国家自然科学基金(30170962)
- 作品数：9 被引量：69H指数：6
- 相关作者：刘小林朱家恺向剑平胡军江长青更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学北京大学深圳医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 猕猴骨髓基质干细胞体外培养及其生物学特性的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 通过体外分离、培养猕猴骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,研究其生物学特性、表面标志和遗传学性能 ,为BMSCs用作组织工程化神经种子细胞提供研究基础。 方法 通过密度梯度离心分离猕猴BMSCs ,体外培养、扩增 ,用倒置相差显微镜进行形态学的观察 ,通过绘制生长曲线、计算克隆形成率来研究细胞的活力和增殖能力 ,流式细胞仪检测表面标志 ,核型分析反应遗传学性能。 结果 密度梯度离心的方法能获得较纯的猕猴BMSCs ,第 7代以前的细胞有较强的活力和增殖能力 ,具有与人的BMSCs相似的形态和表面标志 ,体外培养第 10代细胞仍稳定为二倍体核型。 结论 用本实验方法能较容易地获得大量的猕猴BMSCs ,具有与人的BMSCs相似的形状和表面标志 ,第 3～ 6代的细胞可满足以猕猴为动物模型的组织工程化神经种子细胞的研究要求。
- 胡军刘小林朱家恺邓宇斌向剑平王建云邹一丰
- 关键词：猕猴骨髓基质干细胞神经缺损
- 构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究被引量：7
- 2005年
- 目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs+去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs+去细胞同种异体神经支架;C组:自体BMSCs+PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学、神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、C三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源SCs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。
- 胡军刘小林朱庆棠许扬滨朱家恺
- 关键词：周围神经神经移植猕猴
- 人体去细胞神经的制备、检测与初步应用
- 目的:建立去除人体长段粗大神经组织中的细胞和髓鞘的方法,研究人体周围神经去除细胞后的形态结构、力学性能以及异种移植时的组织反应,探讨人体去细胞神经用于构建组织工程化神经的优越性。方法:取3例人体新鲜截肢标本的胫神经分别作...
- 朱庆棠朱家恺刘小林赖英荣江长青杨光诗胡军王和庚
- 文献传递
- 体外诱导猕猴骨髓基质干细胞向雪旺细胞分化被引量：12
- 2004年
- 目的探讨体外诱导猕猴骨髓基质干细胞向雪旺细胞分化的实验方法。方法采用BME、b-FGF、ATRA、BDNF、heregulin、Forskolin、PDGF依次联合诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,免疫细胞化学鉴定S-100蛋白、GFAP和P75受体的表达率。结果诱导后的猕猴骨髓基质干细胞具有类似雪旺细胞的形态,免疫细胞化学结果显示S-100蛋白、GFAP和P75受体的表达率分别为(66.8±4.6)%、(57.3±5.4)%和(72.4±5.9)%。结论采用BME、ATRA、BDNF、heregulin、Forskolin、b-FGF、PDGF依次联合诱导,可使猕猴骨髓基质干细胞在体外向雪旺样细胞分化。
- 胡军刘小林朱家恺邓宇斌向剑平易建华原清涛
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞分化雪旺细胞猕猴周围神经缺损
- 猕猴组织工程化周围神经移植物的实验研究被引量：5
- 2005年
- 目的评价利用化学萃取法获得的神经支架制备猕猴组织工程化周围神经移植物修复40mm尺神经缺损的效果。方法共使用成年猕猴9只,随机取其中的6只,培养自体雪旺细胞,应用已经制备好的去细胞神经为支架材料构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经的40mm缺损。实验分实验组,空白组。正常对照组3组。术后5个月通过形态学,肌电检测和免疫组织化学方法观察。结果3组均未发现猕猴双手有糜烂或溃疡形成,猕猴小鱼际肌群的饱满度和弹性于术前无明显差别。实验组与正常对照组间小鱼际肌群的运动动作电位潜伏期,最大振幅及再生神经纤维的数目差异均无统计学意义(P＞0．05)。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义(P＜0．05)。结论用自体源雪旺细胞微注入去细胞同种异体神经支架构建的组织工程化神经移植物修复猕猴40mm的尺神经缺损,可取得与自体神经移植相似的效果。
- 江长青胡军向剑平朱家恺刘小林
- 关键词：周围神经化学萃取
- 改良法体外诱导骨髓基质干细胞分化为类许旺细胞被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨一种较为有效的诱导方法将骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为类许旺细胞。 方法 用Dezawa所述方法 (称为传统诱导法 )加以改良成将所有诱导剂一起联合半量间隔诱导两次的方法 (称为改良诱导法 ) ,诱导后的细胞从形态学、抗S 10 0和抗GFAP细胞免疫化学染色的阳性率、MTT细胞活性测定及流式细胞仪检测细胞DNA含量来比较此两种方法对细胞的综合作用。 结果 改良法诱导的细胞在形态上更具有许旺细胞的长梭形外观 ,抗S 10 0及抗 GFAP阳性率分别由5 8 1%和 60 3 %提高到 79 4%、81 2 % (P <0 0 5 ) ;MTT法细胞活性测定表明改良法对细胞活性影响小(P <0 0 1) ;流式细胞仪DNA含量测定显示S期DNA含量较高 (P <0 0 5 )。 结论 改良法体外诱导骨髓基质干细胞为类许旺细胞具有诱导效果更好 ,对细胞损害小的优越性。
- 王建云刘小林朱家恺邓宇斌向剑平李佛保
- 关键词：改良法体外诱导骨髓基质干细胞细胞分化类许旺细胞MTT法
- 可降解组织工程化神经支架的研制
- 目的:研制一种具有仿天然周围神经结构的可降解高分子支架,为构建组织工程化神经打基础。方法:以乙醇酸、乳酸为原料,分别合成乙交酯(GA)和丙交酯(LA),在辛酸亚锡催化下开环聚合成聚(乳酸-co-乙醇酸)共聚物——PLGA...
- 朱庆棠朱家恺刘小林赖英荣全大萍卢泽俭
- 文献传递
- 猕猴去细胞同种异体神经体内移植的组织学观察
- 2010年
- 目的观察去细胞同种异体神经体内移植后组织形态学改变，寻找合适的人工神经支架材料。方法共使用成年猕猴9只，随机取其中的6只，培养自体Scs，应用已经制备好的去细胞神经为支架材料，体外构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经40mm缺损。分实验组、空白组、正常对照组3组。术后5个月取材，观察大体形态、HE染色、免疫组织化学染色及组织形态学改变。结果3组移植物表面均有不同程度的血管化，HE染色均有细胞核和髓鞘的蓝染成份出现，NF免疫组织化学染色后，均有淡黄色神经微丝出现。实验组、正常对照组效果相似，它们均优于空白组、实验组，正常对照组再生神经纤维的数量差异均无统计学意义（P〉0．05）。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论去细胞同种异体神经具有良好的生物相容性和促进神经再生能力，是最具应用前景的神经修复材料之一。
- 江长青向剑平朱家恺刘小林
- 关键词：周围神经化学萃取组织学
- 去细胞组织工程化神经支架的制备与形态学研究被引量：31
- 2004年
- 目的 探讨如何去除人类长段粗大神经中的细胞。为构建人类组织工程化神经提供具有仿生结构的支架。 方法 取 4段长 10cm、直径 6mm人的胫神经 ,其中 3段用 3 %三硝基甲苯和4%脱氧胆酸钠分别萃取 1、2和 3次 ,在萃取神经和未萃取神经的中段取材 ,行HE染色、砂罗铬花青染色和S 10 0免疫组化染色 ,在光镜和电镜下观察神经萃取前后形态学的变化。 结果 用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后 ,胫神经内的细胞消失 ,而纤维性支架结构与未经萃取的神经相仿 ,电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成。随着萃取次数的增加 ,神经内残留的S 10 0蛋白显著减少 ,但反复萃取后神经的支架结构受破坏。 结论 用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除人体长段、粗大神经的细胞而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构 ,可能是制备具有仿生结构的人类组织工程化神经支架较为理想的方法。
- 朱庆棠朱家恺赖英荣江长青杨光诗胡军刘小林
- 关键词：神经支架形态学神经移植体
- 消化法培养成年猴许旺细胞被引量：6
- 2004年
- 目的 探讨猴许旺细胞在标准条件下的培养、扩增与传代。 方法 根据Wallerian变性后许旺细胞增殖的原理 ,利用双酶消化法及阿糖胞苷 (Ara c)抑制成纤维细胞生长分裂的方法获取许旺细胞。用S 10 0抗体鉴定所培养的细胞并用MTT法检测这些细胞的增殖能力。 结果 猴许旺细胞培养 15d后可达 5× 10 6,纯度为 92 % ,MTT测定证实该细胞生长良好。 结论 神经预变性后 ,通过消化法和Ara c处理能获取量大纯度高、活力良好的许旺细胞 ,可用于组织工程化人工神经的种子细胞。
- 易建华刘小林朱家恺向剑平王建云
- 关键词：消化法许旺细胞细胞培养阿糖胞苷MTT法人工神经
