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Discrimination of Goatpoxvirus and Sheeppoxvirus by Digestion of p32 Gene with Hinf I and Sequence Alignment of GpCR Gene: 2010年; To discriminate goatpoxvirus (GPV) and sheeppoxvirus (SPV), the p32 genes and G-protein-coupled chemokine receptor (GpCR) genes amplified from three SPV field isolates and two GPV field isolates were sequenced and compared with the corresponding sequences deposited in GenBank. Comparison of Hinf I restriction enzyme sites of p32 genes showed that there were two sites located at 391 and 691 bp, respectively, among all the SPV strains, and one site at 688 bp among GPV strains. Cladogram generated by sequence alignment of GpCR genes showed that the SPV and GPV belonged to two different branches. These results indicate that p32. and GpCR genes can be candidates used for discrimination of GPV and SPV.; YAN Xin-minZHANG QiangWU Guo-huaLI JianZHU Hai-xia; 关键词：DISCRIMINATION

羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析被引量：21: 2010年; 为了确诊疑似羊传染性脓疱病例,分析羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)的分子特征,作者以湖北某羊场疑似传染性脓疱病料为对象,进行了电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果在电镜下观察到ORFV样粒子,切片HE染色可见有炎性细胞浸润,自病料中扩增出特异性目的ORFVB2L基因片段(GenBank序列号GU320351)。结果表明该病例为黑山羊传染性脓疱病毒引起,序列遗传进化分析表明该病毒和2007年分离于中国台湾的毒株(DQ904351)遗传关系最近,和印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的ORFV同属于一个进化分支。本研究为ORFV分子流行病学研究积累了资料。; 张克山何继军尚佑军郭建宏郑海学田宏靳野刘永杰王光祥刘湘涛; 关键词：羊传染性脓疱病毒分子特征分析

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的表达及反应原性鉴定: 2009年; [目的]研究口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的表达及反应原性鉴定。[方法]以含有FMDV 3ABC基因的质粒为模板,应用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因并进行序列测定,将3AB基因克隆至表达载体pET-28a(+),选取阳性克隆转化BL21感受态用IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE鉴定与W estern-bolt检测分析。[结果]经SDS-PAGE和W estern-bolt分析表明,在大肠杆菌中成功表达了3AB蛋白,表达的目的蛋白能与FMDV阳性血清发生特异性反应。[结论]该项研究为应用以重组FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫动物的鉴别诊断方法提供了依据。; 孙靖向华靳野蔡建平王贵平尚佑军宣华刘湘涛; 关键词：FMDV 非结构蛋白反应原性

Asia I型口蹄疫病毒中和表位与羊IgG重链恒定区的融合表达及免疫原性测定被引量：1: 2010年; VP1蛋白是口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）诱导机体产生抗病毒感染免疫的主要蛋白,含有病毒的若干中和表位。本研究设计和合成了由AsiaI型FMDVVP1蛋白136~160aa和198~211aa两个表位组成的重复串联表位的编码基因,并克隆了羊IgG重链恒定区编码基因。利用BamHI、EcoRI和XhoI位点将2个基因片段依次克隆到pPROExHTb载体,构建成重组质粒pPRO-FshIgG,将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,以IPTG诱导表达得到融合蛋白FshIgG。100μgFshIgG蛋白免疫豚鼠后刺激豚鼠产生了高效价的FMDV中和抗体,而且使这些免疫豚鼠在用200ID50剂量FMDV攻击时得到了完全保护。由此证明,羊IgG重链恒定区蛋白能够作为FMDV表位肽的载体,而融合蛋白FshIgG可成为一种口蹄疫表位疫苗候选物用于口蹄疫的预防。; 王景锋邵军军李菁高闪电独军政丛国正林彤常惠芸; 关键词：口蹄疫病毒抗原表位

小反刍兽疫病毒、A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：4: 2019年; 小反刍兽疫病毒(PPRV)是一种感染小反刍动物的急性接触性传染病,近年来在我国多个省份流行,对我国养羊业造成了巨大危害。口蹄疫病毒(FMDV)A型和O型疫情曾在我国多地暴发,今年仍零星发生。小反刍兽疫和口蹄疫均为A类传染病,也都是水疱性疾病,其临床症状极其相似。为建立一种检测并鉴别小反刍兽疫病毒和口蹄疫病毒的方法,针对小反刍兽疫病毒的F基因和口蹄疫的VP1基因,合成相应的引物,优化反应体系和扩增条件,建立一种同时检测小反刍兽疫病毒和A,O型口蹄疫病毒的方法。对建立的多重RT-PCR方法进行特异性和敏感性试验,结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法敏感性强,特异性良好,对小反刍兽疫病毒和A,O型口蹄疫病毒最低检出量分别为PPRV102copies/μL、A型FMDV102copies/μL、O型FMDV10copies/μL。本方法的建立对临床感染口蹄疫和小反刍兽疫病毒的家畜进行快速检测具有十分重要的意义。; 黄元袁淑英黄武廖任如王晓虎陈晶向华; 关键词：小反刍兽疫口蹄疫多重RT-PCR

FMDV P1基因在重组PRV的表达及实验免疫研究被引量：2: 2011年; 为获得FMDV的衣壳蛋白前体P1和P1与3C基因的重组伪狂犬病毒,并评价两重组病毒的免疫效果,进行了本项研究。将构建的重组转移质粒pIESZP1和pUTK3CP1,用脂质体转染预先感染0.1 MOI PRV的Vero细胞,经120 h培养收获病毒后,再分别用蓝斑筛选和BrdU加压筛选重组病毒3~5次。经过挑斑纯化、扩增培养后用PCR、IFA检测筛选表达的FMDVP1蛋白。用这2株病毒分别免疫BALB/c小鼠,通过SN和ELISA方法检测免疫小鼠的抗体水平。成功地获得了2株可以正确表达目的蛋白的重组伪狂犬病毒rPRVP1和rPRV3CP1。2株重组病毒均可诱导小鼠产生特异性抗FMDV抗体,两重组病毒各项免疫指标之间没有明显的差异。; 史秋梅高桂生向华李敏宣华; 关键词：口蹄疫病毒重组伪狂犬病毒 P1基因

胶体金标记免疫层析技术的最新应用进展被引量：21: 2010年; 胶体金标记免疫层析技术作为一种新型的免疫学快速诊断和检测技术,具有微量、特异、简便等特点,非常适合基层使用。笔者综述了免疫层析快速诊断试剂的历史、基本原理、制备方法及目前在医学检验和动物疫病诊断上的应用情况。; 林彤独军政丛国正邵军军高闪电常惠芸谢庆阁

一株Asia1型口蹄疫病毒的全基因组序列测定及比较分析被引量：2: 2008年; 参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对1株Asia 1型(简称As01)FMDV进行分段克隆及序列测定,将测序结果利用软件进行拼接。结果表明,该毒株的FMDV基因组[不含poly(C)]全长8 180 nt,其中编码区为6 987 nt,5'和3'非编码区(UTR)分别为1 078 nt和95 nt,3'UTR之后为20 nt的poly(A)尾巴。将As01株与其他FMDV参考毒株利用分子生物学软件进行多序列比对分析表明,As01株与Asia 1/Jiangsu/China/2005、Asia 1/Isrl/3/63、ZB/CHA/58等Asia 1型FMDV遗传进化关系较为密切,而与O型和A型FMDV遗传关系较远。; 李爽李勐高明春于力周国辉王君伟; 关键词：口蹄疫病毒基因组

Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立被引量：19: 2009年; 为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。; 林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸谢庆阁; 关键词：单克隆抗体胶体金免疫层析法

表达Asia 1型口蹄疫病毒P1-2A和3C基因的重组山羊痘病毒弱毒株的构建被引量：4: 2009年; 为构建表达Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A和3C基因的重组山羊痘病毒(GTPV)弱毒株,将Asia 1型FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因、蛋白酶3C基因、绿色荧光蛋白(EGFP)基因、痘苗病毒启动子(p7.5)相连,构建成一整体基因表达盒p7.5-EGFP-P12A3C。以GTPV胸苷激酶基因序列中的KpnⅠ酶切位点为插入位点,将整体基因表达盒插入转移载体骨架pUC119-TK中,构建GTPV转移载体pTK-p7.5-EGFP-P12A3C。将转移载体转染GTPV弱毒株AV 41感染的BHK-21细胞,转染后24 h就可见到绿色荧光,表明,成功获得了能表达目的蛋白的重组山羊痘病毒株TK-/EGFP+/FMDV P1-2A3C+/GTPV。; 张强鞠厚斌吴国华颜新敏李健朱海霞马维民郑海学朱彩珠才学鹏; 关键词：口蹄疫病毒山羊痘病毒胸苷激酶基因

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国家科技支撑计划(2006BAD06A17)

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