国家杰出青年科学基金(30725019)
- 作品数：30 被引量：38H指数：3
- 相关作者：王伟喻志源骆翔谢敏杰徐沙贝更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院石河子大学医学院第一附属医院更多>>
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- 阻断缝隙连接对局灶性脑缺血再灌注后海马迟发性神经元死亡及Bax表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨阻断缝隙连接对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马迟发性神经元死亡(delayed neu-ronal death,DND)及Bax表达的影响。方法术前2h左侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸(carbenoxolone,CBX),颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用TUNEL及免疫荧光技术,观察3d后海马DND及Bax表达水平的变化。结果缺血再灌注生理盐水有45%的大鼠出现海马DND;用CBX后仅30%的大鼠出现海马DND,机率明显减小(P<0.01);与假手术组比较,缺血再灌注中CBX组Bax的表达水平明显增高,但低于缺血再灌注生理盐水(P<0.01)。结论缝隙连接与局灶性脑缺血再灌注引起的海马DND有密切关系,其原因可能与缺血再灌注后凋亡启动信号由缺血再灌注区通过缝隙连接向远隔部位播散有关,Bax参与了海马神经元凋亡的调节。
- 易陈菊徐沙贝唐颖馨张强骆翔王伟
- 关键词：迟发性神经元死亡PAX
- 小鼠神经干细胞无血清培养方法的优化及其分化特点被引量：2
- 2010年
- 目的:优化小鼠神经干细胞(NSCs)无血清培养方法,观察其生长、增殖和分化特点。方法:分离出生后1～3d小鼠海马、室管膜下区组织细胞,采用无血清培养技术,分别以Neurobasal+B27培养液和DMEM/F12+N2培养液为基础培养基,添加bFGF、EGF,进行体外扩增培养、传代,比较2种培养条件下NSCs的增殖;免疫细胞化学法对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果:分离获取的细胞具有自我更新和增殖能力,原代及传代培养均可形成细胞克隆,与DMEM/F12+N2培养液相比,以Neurobasal+B27培养液为基础培养基可获得更多的NSCs克隆球,且细胞数量多(P<0.01),克隆中细胞Nestin表达阳性,显微镜下观察可见典型的NSCs特征,诱导后可分化为神经元和星形胶质细胞。结论:以Neurobasal+B27培养液为基础培养基可获得更多的NSCs,分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs,可诱导分化为终末神经细胞。
- 马俊芳谢敏杰喻志源王伟
- 关键词：神经干细胞细胞培养细胞分化小鼠
- 大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞Cyclin D1及Cyclin E的表达
- 2010年
- 目的:研究大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞细胞周期蛋白Cyclin D1及Cyclin E的表达差异及变化。方法:建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,双光源流式细胞术检测假手术组及缺血再灌注后1d、3d、7d、15d组大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cyclin D1及Cyclin E的表达。结果:假手术组大鼠星形胶质细胞表达Cyclin D1及Cyc-lin E,Cyclin E的表达高于Cyclin D1(P<0.05);局灶性脑缺血后,星形胶质细胞Cyclin D1的表达逐渐增加,7d及15d时高于假手术组(P<0.05);局灶性脑缺血后,星形胶质细胞Cyclin E的表达无明显变化,各组间比较差异无统计学意义。结论:局灶性脑缺血后星形胶质细胞Cyclin D1表达增强,提示Cyclin D1可能参与脑缺血后星形胶质细胞的活化增殖。
- 席青松朱丽霞王萍王晶陈华先王芳张琼王伟
- 关键词：CYCLIND1CYCLIN脑缺血星形胶质细胞
- 大鼠局灶性脑缺血后GABA_A受体亚基α2和α3在梗死对侧皮层表达的动态变化
- 2010年
- 目的研究大鼠大脑中动脉缺血再灌注后,梗死对侧皮层氨基丁酸A(GABAA)受体α2和α3亚基的表达变化。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,分为MCAO组(n=18)和假手术组(n=18),分别于术后7d、30d和6个月断头取脑,采用免疫组织化学技术检测各组中梗死对侧皮层GABAA受体亚基α2和α3的表达情况。结果 MCAO组大鼠与假手术组大鼠相比,在7d时梗死对侧亚基α2和α3在皮层各个脑区改变无明显差异(P>0.05);30d和6个月时,亚基α3在各个脑区均显著升高(P<0.05);30d时亚基α2在梗死对侧的Par1和Par2脑区表达增加(P<0.05);6个月时,梗死对侧亚基α2在Par1脑区表达增加而在Par2脑区表达降低(P<0.05)。结论大鼠大脑中动脉缺血再灌注后梗死塞对侧皮层GABAA受体亚基α2和α3发生了广泛而长效的变化,这种变化提示脑缺血后GABAA受体功能受损,GABAA受体的改变可能参与了缺血后突触的重塑和神经网络重建。
- 喻志源李杰刘仁刚王伟骆翔
- 关键词：Γ-氨基丁酸受体亚基脑缺血
- hGfap基因启动子介导的Cre重组酶在小鼠小脑中表达模式的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨以人胶质纤维酸性蛋白(hGfap)基因启动子介导的Cre重组酶在小鼠小脑中的表达。方法:将hGfapcre转基因小鼠与Rosa26R转基因鼠杂交得到hGfapcre/Rosa26R基因型小鼠,分别在胚胎12.5、13.5、14.5、16.5 d和出生后3周,取小脑组织切片行X-gal染色观察Cre重组酶分布;另外,出生后3周的小脑组织切片同时使用细胞种类特异性抗体Blbp(星形胶质细胞标记物)、NeuN(颗粒细胞标记物)、Calbindin(浦肯野细胞标记物)进行免疫组织化学染色鉴定X-gal染色阳性细胞类型。结果:胚胎13.5 d,小脑菱唇开始出现X-gal染色阳性细胞;此后Cre重组酶表达范围进一步扩大,至胚胎16.5 d,X-gal染色阳性细胞可覆盖整个小脑;在出生后3周,X-gal染色阳性细胞可以和Blbp及NeuN共标记,和Cal-bindin不能共标记。结论:以hGfap基因启动子介导的Cre重组酶最早在胚胎13.5 d的菱唇开始表达,并且Cre重组酶主要表达于星形胶质细胞(包括Bergmann胶质细胞)和颗粒细胞,不表达于浦肯野细胞,表明在小脑发育过程中以GFAP为标记物的胶质细胞主要向星形胶质细胞(包括Bergmann胶质细胞)和颗粒细胞分化,不向浦肯野细胞分化。
- 王席娟郭志宝王伟常立文
- 关键词：细胞分化胶质纤维酸性蛋白CRE重组酶
- NPPB对低渗条件下小胶质细胞炎性分泌的影响
- 2010年
- 目的观察体积调节性氯离子通道(volume-regulated anion channel,VRAC)阻滞剂NPPB(5-nitro-2-(3-phenyl progy(amino)-benzoic acid)对低渗条件下小胶质细胞活化及其炎性分泌的作用。方法小胶质细胞系BV2细胞传代培养,分为对照组、低渗组、低渗加NPPB组,在低渗干预1h后给予正常培养基继续培养,在3、6、18和24h收取细胞和细胞培养基;用ELISA法测定各组培养基中IL-6和TNF-α的浓度变化。结果与对照组比较,低渗干预后BV2细胞分泌的IL-6和TNF-α增加,6h时BV2细胞分泌的IL-6和TNF-α达到最高峰(p<0.01);低渗加NPPB可显著降低IL-6和TNF-α的分泌(p<0.01),在6h时抑制效果最为显著。结论低渗条件可诱导BV2细胞活化及炎性分泌增加,VRAC阻滞剂NPPB可减少低渗条件下BV2细胞的活化和分泌,提示VRAC在低渗诱导的小胶质细胞活化及炎性因子分泌中发挥了重要作用。
- 喻志源曾智琳谢敏杰王伟骆翔
- 关键词：小胶质细胞低渗炎性因子
- 蛋白酶体抑制对培养星形胶质细胞IL-6分泌的影响
- 2008年
- 目的研究蛋白酶体抑制对体外培养的星形胶质细胞(AS)IL-6分泌的影响。方法SD乳鼠皮层AS原代培养,并纯化鉴定;不同浓度(0.1,1,2.5,5μM)的蛋白酶体抑制剂(lactacystin)对第二代AS进行短期(24h)急性处理,另一批同期的AS应用较低浓度(0.5μM)的lactacystin长期(4周)慢性处理,应用RT-PCR及ELISA方法检测ASIL-6mRNA的表达和培养基中IL-6蛋白的分泌水平。结果纯化传代的皮层AS经GFAP免疫荧光鉴定,其阳性率可达99.45%;短期抑制组中,1,2.5,5μM蛋白酶体抑制剂可诱导ASIL-6mRNA表达和蛋白分泌增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);长期抑制组中IL-6mRNA表达及蛋白分泌也较同期对照组增加,差异有统计学意义。结论一定程度蛋白酶体活性抑制可诱导培养的ASIL-6mRNA表达及蛋白分泌增加,提示蛋白酶体功能障碍后可能通过诱导AS分泌IL-6增加来参与阿尔茨海默病的病理改变。
- 余樱任庆国王伟
- 关键词：蛋白酶体星形胶质细胞IL-6阿尔茨海默病
- 在体电转染技术对小脑基因表达调控的研究
- 2010年
- 目的:探讨出生后小鼠小脑颗粒细胞在体电转染外源性基因的方法。方法:用在体电转仪对出生后小鼠小脑表面电转染绿色荧光蛋白质粒,在电转染后的不同时间点观察小脑绿色荧光蛋白基因的表达及绿色荧光蛋白阳性细胞的迁移和分化。结果:电转染后24h即可在小脑皮质观察到绿色荧光,并可持续到电转后10d以上。出生后15d内绿色荧光蛋白阳性细胞陆续向小脑内颗粒细胞层迁移并分化为小脑颗粒细胞。结论:出生后在体电转染技术能有效地将外源性基因导入到小脑颗粒细胞中表达。
- 王义辉郭志宝喻志源谢敏杰王伟
- 关键词：小脑基因小鼠
- 阻断缝隙连接通讯对局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡及脑梗死体积的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨阻断缝隙连接通讯对大鼠局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡及脑梗死体积的影响。方法:大鼠左侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸,对照组左侧脑室注射生理盐水,2h后颈内动脉插线法制备大脑中动脉缺血再灌注模型,采用DNA原位末端标记TUNEL技术及红四氮唑(TTC)染色,观察阻断缝隙连接通讯对大鼠局灶性脑缺血3d后海马迟发性神经元死亡及脑梗死体积的影响。结果:不给予缝隙连接阻断剂,大脑中动脉缺血模型大鼠有45%在术后3d出现海马迟发性神经元死亡;用甘珀酸阻断缝隙连接后30%的大鼠出现海马迟发性神经元死亡,几率明显减小(P<0.01);与对照组相比,干预组的脑梗死体积明显减少(P<0.01)。结论:阻断缝隙连接通讯,局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡的发生率降低,脑梗死体积减小。
- 唐颖馨徐沙贝易陈菊张强骆翔王伟
- 关键词：局灶性脑缺血迟发性神经元死亡脑梗死
- 低渗对体外培养星形胶质细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的观察低渗环境对体外培养星形胶质细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用原代培养的大鼠皮层星形胶质细胞,实验分为对照组和低渗组;低渗1h后恢复正常全培养基,在不同时间点(0、12、24、48h),应用流式细胞技术以及免疫细胞荧光三标法(B rdu/GFAP/DAPI)检测各实验组星形胶质细胞增殖及细胞周期分布的情况。结果我们发现低渗干预星形胶质细胞1h并恢复正常培养基后12、24、48h,对照组和低渗组的B rdu阳性率和细胞周期分布无显著性差异(P>0.05)。结论低渗干预1h对星形胶质细胞的增殖速率及细胞周期的进展无显著影响。
- 何丹谢敏杰王伟魏文洁喻志源
- 关键词：星形胶质细胞低渗增殖细胞周期
