江苏省农业科技自主创新基金(cx09)
- 作品数：34 被引量：215H指数：9
- 相关作者：何孔旺温立斌茅爱华倪艳秀张雪寒更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学连云港市农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建被引量：1
- 2011年
- 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。
- 张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀周俊明李彬王小敏郭容利俞正玉茅爱华吕立新
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7STX粘附
- 模拟不同pH降雨和施氮对水耕铁渗人为土酸化的影响被引量：4
- 2012年
- 室内模拟研究3个pH梯度降雨和3水平的施氮量对水耕铁渗人为土土壤酸化的影响。结果表明,不同pH降雨及施氮处理土壤的酸度累积量为4.73～15.57 mmol H+每柱,分别以pH 6.5降雨和不施氮处理、pH 2.5添加高氮量(N2)处理酸化速率为最低和最高,相同pH降雨处理下,致酸量随施氮量增加而上升;相同施氮下,不施氮处理土壤酸度累积随降雨pH降低而增加,但中施氮量(150 mg kg-1土)和高施氮量(300 mg kg-1土)下,pH 4.5处理土壤酸度累积量则小于pH 6.5处理;不同降雨及施氮处理NO3-淋溶致酸量为4.32～12.88 mmol每柱,NH+4淋溶消耗H+量为0.01～0.29 mmol每柱;正常酸沉降(pH 6.5)下,中施氮量和高施氮量处理致酸量都大于各梯度pH降雨的致酸量。以上结果表明,单施氮处理的致酸量大于单纯的酸沉降处理,而无论是降雨还是施氮,NO-3淋溶在加速土壤酸化进程中占主导作用。
- 张永春汪吉东曹丙阁许仙菊宁运旺沈其荣
- 关键词：降雨施氮量酸化
- 一个水稻巨胚新等位基因ge鉴定及分子标记开发被引量：6
- 2011年
- 巨胚米富含的γ-氨基丁酸(gamma-amino butyri cacid,GABA)具有缓解和预防血压上升的功效。本研究对江苏地方巨胚种质10217巨胚基因进行了克隆,发现其GE基因编码区有三个位点发生突变,第1090个碱基由C突变为G;第1302个碱基由T突变为G;第1467个碱基由G突变为A,提前形成一个终止密码子TGA。10217中ge基因是一个新的ge等位基因。本研究根据ge基因突变位点设计了一对共显性的CAPS标记GE-2,对10217/日本晴的F2分离群体进行分析后,证实GE基因突变导致了10217巨胚表型。本研究开发GE-2标记能区分GEGE、GEge和gege三种基因型,可直接用于ge基因的分子标记辅助选择育种和基因聚合育种。
- 张所兵秦根基林静方先文
- 关键词：水稻分子标记
- 我国长江流域PRRSV ORF3基因的遗传变异分析被引量：3
- 2011年
- 为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析。结果表明:所有分离毒株的ORF3基因均编码254个氨基酸,都属于美洲型PRRSV,推导的氨基酸同源性为84.6%～100%,与美洲型PRRSV VR-2332的同源性为85.0%～97.2%;与国内分离的高致病性PRRSV的同源性为86.6%～100%。根据ORF3基因的遗传进化分析,这些毒株可分为两个亚群,毒株HZ24与VR-2332及疫苗株亲缘关系较近,其他分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支。同时,该基因编码蛋白的抗原表位和抗原性也发生了变化。
- 李彬何孔旺温立斌茅爱华王小敏张雪寒倪艳秀周俊明肖少波陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3基因抗原分析
- 油菜MI CMS恢复基因近等基因系的构建与近等性分析被引量：5
- 2011年
- 以宁R7为恢复基因源,利用连续回交法构建以T78、T84和ZS9三个优异种质为遗传背景供体的近等基因系候选株系。于成熟期考察并比较候选株系农艺性状,同时采用SSR标记对候选株系进行PCR扩增估算遗传相似系数并进行聚类分析。农艺性状分析(t测验)表明,不同候选株系与其供体的农艺性状具有不同程度的相似性,株高和分支点高度的差异程度较其他性状高。采用75对SSR引物对21个候选株系PCR扩增共得到157个目的片段,发现三个遗传背景候选株系的平均遗传相似系数分别为0.86、0.92和0.98。农艺性状与SSR标记综合分析后,认为wh13、wh59和wh118分别为三个种质的最优近等基因系。综上表明,采用农艺性状比较与分子标记相结合分析近等性是一种有效的近等基因系的检测方法。中选近等基因系可用于恢复基因的定位及克隆。
- 龙卫华胡茂龙高建芹浦惠明陈松张洁夫戚存扣
- 关键词：油菜恢复基因
- 猪肺炎支原体p97黏附蛋白基因抗原表位片段的克隆与序列分析
- 根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC25934或NCTC10110)与168株P97基因序列进行同源性比较,设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序...
- 刘茂军邵国青冯志新熊琪琰王海燕王占伟白昀吴叙苏孙佩元甘源孔猛刘冬霞王丽刘冬阳
- 关键词：猪肺炎支原体克隆
- 文献传递
- EHEC O157：H7二重PCR的建立及应用被引量：7
- 2011年
- 建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rfbE为812 bp,fliC为625 bp。检测阳性临床样品检测敏感性可以达到10 cfu/g。检测24株非EHEC O157:H7大肠杆菌和15株非大肠杆菌,只有EHECO157:H7能够扩增出特异性的rfbE条带,EHEC O157:H7和EPEC O55:H7能够扩增出fliC。只有EHEC O157:H7能够同时扩增出rfbE与fliC 2条目的条带。从63份牛粪便样品中分离到4株EHEC O157:H7:生化试验表明4株EHEC O157:H7具有典型EHECO157:H7的生化特性;药敏试验表明4株EHEC O157:H7具有较为广谱的耐药性;rfbE序列分析与GenBank序列同源性介于97.3%～99.2%之间,fliC序列与GenBank序列同源性介于97.6%～100%之间;4株EHEC O157:H7对Balb/c小鼠的致病性有差异,EHEC O157:H728#和EHEC O157:H738#致病性强,EHEC O157:H73#和EHEC O157:H717#较弱。以rfbE和fliC为目的基因成功建立了二重PCR,敏感性和特异性良好,可用于临床样品的检测,提高细菌分离率。
- 李丽张雪寒何孔旺姜平赵攀登叶青栾晓婷温立斌倪艳秀周俊明吕立新郭容利俞正玉茅爱华李彬王小敏
- 关键词：O157:H7二重PCR细菌分离
- 不结球白菜小孢子胚胎发生过程及发育途径研究被引量：9
- 2012年
- 采用FDA荧光染色法对小孢子游离培养的发育过程进行了观察。结果表明:不结球白菜花粉母细胞减数分裂释放出的小孢子发育到单核靠边期及稍后时期染色最深、活力最强。多数游离小孢子培养经历的发育过程与合子胚相似,并且胚胎发育迅速,6～9 d产生大量球型胚,13 d开始出现子叶型胚胎。小孢子胚胎发育途径既有对称分裂并产生胚胎的途径(B途径),也有第1次不对称有丝分裂的方式;第1次不对称分裂后,既有营养细胞单独发育成胚的现象(A途径),也有营养细胞和生殖细胞共同发育成胚的现象(E途径),但未发现生殖细胞单独发育成胚的现象。
- 崔群香王倩李英侯喜林
- 关键词：不结球白菜小孢子胚胎发生
- 基于线粒体COⅠ基因序列分析家鸭系统发育关系被引量：12
- 2011年
- 根据北京鸭线粒体DNA(mtDNA)序列设计引物,对中国9个地方鸭和1个番鸭品种线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因序列进行PCR反应和测序,并从起始密码子开始分析了1 520 bp的序列。结果显示:所有家鸭个体在1 517位点出现1个T碱基缺失,番鸭与家鸭的mtDNA COⅠ基因碱基组成相似;9个鸭品种个体共检出11种单倍型,单倍型的多样度为0.856。聚类分析结果显示,所有家鸭品种间的遗传距离为0.001～0.002,种内平均值为0.001;番鸭与家鸭遗传距离为0.003～0.006。基于Kimura-2模型构建的系统发育进化树进行分析,发现所测定的鸭科物种个体大体分为3类:家鸭与栖鸭属的番鸭聚为第1类,应属于鸭亚科;雁属的白额雁、灰雁与天鹅属的黑天鹅聚为第2类,应属于雁亚科;鹊雁与中国骛一起聚为第3类,应属于鹊雁亚科。上述结果表明,基于COⅠ基因条形码,在亚科阶元上,所有鸭科物种分类与以往分类结果是一致的。因此,使用DNA条形码鉴定物种系统发育关系时,需考虑阶元划分标准。
- 虞德兵陆应林徐昊翔徐善金熊锴王伟兰杜文兴王林云
- 关键词：DNA条形码线粒体
- 小豆新品种苏红2号选育及高产栽培技术研究被引量：6
- 2011年
- 红小豆是我省的传统出口产品,具有栽培和生产的悠久历史。由于近年来种植结构的调整,红小豆产量低、效益差、品种杂,导致其种植面积逐渐下降,生产效益也日趋降低。为此,选育优质、高产的红小豆品种,提高我省红小豆产量,具有十分重要的意义。苏红2号是江苏省农业科学院蔬菜研究所最新选育的红小豆新品种,2011年1月通过江苏省鉴定,该品种具有高产、优质、抗病等优点。现将该品种的选育过程、主要特征特性、高产栽培技术作一介绍,供广大科技工作者参考。
- 张红梅顾和平陈新袁星星崔晓艳陈华涛
- 关键词：小豆栽培技术
