国家自然科学基金(40576066) 作品数:11 被引量:32 H指数:5 相关作者: 陈清西 张继平 谢进金 王勤 杨学敏 更多>> 相关机构: 厦门大学 泉州师范学院 佛山科学技术学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部重点实验室开放基金 福建省泉州市科技计划项目 更多>> 相关领域: 生物学 化学工程 理学 轻工技术与工程 更多>>
过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制动力学 2006年 研究过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响及抑制动力学.其结果表明,过氧化氢对该酶有显著的抑制作用,随着过氧化氢浓度的增高,酶活力呈指数下降,测出可使酶活力下降50%的过氧化氢浓度(抑制半衰期,IC50)为115mmol/dm3.低浓度过氧化氢对该酶的抑制过程显示为可逆效应.采用底物反应动力学方法研究过氧化氢对该酶的抑制作用动力学并建立动力学模型,测定游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的微观抑制速度常数k+0和k′+0,并加以比较.实验结果(k+0>k′+0)表明底物对酶被过氧化氢的抑制作用有一定保护作用.过氧化氢可能是通过氧化酶活性中心功能基团而导致酶活性的丧失. 谢进金 林建成 张继平 颜雅雯 王勤 陈清西关键词:锯缘青蟹 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 过氧化氢 抑制动力学 抗菌类药物对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响 被引量:5 2007年 研究了几种抗菌类药物对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(简称NAGase,EC 3.2.1.52)活力的影响.其结果表明:链霉素、卡那霉素、青霉素钾、庆大霉素和磺胺嘧啶对该酶活力均没有明显的影响.头孢拉定对该酶有显著的激活作用,当其浓度为4.5mg/cm3时,可使酶活力提高200%.而氟哌酸和恩诺沙星对该酶均有抑制作用,其中恩诺沙星对该酶的抑制作用较强,随着抑制剂浓度增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为0.44mg/cm3.恩诺沙星对该酶的抑制作用类型表现为非竞争性可逆过程,抑制常数KI为0.35mg/cm3.该研究对锯缘青蟹的人工养殖具有一定的参考价值. 颜雅雯 张继平 王勤 谢进金 陈清西关键词:锯缘青蟹 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 抗菌类药物 酶活力 锯缘青蟹NAGase在DMSO溶液中的失活动力学 被引量:8 2006年 以二甲亚砜(DMSO)为效应物,研究其对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明,酶的剩余活力随着DMSO浓度增高而迅速下降,当DMSO浓度达4.0 mol/dm3时,酶活力几乎完全丧失.该酶在低于2 mol/dm3的DM-SO溶液中的失活作用表现为可逆过程.导致酶活力丧失50%的DMSO浓度(IC50)为0.75 mol/dm3.应用酶失活过程的底物反应动力学方法测定了游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在不同浓度DMSO溶液中的微观失活速度常数k+0和k+′0,k+0明显大于k+′0,说明游离酶较酶-底物络合物对DMSO更为敏感,底物对酶被DMSO失活有保护作用.随着DMSO浓度增加,逆向微观复活速度常数k-0不断下降,这说明NAGase在高浓度DMSO中失活的可逆性减弱. 张继平 陈清西关键词:N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 锯缘青蟹 二甲亚砜 失活动力学 Denaturation Kinetics of N-Acetyl-β-D-glucosaminidase from Scylla serrata in Urea Solution 2011年 N-Acetyl-β-D-glucosaminidase(NAGase, EC 3.2.1.52), which catalyzes the cleavage of N-acetylgluco- samine polymers, plays important roles in the molting, digestion of chitinous foods in green crab. In the study, the efforts of urea on the activity of NAGase purified from the viscera of green crab(Scylla serrata) have been studied. The results show that appropriate concentrations of urea can lead to reversible inactivation of the enzyme, and the value of the inhibitor concentration leading to 50% of enzyme activity lost(IC50) is estimated to be 0.63 mol/L. The inactivation kinetics has been studied via the kinetic method of the substrate reaction. The rate constants of inactivation have been determined. The value of k+0 is larger than that of k′+0, indicating the free enzyme molecule is more fragile than the enzyme-substrate complex in urea solution. It is suggested that the presence of the substrate offers the marked protection of this enzyme against inactivation by urea. LIN Jian-cheng LI Hua-liang CHEN Liang-hua YANG Xue-min WANG qin CHEN Qing-xi关键词:N-ACETYL-Β-D-GLUCOSAMINIDASE UREA 锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究 被引量:8 2006年 研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAGase EC 3.2.1.52)活力的影响,结果表明:随着甲醛浓度的增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的甲醛浓度(失活半衰期,IC50)为0.60 mol/L.酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活.用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学,测定游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在甲醛溶液中失活的微观速度常数,并比较游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的正向反应的微观失活速度常数k+0>k′+0,表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用.正向的失活速度常数k+0和k′+0随着甲醛浓度的增大而增大,而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小,表明随着甲醛浓度的增大,酶变性越来越快,而活力恢复越来越难. 谢进金 张继平 王勤 杨学敏 林建成 陈清西关键词:锯缘青蟹 甲醛 失活动力学 金属离子对锯缘青蟹NAGase活力的影响 被引量:9 2006年 本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.其结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有明显影响,Mg2+、Ca2+和Ba2+对该酶均有激活作用,激活程度依次为Ca2+>Ba2+>Mg2+.A l3+、Fe3+、Cd2+、Pb2+和Hg2+对该酶具有一定的抑制作用,2.0μmol/dm3的Hg2+可以使酶活力完全丧失.Co2+对酶的效应是先激活后抑制,Mn2+对酶仅有轻微的激活作用.Cd2+和Fe3+对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应,Cd2+的抑制常数KI和KIS分别为23.9、5.0 mmol/dm3,Fe3+的抑制常数KI和KIS分别为395.5、135.6μmol/dm3.KI>KIS,说明酶-底物络合物(ES)与抑制剂的亲和力比游离酶(E)与抑制剂的亲和力大. 杨学敏 谢进金 张继平 林建成 陈清西关键词:海洋生物 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 锯缘青蟹 酶活力 金属离子 丙酮对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响 被引量:4 2006年 以丙酮为效应物,研究其对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降,当丙酮浓度达25%,酶的剩余活力仅为20%,说明丙酮对青蟹NA-Gase有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的丙酮浓度为7.5%.在较低丙酮浓度(<10%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与丙酮的结合常数(KI和KIS),分别为4.06%和10.49%,KI 杨学敏 王勤 谢进金 张继平 林建成 陈清西关键词:锯缘青蟹 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 丙酮 失活作用 构象变化 氨基酸对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的效应 被引量:8 2006年 研究Gly、Ala、Val、LeuI、le、Pro、Phe、Met、Asn、Cys、Ser、Thr、Asp、Glu、His、Lys、Arg等17种氨基酸对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:非极性氨基酸中Gly、Ala、Leu、Phe对酶活力几乎没有作用,而ValI、le对酶略有激活,20 mmol/L的Val可以使酶活力提高7.5%,40 mmol/L的Ile可以使酶活力提高10.5%;Pro、Met对该酶略有抑制作用,当浓度为40 mmol/L时,分别可以使酶活力下降15.2%和9.8%;极性氨基酸Asn、Cys、Ser、Thr对酶的活力没有影响;带负电荷的酸性氨基酸Asp和Glu对酶有抑制作用;带正电荷的碱性氨基酸His对该酶略有抑制,Lys和Arg对该酶抑制作用较强.研究Lys和Arg对酶催化pNP-NAG水解反应的抑制机理,并测定其抑制常数,结果表明:Lys和Arg的抑制作用均表现为可逆效应,抑制类型均为反竞争性抑制,其KIS分别为5.29mmol/L和3.76 mmol/L. 林建成 谢进金 张继平 杨学敏 王勤 陈清西关键词:锯缘青蟹 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 氨基酸 不同季节锯缘青蟹内表皮N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与性质的比较 被引量:3 2009年 研究同一生长期不同季节的锯缘青蟹内表皮N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)的活力与部分性质.结果表明:锯缘青蟹内表皮NAGase活力变化的趋势表现出一定的季节性规律。在一年当中,酶活力较高的月份为10~12月·3月份的活力较低.然后活力逐渐升高。直至11月,活力达到最高.此后又逐渐减弱.研究该酶的基本酶学性质,在不同的季节表现都比较稳定.最适pH在5.6~5.8之间,pH稳定性维持在5.0~10.0,最适温度为45℃,温度稳定性的研究表明,在大于45℃的条件下酶活力逐渐丧失. 颜雅雯 王勤 石艳 王烨 谢进金 陈清西关键词:锯缘青蟹 NAGASE 产物及其类似物对锯缘青蟹NAGase酶活力的影响 被引量:5 2006年 以产物N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(NAG)及其类似物-葡萄糖(glu)、半乳糖(gal)、果糖(fru)和蔗糖(suc)为效应物,研究它们对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响及抑制作用机理.结果表明,上述效应物对酶均表现为可逆的抑制作用.NAG有较强的抑制作用,其IC50为0.011 mol/dm3.但产物类似物对该酶的抑制作用均弱于NAG.NAG对该酶的抑制作用机理表现为反竞争性抑制,抑制常数KIS为4.37×10-3mol/dm3;glu、gal、suc则表现为非竞争性抑制,抑制常数KI分别为0.125、0.394、0.474 mol/dm3;而fru则表现为竞争性抑制,抑制常数KI为0.455mol/dm3. 杨学敏 张继平 谢进金 颜雅雯 陈清西关键词:海洋生物 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 锯缘青蟹