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国家科技支撑计划(2006BAD06A11): 作品数：42 被引量：303H指数：11; 相关作者：陈敏李伟杰康凯杜昕波赵耘更多>>; 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所中国兽医药品监察所山东农业大学更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科技资源平台项目国家科技基础条件平台建设计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

O型FMDVP1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达: 2010年; 为了构建O型FMDVP1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒并在BHK-21细胞中进行表达,本研究利用聚合酶链式反应(PCR)从阳性质粒pGEM-P12A克隆到P1-2A基因,将扩增产物纯化、双酶切后连接到pBudCE-IFN载体,构建重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A。重组表达质粒鉴定后,在脂质体介导下转染BHK-21细胞,用RT-PCR和直接免疫荧光试验分别检测P1-2A和IFN-γ在BHK-21细胞中的表达。RT-PCR检测显示,重组表达质粒转染细胞后P1-2A和IFN-γ基因成功转录出mRNA;免疫荧光试验表明目的基因在BHK-21细胞中获得了表达。结果证明,本研究成功构建了重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A并在体外进行了表达,这为研制抗FMDVDNA疫苗和IFN-γ的佐剂作用奠定了坚实基础。; 吴国华张强颜新敏侯俊玲赵志荀崔力凡李健朱海霞朱彩珠; 关键词：FMDV IFN-Γ基因共表达

口蹄疫病毒O、A、AsiaⅠ型定型诊断胶体金免疫层析方法的建立被引量：29: 2008年; 【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、AsiaI型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法(GICA)。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O、A、AsiaI型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/AF72and AsiaⅠ/China05抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。经试验条件优化,组装形成胶体金定型诊断试剂盒。【结果】本试验研制的口蹄疫定型试剂盒具有良好的灵敏度,可检测到7.8×104LD50(1﹕128倍稀释乳鼠毒)的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同,说明其有较好的重复性;特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原,如猪水疱病抗原(SVD)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)等病毒时无交叉反应;试剂盒对206份已知血清型田间及实验室样品的符合率试验,O、A、AsiaⅠ型和阴性样本的符合率分别为92.45%、91.66%、92.75%、100%定型准确率94.58%。试剂盒在4℃下可保存6个月。【结论】本试验研发的口蹄疫病毒胶体金定型诊断试剂盒是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。; 蒋韬梁仲陈涓何继军吕律马维民刘在新刘湘涛; 关键词：胶体金免疫层析法

应用PCR快速检测禽网状内皮增生症临床样本: 根据本实验室建立的检测网状内皮组织增生症病毒(REV)的PCR方法,对来自3个不同鸡群的16份网状内皮增生症疑似病例进行检测,结果有11份呈REV阳性扩增,从中随机抽取7份阳性扩增产物进行测序,并通过DNAstar软件分...; 宋丽汤承俞宁岳华; 关键词：网状内皮增生症 REV PCR; 文献传递

检测禽白血病病毒的荧光定量RT-PCR方法的建立及应用: gag基因是禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)的群特异性基因,根据GenBank中公布的gag基因的保守序列,按照real-time PCR引物的要求设计合成了1对引物,建立了基于SYBR ...; 李佳桃汤承岳华; 关键词：禽白血病病毒 GAG基因实时荧光定量RT-PCR; 文献传递

Discrimination of Goatpoxvirus and Sheeppoxvirus by Digestion of p32 Gene with Hinf I and Sequence Alignment of GpCR Gene: 2010年; To discriminate goatpoxvirus (GPV) and sheeppoxvirus (SPV), the p32 genes and G-protein-coupled chemokine receptor (GpCR) genes amplified from three SPV field isolates and two GPV field isolates were sequenced and compared with the corresponding sequences deposited in GenBank. Comparison of Hinf I restriction enzyme sites of p32 genes showed that there were two sites located at 391 and 691 bp, respectively, among all the SPV strains, and one site at 688 bp among GPV strains. Cladogram generated by sequence alignment of GpCR genes showed that the SPV and GPV belonged to two different branches. These results indicate that p32. and GpCR genes can be candidates used for discrimination of GPV and SPV.; YAN Xin-minZHANG QiangWU Guo-huaLI JianZHU Hai-xia; 关键词：DISCRIMINATION

菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌被引量：3: 2010年; 参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Biolog鉴定结果和Carter氏间接血球凝集试验结果相一致;而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌、猪链球菌和粪肠球菌的扩增均为阴性。; 李伟杰赵耘杜昕波康凯陈敏; 关键词：多杀性巴氏杆菌

利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型被引量：1: 2010年; 参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。; 赵耘杜昕波李伟杰陈敏康凯; 关键词：传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型

REV重组env蛋白间接ELISA诊断试剂盒的研制与应用: 1、前言鸡网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)群的反转录病毒引起的一群病理综合症。REV可侵害火鸡,鸡、鸭等禽类。主要引起易感动物免疫抑制、导致细胞免疫和体液免疫力下降、淋巴网状细胞增生为特征...; 李彦张文娟牛钟相; 文献传递

98株鸭源致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型的比较被引量：12: 2010年; 旨在调查鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷修饰酶耐药基因(AMEs基因)的携带情况,探讨耐药基因与氨基糖苷类抗生素耐药表型的相关性。对98株鸭致病性大肠杆菌采用了K-B法,选用氨基糖苷类抗生素链霉素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星、大观霉素和卡那霉素进行药敏试验,用建立的检测氨基糖苷类AMEs主要基因的四重PCR方法对上述菌株进行分子检测,并随机选取耐药基因ant(3″)-Ⅰa、aac(3)-Ⅱa和aph(3′)-Ⅱa各3个阳性扩增进行克隆测序,对药敏试验结果和基因检测结果进行比较分析。结果表明,98株鸭致病性大肠杆菌有67株对上述氨基糖苷类药物中的一种或多种耐药,耐药率为68.4%(67/98);有49株扩增出AMEs基因,AMEs基因的检出率为50%(49/98),其中ant(3″)-Ⅰa的检出率为30.6%(30/98),aac(3)-Ⅱa为13.3%(13/98),aph(3′)-Ⅱa为3.1%(3/98),ant(3″)-Ⅰa+aac(3)-Ⅱa为2.0%(2/98)、aac(3)-Ⅱa+aph(3′)-Ⅱa为1.0%(1/98),未检出aac(6′)-Ⅰb基因;序列分析结果表明,扩增产物与GenBank中的相应序列有很高的同源性(>99%);AMEs耐药基因与耐药表型的符合率为73.1%(49/67),符合率从高到低依次为大观霉素60%(3/5)、庆大霉素55%(11/20)、链霉素33.3%(22/66)、卡那霉素19%(4/21)、新霉素12.5%(1/8)、阿米卡星0%(0/3)。另外有4株细菌检测到相关耐药基因但耐药表型为敏感,而有22株耐药表型为耐药却未检测到相关耐药基因。鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因以ant(3″)-Ⅰa和aac(3)-Ⅱa两种为主,耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。; 于学辉黄兰杨晓农刘群; 关键词：致病性大肠杆菌氨基糖苷类多重PCR 耐药基因耐药表型

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学及免疫学的研究进展被引量：15: 2010年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒是严重危害世界养猪业的病原,其分子生物学及感染机制的研究,对猪繁殖与呼吸综合征的预防和控制非常重要。笔者对猪繁殖与呼吸综合征病毒的病原学特性、分子生物学特征、获得性免疫和免疫调节与逃避机制等方面进行了综述,以期为该病的深入研究提供参考。; 吴国华赵志荀张强; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学特征免疫学

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