外细胞系的构建方法被引量：7: 2004年; 目的　对神经母细胞瘤 (NB)进行体外培养 ,探讨神经母细胞瘤 (NB)体外建系的方法。方法　 NB患儿新鲜手术标本 ,采用组织块培养法、酶消化培养法建立原代细胞系 ;用选择性酶消化法和机械刮除法进行细胞纯化 ;从细胞形态学、神经特异性烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验三方面对细胞进行初步鉴定 ,证实所培养细胞是否为 NB细胞。结果　两种细胞培养法均可培养出 NB细胞 ,纯化后可得形态均一的细胞系。; 高强董蒨鹿洪亭罗兵吕振华孙丽荣; 关键词：神经母细胞瘤细胞系细胞培养体外培养

基质金属蛋白酶及其抑制因子与神经母细胞瘤侵袭转移的关系被引量：19: 2005年; 目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP) 2、MMP 9及其抑制因子 (TIMP) 2、TIMP 1与神经母细胞瘤侵袭转移的关系。方法　应用免疫组化SABC法检测 35例神经母细胞瘤标本中MMP 2、MMP 9及TIMP 2、TIMP 1的表达情况 ,并比较其在无转移、局部转移及远处转移患者肿瘤组织中的表达程度。结果　在有局部转移的B组和远处转移的C组患儿中 ,MMP 2高表达者分别为 9例和 10例 ,相对于病灶局限的A组明显升高 (P <0 .0 5 )。MMP 9表达仅在A组和C组间有统计学意义 (P <0 .0 5 )。预后良好的A组TIMP 2的阳性表达程度最高 ,随着肿瘤进展表达程度逐渐减弱。各组间TIMP 1表达差异无统计学意义 (P =0 .36 5 2 )。结论　MMP 2、MMP 9的表达与神经母细胞瘤的侵袭转移有关 ,可促进肿瘤进展 ,而TIMP 2则抑制肿瘤细胞的侵袭转移。; 程瑜董蒨孙立荣杨传民江布先; 关键词：神经母细胞瘤 MMP-9 TIMP-2 TIMP-1 基质金属蛋白酶

ATRA诱导神经母细胞瘤细胞分化及TrkA表达的研究被引量：11: 2004年; 目的　观察全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)体外对神经母细胞瘤 (neurob lastoma ,NB)细胞增殖的抑制和可能的分子机制及NGF TrkA信号传导途径在NB细胞分化中的作用。方法　取本院住院 2岁男性NB患儿新鲜手术标本 ,进行原代细胞培养 ,并对培养细胞进行分离与纯化 ,建立细胞系 ,作为细胞模型。通过台盼蓝拒染法计数活细胞 ;观察ATRA干预前后细胞形态学变化 ;RT PCR分析TrkA表达情况。结果　ATRA作用NB细胞后 ,细胞形态发生显著变化 ,并可抑制细胞增殖 ,2d时TrkA表达增加 ,4d时出现TrkA表达的明显增加。结论　所建立的NB细胞系为可诱导分化型 ,即N型 ;≥ 5 μmol/L ,ATRA对NB细胞体外增殖有抑制作用并诱导其分化且表现剂量依赖关系 ;ATRA可诱导NB细胞分化成熟及TrkAmRNA表达水平增高 ,可能是ATRA体外诱导NB细胞分化逆转的分子生物学机制之一。; 鹿洪亭董蒨杨传民罗兵孙立荣; 关键词：全反式维甲酸神经母细胞瘤细胞分化信号传导

神经母细胞瘤荷瘤鼠模型建立的实验研究被引量：18: 2005年; 目的建立原发瘤的神经母细胞瘤体外细胞系,制作荷瘤鼠模型。方法术中取新鲜肿瘤标本,利用酶消化法,建立起体外细胞系,接种于裸鼠(N=11)和SCID小鼠(N=3)后肢前下方的皮下及腹膜后,接种2.5×107/ml的单细胞悬液0.5ml。结果人神经母细胞瘤原发瘤体外细胞系建立成功,现已传至第52代。裸鼠(5/11)和SCID小鼠(N=2/3)荷瘤成功,全身转移有明显恶液质体征的裸鼠2只,其余为接种局部肿瘤生长。结论建立神经母细胞瘤细胞系对于研究其转基因诱导分化、神经母细胞瘤的分子生物学特征及其肿瘤自消机制打下了良好的基础。; 郝希伟董蒨鹿洪亭吕振华孙立荣江布先; 关键词：神经母细胞瘤细胞系人神经母细胞瘤体外细胞系细胞系建立全身转移原发瘤

MMP-2、-9,TIMP-2、-1在神经母细胞瘤中的表达及临床意义被引量：9: 2003年; 目的检测基质金属蛋白酶MMP-2、-9及其抑制剂TIMP-2、-1在不同分期神经母细胞瘤中的表达,探讨它们在神经母细胞瘤浸润转移中的可能机制及在治疗中的指导意义。方法应用免疫组化SABC法检测35例神经母细胞瘤中MMP-2、-9及TIMP-2、-1的表达。结果 MMP-2在晚期(Ⅲ、Ⅳ期)神经母细胞瘤中的强阳性表达率为79.2％,相对于早期(Ⅰ、Ⅱ、ⅣS期)的18.2％明显升高(P=0.001<0.01)。MMP-9在晚期和早期的强阳性表达率分别为79.2％和36.4％,也具有统计学意义(P=0.017<0.05)。TIMP-2的表达与MMP-2负相关,在早期以强阳性表达为主,在进展期以弱阳性为主(P=0.027<0.05)。结论 MMP-2、-9可促进神经母细胞瘤的浸润转移,而TIMP-2对二者有抑制作用。; 程瑜董蒨江布先孙立荣; 关键词：神经母细胞瘤基质金属蛋白酶细胞外基质

转神经生长因子基因诱导神经母细胞瘤分化的研究被引量：3: 2005年; 目的　观察转染神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)基因诱导神经母细胞瘤 (neurob lastoma ,NB)细胞系的分化 ,探讨NGF在NB细胞分化中的作用。方法　取本院住院NB患儿新鲜手术标本 ,进行原代细胞培养并分离纯化 ,建立细胞系 ,作为细胞模型。通过脂质体法介导含有NGF基因的载体质粒转染NB细胞。倒置相差显微镜观察转染前后细胞的形态学变化 ;MTT法及有丝分裂指数测定细胞增殖的改变。结果　转染后的NB细胞表达较高水平的NGF ,细胞增殖受到抑制并发生形态学改变。结论　所建立的NB为可诱导型 ,即N型 ;转染NGF基因的NB细胞表达较高水平的NGF ;转染NGF基因的NB细胞系表现为增殖抑制和分化。; 高强董蒨吕振华李东侃江布先姜忠; 关键词：神经生长因子转基因神经母细胞瘤细胞系

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国家自然科学基金(30170974)