山东省科技发展计划项目(2010GSF10264)
- 作品数：23 被引量：43H指数：4
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- 相关机构：滨州医学院附属医院重庆医科大学滨州医学院更多>>
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- 同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病中的表达及其临床意义被引量：2
- 2013年
- 目的研究同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病(AL)患儿骨髓单个核细胞中的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测46例不同时期AL患儿HOXA9 mRNA的表达水平,以15例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿作为对照。结果 46例AL患儿(52份骨髓标本)HOXA9基因阳性表达率为63%,其中急性髓细胞白血病(AML)组阳性表达率(86%)明显高于急性淋巴细胞白血病(ALL)组(35%)及对照组(13%)(P<0.05);AML组HOXA9 mRNA表达水平明显高于ALL组及对照组(P<0.05)。HOXA9在各型儿童AML中表达不同,mRNA相对表达水平依次为:M5型>M4型>M1和(或)M2型,而在M3型中未检测到表达。HOXA9在AML患儿高危组中的阳性表达水平较高。AML患儿初治组HOXA9基因阳性表达率及mRNA水平明显高于缓解组和对照组(P<0.05),而缓解组与对照组比较差异无统计学意义;未缓解组HOXA9基因表达显著高于缓解组和对照组(P<0.05)。结论 HOXA9基因高表达与AL的发生相关;AML患儿HOXA9基因表达水平明显高于ALL患儿。HOXA9基因高表达者与白血病危险程度有关,且提示预后不良。因此,HOXA9基因有望成为儿童AL诊断、治疗及判断预后的一个靶点。
- 贾秀红朱立平李建厂王翠翠
- 关键词：急性白血病儿童
- RNA干扰Apollon基因逆转白血病K562细胞多药耐药被引量：4
- 2013年
- 背景与目的:Apollon基因在白血病等多种肿瘤内高表达。本试验通过构建高效干扰Apollon基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,探讨RNA干扰技术能否逆转人髓系白血病K562细胞多药耐药。方法:构建靶向Apollon基因真核表达载体pGPHI-GFP-Neo-Apollon,应用LipofectamineTM2000转染K562细胞,G418稳定筛选。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、细胞免疫荧光法分别检测重组载体稳定转染K562细胞后Apollon mRNA及蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐(MTT)、流式细胞术检测细胞转染前后对长春新碱(leurocristine,VCR)、足叶乙苷(etoposide,VP16)的敏感性及凋亡率的变化。结果:成功构建了pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体并在K562细胞内稳定表达的细胞克隆,经G418筛选后,重组载体能有效沉默Apollon的表达,Apollon mRNA及蛋白表达水平明显下降。MTT结果显示,基因干扰组细胞对VCR、VP16的敏感性明显增强,其半数抑制浓度(half-inhibitory,IC50)值分别为(0.144±0.018)mg/L、(17.336±3.571)mg/L,明显低于细胞对照组(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而转染阴性对照组细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能显著增强VCR和VP16对白血病K562细胞的诱导凋亡作用,提高K562细胞对化疗药物的敏感性,提示RNA干扰Apollon基因表达能一定程度逆转白血病细胞的多药耐药。
- 贾秀红孝飞飞李建厂
- 关键词：白血病RNA干扰多药耐药性K562细胞
- ShRNA靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨慢病毒载体介导短发夹RNA(shRNA,siRNA前体)靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖、凋亡和形态的影响。方法设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10基因的过表达质粒,将4条干扰质粒分别和过表达质粒共转染293T细胞,用Western blot检测出敲减效果最好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10);将U937细胞分为干扰组(lenti-shHOXA10)、阴性对照组(lenti-NC)和未处理组,通过流式细胞仪测定慢病毒对U937细胞的感染效率并用real-time PCR、Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用;瑞氏染色观察3组细胞形态上的变化;MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体。干扰组HOXA10 mRNA的沉默效率为(92.3±1.3)%,蛋白表达水平下降91.1%,干扰组细胞抑制率为(43.9±0.7)%,与阴性对照组、未处理组相比差异有统计学意义(P<0.05);瑞氏染色显示干扰组细胞核质比减小、核分裂相少见;干扰组细胞凋亡率为(27.1±1.4)%,显著高于阴性对照组的(19.4±1.9)%和未处理组的(5.5±1.3)%(P<0.05)。结论慢病毒载体介导的shRNA可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡,HOXA10基因有望成为白血病基因治疗的新靶点。
- 张艳君贾秀红李建厂徐酉华
- 关键词：HOXA10基因慢病毒RNA干扰U937细胞
- Apollon siRNA对慢性髓系白血病K562细胞株阿糖胞苷敏感性影响研究被引量：1
- 2014年
- 目的:研究小干扰RNA(RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞化疗敏感性的影响。方法:构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,经阳离子脂质体转染K562细胞,实验分为RNAi组、阴性质粒组、细胞对照组、Ara-C组和RNAi+Ara-C组5组,采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测干扰效果。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:RT-PCR结果显示,实验组Apollon mRNA的相对表达量为(27.622±0.057)%,与细胞对照组(89.770±0.028)%和阴性对照组(84.868±0.057)%相比明显降低,差异有统计学意义,F=57.573,P=0.012。细胞免疫荧光检测结果显示,实验组细胞Apollon蛋白的荧光强度为(15.96±1.71)%,明显低于细胞对照组(35.36±2.90)%和阴性对照组(34.97±2.65)%,差异有统计学意义,F=71.063,P=0.013。重组载体和(或)10μg/mL Ara-C作用于K562细胞24、48和72h后,RNAi组和RNAi+Ara-C组K562细胞增殖抑制率(IR%)明显增高,随着作用时间的延长,抑制效果越明显。流式细胞术结果显示,RNAi+Ara-C组细胞凋亡率为(30.816±1.06)%,明显高于细胞对照组(4.803±0.112)%、阴性对照组(4.566±0.205)%和Ara-C组(11.61±0.604)%及RNAi组(20.226±0.986)%,差异有统计学意义,F=138.57,P<0.001。结论:靶向Apollon RNAi联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,显著减少Ara-C使用剂量,明显提高了K562细胞对Ara-C的敏感性。
- 孝飞飞贾秀红李建厂
- 关键词：APOLLON阿糖胞苷K562细胞
- RNA干扰沉默HOXA9基因逆转U937细胞多药耐药被引量：4
- 2012年
- 目的采用小干扰RNA(siRNA)沉默HOXA9基因,探讨siRNA转染后人白血病细胞株U937能否逆转化疗药物的耐药性。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组:实验组(脂质体转染靶向HOXA9的siRNA)、细胞对照组(仅加等量细胞及培养基)和阴性对照组(脂质体转染阴性对照siRNA)。利用反转录(RT)-PCR法、蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、流式细胞术检测U937细胞转染前后对长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)的敏感性及凋亡率变化。结果靶向HOXA9的siRNA可有效沉默HOXA9的表达,HOXA9 mRNA及蛋白相对水平明显下降。siRNA转染后实验组U937细胞可明显增加对VCR、VP-16的敏感性,实验组细胞的半数抑制浓度值显著低于细胞对照组及阴性对照组(Pa<0.05)。流式细胞术检测结果表明,siRNA干扰后实验组细胞联合化疗药物较细胞对照组及阴性对照组细胞凋亡率显著增高(Pa<0.05)。而阴性对照组与细胞对照组之间差异均无统计学意义(Pa>0.05)。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默HOXA9基因表达,增加其对VCR、VP-16的敏感性,能逆转白血病细胞对化疗药物的耐药性。
- 朱立平贾秀红李建厂韩兆东
- 关键词：HOXA9RNA干扰U937细胞耐药
- RNA干扰抑制HOXA7表达能逆转白血病U937细胞多药耐药被引量：4
- 2013年
- 目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制同源盒基因A7(homeobox geneA7,HOXA7)表达,并探讨其对白血病U937细胞多药耐药的逆转作用。方法:将靶向HOXA7基因的特异性真核表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7)及阴性对照载体(pGPU6/GFP/Neo-shNC)分别转染U937细胞,G418稳定筛选。实验分3组:实验组(稳定表达pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7的U937细胞)、阴性对照组(稳定表达pGPU6/GFP/Neo-shNC的U937细胞)和空白对照组(U937细胞)。RT-PCR和蛋白质印迹法分别在mRNA和蛋白质水平检测各组细胞中HOXA7的表达情况。MTT法检测各组细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)和高三尖杉酯碱(homo harringtonine,HHT)的敏感性。FCM法分别检测Ara-C(10μg/mL)和HHT(0.5μg/mL)作用下各组细胞的凋亡情况。结果:实验组HOXA7在mRNA和蛋白质水平的相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。实验组Ara-C和HHT的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)较阴性对照组和空白对照组的IC50分别降低了3.5倍和8.5倍(P<0.05),提示实验组细胞对Ara-C和HHT的敏感性增加。实验组细胞分别经Ara-C(10μg/mL)和HHT(0.5μg/mL)诱导后,细胞凋亡率明显高于相同药物作用下阴性对照组和空白对照组的细胞凋亡率(P<0.05)。结论:RNAi抑制HOXA7表达能增强Ara-C和HHT对U937细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,在一定程度上可逆转白血病细胞的多药耐药性。
- 尹宝慧贾秀红李建厂
- 关键词：白血病同源盒RNA干扰多药U937细胞
- AML-SCID小鼠模型的建立及鉴定
- 2013年
- 目的筛选出高表达HOXA9、HOXA10基因的急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)细胞株,并建立AML模型,为研究HOXA9、HOXA10与AML的关系奠定基础。方法经RT-PCR检测HOXA9、HOXA10在U937、HL-60、NB4、Jurkat中的表达情况,筛选出高表达的细胞株;外周血瑞氏染色、骨髓流式细胞仪、脏器HE染色鉴定移植性U937人白血病重度联合免疫缺陷(Severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠模型。结果 HOXA9、HOXA10在U937中均高表达,在HL-60、Jurkat中不表达(或表达水平较低),NB4高表达HOXA10;U937细胞在濒死小鼠骨髓细胞所占的比例为(20.62±9.66%)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理检查发现U937细胞可浸润肝、脾、肺、肾器官。结论 U937高表达HOXA9、HOXA10,是研究HOXA9、HOXA10基因与白血病关系的合适细胞株,并成功建立U937-SCID人M5型急性髓性白血病模型。
- 贾秀红张艳君
- 关键词：HOXA9HOXA10U937SCIDBEIGE
- RNA干扰联合长春新碱对U937细胞体内外生长的影响被引量：1
- 2013年
- 目的从体外和体内两个方面探讨慢病毒载体介导小发卡shRNA(short harpin RNA,shRNA)靶向沉默同源盒A10(homeoboxA10,HOXA10)基因联合长春新碱(Vincristine,VCR)对U937细胞增殖和凋亡的影响。方法将U937细胞分为干扰(KD)组、阴性对照(NC)组、空白对照(BC)组,经West-ern blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用;MTT法检测各组细胞的IC50;流式细胞术(Flow cy-tometry,FCM)检测各组细胞的凋亡率;通过流式细胞仪分选出干扰组和阴性对照组绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)阳性的细胞,建立裸鼠AML皮下移植瘤模型(细胞活力>90%),计算干扰组的抑瘤率。结果流式细胞仪测得慢病毒对U937细胞的感染率>90%,干扰组HOXA10的蛋白水平为较BC组下降89.78%。下调HOXA10的表达水平可降低VCR对U937细胞的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50),提高VCR诱导的U937细胞凋亡率,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。体内实验:干扰组肿瘤组织增长受到抑制。结论慢病毒载体介导的RNA干扰下调HOXA10的表达水平可在体外和体内增强U937细胞对VCR的敏感度。
- 贾秀红张艳君李建厂徐酉华罗庆
- 关键词：HOXA10U937RNA干扰长春新碱
- 黄芪注射液对U937细胞增殖与凋亡的影响及相关机制的探讨被引量：7
- 2013年
- 目的研究不同浓度黄芪注射液对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法白血病细胞株U937随机分为实验组(分别采用不同浓度黄芪注射液62.5、125、250、500、1000μg/mL处理U937细胞)和对照组(不加黄芪注射液)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,FITC-PI双染法流式细胞术检测各组细胞的凋亡,Hoechst33258染色后荧光显微镜下观察各组细胞形态学变化;U937细胞加入1000μg/mL黄芪注射液后0 h、12 h、24 h、48 h,采用RT-PCR法检测c-myc、p27 mRNA的表达。结果与对照组相比,不同浓度黄芪注射液均能抑制U937细胞增殖,差异均具有统计学意义(P<0.05);不同浓度黄芪注射液均能诱导U937细胞凋亡,较对照组显著增多(P<0.05),黄芪注射液浓度为1000μg/mL时凋亡率可达(63±4)%;黄芪注射液作用于U937细胞,随时间延长,c-myc mRNA表达逐渐下降,p27 mRNA表达逐渐增强,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论黄芪注射液体外可有效抑制白血病细胞株U937增殖,并诱导其凋亡,其相关分子机制可能与下调c-myc基因和上调p27基因表达有关。
- 贾秀红尹宝慧李建厂
- 关键词：黄芪注射液白血病细胞增殖细胞凋亡白血病细胞株
- SOX4与白血病关系的研究进展被引量：1
- 2015年
- 白血病是多基因参与的造血系统恶性增殖性疾病,白血病相关致病基因及基因治疗是目前研究的热点.SOX4基因是SOX C亚族的成员之一,在肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、髓母细胞瘤等多种人体肿瘤的发生、发展中起重要作用.近年来研究发现,SOX4基因对白血病的发生、治疗及预后评估均有重要意义.该文就SOX4的结构和功能、在白血病中的表达、作用机制以及对白血病治疗和预后的影响等方面作一综述.
- 段培锋贾秀红
- 关键词：白血病
