国家自然科学基金(30571757)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
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- 肝脏抗原递呈细胞对同种异基因供体凋亡细胞的吞噬作用被引量：6
- 2006年
- 目的探讨输注供体凋亡淋巴细胞的转归和体内处置等情况。方法分离供体脾淋巴细胞,对其进行荧光标记和诱导凋亡,经免疫磁珠分离纯化后,以一定数量经尾静脉输注受体内。于不同时间点观察其在不同器官的分布。根据分布情况对相关器官组织对供体凋亡细胞的处理进行研究。结果供体凋亡细胞经静脉输注受体内后主要汇集于肝脏。结合肝脏的特殊生理和免疫学功能特点,以肝脏抗原递呈细胞为着眼点进行观察,发现受体肝脏抗原递呈细胞对供体凋亡细胞有活跃的吞噬作用,但存在差异。对供体脾淋巴凋亡细胞的吞噬作用中,肝窦内皮细胞占主要部分,库普弗细胞次之, 肝脏树突状细胞的比例最小。结论肝脏在供体凋亡细胞预输注诱导器官移植免疫耐受的现象中起了关键作用。肝窦内皮细胞和库普弗细胞是本研究中免疫耐受诱导反应的主要抗原递呈细胞,可以作为进一步免疫机制研究的主要对象。
- 汪艳高毅孙尔维陈忠华
- 关键词：淋巴细胞移植耐受抗原递呈细胞
- CFSE标记的淋巴细胞增殖实验检测方法的建立被引量：2
- 2008年
- 目的建立基于流式细胞术和活细胞荧光染料CFSE的淋巴细胞增殖、单向混合淋巴细胞实验的免疫学检测方法。方法分离单个核细胞,将反应细胞经CFSE染色后,分别加入不同的淋巴细胞增殖刺激物或与灭活的异基因淋巴细胞共培养。培养后细胞经流式细胞术检测标记细胞是否增殖,应用CD4-PE抗体检测增殖细胞中CD4阳性T细胞亚群比例,ModFit软件分析增殖动力模型。计算增殖CDI或PI指数。结果基于CFSE建立的淋巴细胞增殖实验,经不同刺激物或异基因抗原刺激后增殖指数明显升高,使用CD4-PE抗体进行再次标记后可以对增殖实验中CD4阳性淋巴细胞亚群的增殖进行评估。结论成功建立了基于CFSE标记淋巴细胞的增殖实验检测方法,该方法简单、实用、灵敏度高,可以取代3H或MTT用于不同条件、不同免疫刺激情况下淋巴细胞增值的检测或评估。
- 孙尔维袁小澎罗宇维陈忠华
- 关键词：增殖流式细胞术
- 标记后转输的凋亡细胞流式细胞术体内示踪方法被引量：2
- 2006年
- 目的探索一种可用于转输凋亡细胞体内示踪研究的方法。方法首先对分离所得活细胞进行(CFSE)荧光标记,再诱导细胞凋亡。将该细胞经静脉注射入受体后,采用流式细胞术和组织学荧光显微镜观察标记凋亡细胞在不同组织的动态分布。同时进行CFSE标记稳定性观察实验。结果CFSE标记凋亡细胞的阳性率高,荧光强度大,不会迅速衰减和外漏。流式细胞术检测可发现标记凋亡细胞在不同组织的动态分布。结论CFSE标记细胞后诱导凋亡,再经流式细胞术检测组织内细胞分布,必要时辅以组织学检测可以作为一种可靠、高效、经济的凋亡细胞体内示踪研究技术方法。
- 汪艳高毅孙尔维谢金敏张会迎陈剑波
- 关键词：CFSE流式细胞术细胞示踪凋亡
- 输入供体凋亡细胞对受体外周免疫耐受的影响
- 2009年
- 背景:预输注供者凋亡细胞能够诱导受者体内产生针对供者抗原发生的特异性免疫耐受,但其具体途径尚不清楚。目的:观察供体凋亡淋巴细胞输注后受体外周血细胞因子的变化。设计、时间及地点:细胞观察性实验,于2007-11/2008-05在南方医科大学附属珠江医院移植免疫实验室完成。材料:供体C57BL雄性小鼠14只,8～10周龄,受体Balb/c雄性小鼠50只,6～8周龄。方法:分离供体小鼠脾脏细胞,放置于紫外线灯距离20cm处的摇床上照射1h,紫外线诱导C57BL小鼠脾脏细胞凋亡。将受体Balb/c小鼠随机分为凋亡细胞组和活细胞组,分别将107个供体C57小鼠脾脏凋亡细胞、活细胞经尾静脉输注于受体小鼠。主要观察指标:输注后0,1,3,6,12h经心脏采血,Luminex技术液态芯片法检测外周血白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ、肿瘤坏死因子变化。结果:只检测到白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ5种细胞因子,其他细胞因子未测出。经紫外线诱导后小鼠脾脏细胞凋亡率达到93.86%。与0h相比,外周血中干扰素γ和白细胞介素10分别在输注活细胞后6h和3,6h明显升高,其他细胞因子无明显变化。与0h相比,输注凋亡细胞1,3,6,12h后,外周血中各细胞因子无明显变化。活细胞组输注后1h白细胞介素6和输注后3,6h白细胞介素10浓度高于凋亡细胞组,其他细胞因子差异不显著。结论:同种异源供者凋亡淋巴细胞输注对外周血细胞因子浓度无变化,提示其对受体外周免疫功能可能无明显影响,其诱导产生的免疫耐受可能主要在局部发挥作用。
- 夏武政孙尔维高毅袁小鹏罗宇维汪艳刘勇
- 关键词：同种异基因凋亡细胞免疫耐受外周血
- 环孢素A对小鼠体内调节性T淋巴细胞的作用及机制被引量：2
- 2009年
- 目的探讨环孢素A（CsA）对小鼠体内CD4^＋ Foxp3^＋调节性T淋巴细胞的作用及机制。方法选择雄性C57BL／6小鼠20只，随机平均分为两组。实验组小鼠腹腔注射环孢素A20mg·kg^-1·d^-1×2周；对照组小鼠腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液（PBS）×2周。2周后，两组小鼠在无菌条件下经眼球采集外周血，并分离脾脏和胸腺，制备单细胞悬液。采用流式细胞仪检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中的CD4^＋Foxp3^＋T淋巴细胞的比例。结果实验组小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞悬液中CD4^＋Foxp3^＋T淋巴细胞的比例分别为（0．581±0．089）％、（2．189±0．046）％和（O．472±0．049）％，对照组的比例分别为（1．751±0．227）％、（3．684±0．169）％和（1．412±0．188）％，两组间比较，差异均有统计学意义（P〈0．001）。结论CsA可以损害小鼠体内调节性T淋巴细胞的发育，从而减少调节性T淋巴细胞的数量。
- 严鸣光罗宇维孙尔维
- 关键词：环孢素AT淋巴细胞外周血
- 诱导恒河猴外周血淋巴细胞凋亡的研究被引量：4
- 2007年
- 目的研究诱导恒河猴外周血淋巴细胞凋亡的方法。方法采用高能X线、γ射线和紫外线照射法,诱导恒河猴外周血淋巴细胞凋亡。收集处理后的细胞,应用PI和FITCAnnexin-V进行标记,流式细胞计数仪检测。结果高能X线和γ射线照射恒河猴外周血淋巴细胞,诱导的凋亡率低;紫外线照射恒河猴外周血淋巴细胞诱导的凋亡率可达60%。小牛血清的浓度为10%,照射距离为20cm,照射60min时,其早期凋亡率为58.85%,晚期凋亡率为11.5%。凋亡细胞随剂量的增加及时间推移而增加,并表现出时效和量效关系。结论诱导恒河猴外周血淋巴细胞凋亡,紫外线法比高能X线和γ射线法敏感,效果好。紫外线照射的最佳条件是10%小牛血清的1640培养基,照射距离20cm,照射时间60min。
- 范礼佩孙尔维袁小澎卢晓王海琴刘占国李民赵明钟世镇
- 关键词：恒河猴淋巴细胞X线Γ射线紫外线凋亡
