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湖北省自然科学基金(2009CBB323)
作品数:
2
被引量:6
H指数:1
相关作者:
杨志芳
刘顺芳
殷茜
易继林
刘谨文
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相关机构:
华中科技大学同济医学院附属同济医院
华中科技大学
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发文基金:
湖北省自然科学基金
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相关领域:
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作者
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刘谨文
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易继林
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殷茜
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刘顺芳
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杨志芳
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李兴睿
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马小鹏
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1篇
2011
1篇
2010
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DJ-1 shRNA表达载体的构建及其稳定转染人肝癌细胞HepG2细胞株的建立
被引量:1
2011年
目的构建DJ-1 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人肝癌HepG2细胞株。方法合成DJ-1基因干扰序列,定向插入真核表达载体pGenesil-1质粒并测序鉴定;干扰质粒经脂质体介导转染人肝癌HepG2细胞,G418(450mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定转染的细胞株;荧光显微镜观察转染扩增效率;逆转录.聚合酶链反应(RT—PCR)和Westernblot检测稳定转染细胞株的DJ-1 mRNA和蛋白的表达。结果测序证明DJ-1干扰序列及读码框完全正确,G418筛选后扩增细胞中稳定转染扩增百分率高达75.00%。稳定转染细胞DJ-1 mRNA表达下调,DJ-1蛋白抑制率为98.78%(P〈0.05)。结论成功构建DJ-1 shRNA真核表达载体,DJ-1 shRNA质粒稳定转染HepG2细胞株的建立,为以DJ-1基因为靶点的人肝癌基因研究提供实验基础。
刘顺芳
刘谨文
易继林
杨志芳
殷茜
李兴睿
关键词:
DJ-1
RNA干扰
DJ-1 shRNA靶向逆转人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药性
被引量:5
2010年
目的探讨干扰癌基因DJ-1表达对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药性(multi-drug resistence,MDR)的影响。方法将构建的DJ-1 shRNA真核表达载体,用脂质体转染至人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM;用RT-PCR和Western blot法分别检测细胞MDR 1 mRNA和P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性。结果 DJ-1 shRNA靶向干预MCF-7/ADM细胞DJ-1表达后,DJ-1 shRNA组细胞MDR 1 mRNA和P-gp表达水平较空白与阴性对照组明显下降(P<0.0 1);细胞内Adriamycin浓度明显增加;细胞对Adriamycin的敏感性增强2.6 8倍。结论 DJ-1shRNA可降低乳腺癌MCF-7/ADM细胞的MDR,为研究逆转乳腺癌化疗耐药提供了新方法。
刘顺芳
刘谨文
杨志芳
殷茜
马小鹏
易继林
关键词:
DJ-1
乳腺癌
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