国家自然科学基金(30971805)
- 作品数：13 被引量：55H指数：5
- 相关作者：王丕武付永平张卓马建曲静更多>>
- 相关机构：吉林农业大学吉林市农业科学院吉林省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 抑制大豆Le1基因表达的RNAi载体构建被引量：2
- 2010年
- 本研究采用RT-PCR克隆大豆子粒Le1基因核心保守序列515bp片段,以植物表达载体pCAMBIA1301为基本载体,构建了抑制大豆Le1基因表达的RNAi载体。通过酶切检测及测序,证明表达载体构建正确。本研究为通过RNAi技术降低大豆中凝集素含量,改良大豆品质奠定了基础。
- 魏益凡马建付永平王丕武
- 关键词：大豆大豆凝集素RNA干扰
- 大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化被引量：1
- 2015年
- 【目的】应用RNA干扰技术，同时抑制大豆凝集素（Soybean agglutinin，SBA）和脂肪氧化酶（Lipoxy—genase，Lox）基因在种子中的表达，改良大豆营养品质，为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理，酶切获得Lox目的片段，构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7aP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA—Lox（pSBA—Lox）干扰表达载体，并通过农杆菌介导法转化大豆（品种为吉农28），采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明，双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中，对转化植株进行PCR、Southern杂交检测，结果显示，外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中，并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示，转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低，SBA基因表达量降低了35．9％～47．2％，Lox基因表达量降低了32．8％～56．1％，而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T2代转基因大豆。
- 张学明宋阳王丕武马建晏佳琳付永平曲静张卓董环宇李琦
- 关键词：大豆凝集素脂肪氧化酶RNA干扰技术
- 干旱胁迫下大豆抗旱突变体M18苗期生长和生理特性被引量：6
- 2014年
- 为了考察大豆抗旱突变体M18苗期植株的生长状况和生理特性,以其野生型亲本大豆吉农18号(JN18)为对照,于苗期采用不同浓度(0%、5%、15%、25%)PEG-6000模拟干旱胁迫处理,测定其形态性状和生理生化指标。结果表明:随着PEG浓度的增加,M18和JN18植株的主根长、一级侧根数、侧根总长度、叶绿素含量等指标呈先增加后减少的趋势,而株高、地上部鲜重和干重及RWC等指标逐渐减小,根冠比、Pro含量、MDA含量、SOD活性和POD活性等指标逐渐增加;在同一浓度PEG处理下,两者的根干重和SOD活性均呈极显著性差异(P<0.01),M18比JN18具有较强的生长优势和较高的叶片保水能力、渗透调节能力和酶促抗氧化能力。根体积、株高、冠干重、脯氨酸含量等具有显著性差异的指标均可作为大豆苗期抗旱性鉴定的主要指标。
- 莫金钢马建沈勇张丽辉曲静王丕武
- 关键词：大豆突变体生理特性抗旱性
- 大豆C_2H_2型锌指蛋白的研究进展被引量：1
- 2011年
- 锌指蛋白是转录因子的一种,与真核生物的生长发育及逆境胁迫的耐受能力都有着重要关系,而植物C2H2型锌指蛋白是研究较多、较为明确的一种锌指蛋白,每个锌指与DNA接触面具有一段高度保守的氨基酸序列QALGGH,这是植物中独有的特征。在拟南芥、矮牵牛中都发现了多种具有抗胁迫功能的锌指蛋白基因,而且研究的都比较深入和透彻,例如矮牵牛锌指蛋白基因ZPT2-3在转基因烟草中表现出很强的抗旱性,拟南芥中的STZ基因能明显转基因植株对高盐环境的耐受性,但是在大豆中研究比较明确的锌指蛋白基因还是比较少,相关的报道也是比较少。本文就对至今对大豆锌指蛋白的研究进展进行下介绍。
- 宋冰王丕武洪洋王贺付永平张卓丁孝营
- 关键词：大豆逆境胁迫抗逆性
- 大豆种皮特异性启动子的克隆及功能分析被引量：3
- 2010年
- 采用PCR技术从大豆品种吉农17基因组DNA中分离得到大豆种皮特异性启动子片段SCSP,长度约为1268bp。序列分析表明SCSP与报道序列同源性达97%以上。将其与GUS基因融合,构建植物表达载体pSCSP-GUS后,转化到EHA105根癌农杆菌中,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89。转基因植株的GUS活性检测表明,仅能在种皮检测到GUS活性,而在茎、叶和花等其它组织中都未检测到GUS活性,证实SCSP片段具有种皮特异性表达功能。
- 魏雯雯王丕武付永平张卓
- 关键词：大豆功能分析GUS染色
- 大豆C_2H_2型锌指蛋白基因SCTF-1的克隆及功能分析被引量：11
- 2012年
- 锌指蛋白是一类具有手指型结构的蛋白质,其中一些锌指蛋白是转录因子,对真核生物的生长发育及非生物逆境胁迫的耐受能力都有着重要作用。文章从大豆(Glycine max(L.)Merr.)中克隆了一个新的C2H2型锌指蛋白基因SCTF-1(GenBank登录号:JQ692081),该基因包含一个699 bp的开放阅读框,编码233个氨基酸,无内含子,有两个典型的C2H2型锌指结构。锌指结构中有植物锌指蛋白特有的保守氨基酸序列QALGGH。经软件预测分析,其等电点pI=8.33,分子量24.9 kDa。农杆菌介导的洋葱表皮细胞GFP瞬时表达实验结果表明,SCTF-1蛋白能够定位到细胞核中。通过RT-PCR检测发现该基因在大豆叶和花中的表达量较高,在茎和根的表达量相对较低。在对大豆幼苗的低温胁迫中,SCTF-1基因的表达量明显增加。将SCTF-1基因转入烟草(Nicotiana tabacum L.)中,发现SCTF-1基因的过量表达能够明显提高转基因烟草的耐冷能力。
- 宋冰王丕武付永平范旭红夏海峰高玮洪洋王贺张卓马建
- 关键词：大豆锌指蛋白亚细胞定位
- β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体的构建被引量：3
- 2012年
- 【目的】构建β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因具有功能性间隔序列的发夹结构(Intron-hairpin RNAi,ihp-RNA)的RNA干扰(ihp-RNAi)表达载体并转化大豆,为通过RNA干扰技术改良大豆的营养品质奠定基础。【方法】以大豆总RNA反转录获得的cDNA为模板,通过PCR扩增克隆了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的核心保守序列(400bp),并将该片段的反义和正义片段插入到重组植物表达载体p3301-P的种子特异性启动子7αp下游,将功能性间隔序列intron-SSR插入反义片段与正义片段之间,构建α′-亚基基因ihp-RNAi安全型表达载体p3301-PFNZ-α′-BADH,并进行PCR及双酶切鉴定。利用农杆菌介导法将带有p3301-PFNZ-α′-BADH的菌株转化"吉农27"大豆植株,对转基因植株进行PCR、Southern杂交检测,并对转基因植株α′-亚基基因的表达量进行RT-PCR。【结果】成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体p3301-PFNZ-α′-BADH,利用农杆菌介导法转化大豆得到7株阳性转化植株;Southern杂交结果显示,外源基因以1～2个拷贝整合于大豆基因组中;RT-PCR检测表明,β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的表达被明显抑制。【结论】成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体,获得了α′-亚基基因被明显抑制的转基因大豆植株,为应用基因工程技术进行大豆品质改良奠定了基础。
- 李夏戴佳乐陈子奇付永平马建曲静王丕武
- 关键词：农杆菌介导法大豆
- 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因RNAi载体的构建被引量：4
- 2010年
- 采用PCR技术扩增得到胰蛋白酶抑制剂KTi基因正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GUS基因片段,将其分别连入克隆载体pMD18-TVector中。然后以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,通过AHLG作为中间载体,根据RNAi原理将组成RNAi结构的4个目的片段分别连入其中,成功构建了种子特异性RNAi表达载体p1301-KTiRi。研究结果为RNAi技术在大豆品质改良中的应用提供了基础。
- 周海涛付永平王丕武
- 关键词：大豆RNA干扰
- 大豆花芽差异表达基因片段GmFBDG01克隆和RNAi表达载体的构建被引量：3
- 2015年
- 大豆的产量构成因素中每荚粒数是提高大豆产量的育种关键因素,因此研究与荚粒数相关的基因至关重要,花芽作为植物生殖生长的第一步,对大豆植株的生长发育有着重要的影响,可能对四粒荚的产生有影响。以大豆吉农18四粒荚突变体的7叶期花芽的转录组测序结果进行分析,筛选出差异表达的片段Gm FBDG01;利用RT-PCR克隆差异表达基因的CDS核心序列,并借助中间克隆载体p Bluescript SK plus,成功构建了RNA干扰(RNAi)表达载体p CPB-Gm FBDG01-RNAi,该表达载体的构建为大豆四粒荚相关功能基因的功能验证奠定基础。
- 潘丽丹姚丹王丕武刘婷婷郑成忠赵翠兰
- 关键词：大豆花芽RNA干扰表达载体构建
- 大豆豆荚特异性启动子的克隆及功能分析被引量：7
- 2014年
- 【目的】克隆大豆豆荚特异性启动子,并对其进行功能分析,为研究抗病虫基因在大豆荚中的特异性表达奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆得到豆荚特异性启动子(Pod Specific Promoter,PSP)的核心序列,用PSP序列取代质粒pBI121中的CaMV 35S启动子,构建与GUS基因融合的豆荚特异性报告载体pPSP-GUS,通过农杆菌介导法转化烟草"NC89",对转基因植株进行分子生物学检测,将鉴定为阳性的植株经GUS组织化学染色,验证PSP片段的功能。【结果】所获得的豆荚特异性启动子PSP大小为1 270bp,与已报道序列的同源性为98%,具有多种典型的启动子表达调控元件,如A/T-rich core、CAATBOX、TATABOX、GATABOX等。将pPSP-GUS质粒转化烟草后,经PCR和Southern blot检测结果显示,成功获得了转基因阳性烟草植株。GUS活性检测结果显示,在转pPSPGUS质粒的烟草根和叶片中均未检测到GUS活性,在萼片中可检测到低水平的GUS活性;而在花荚中可检测到高水平的GUS活性,且明显高于转pBI121质粒的对照植株。【结论】克隆得到的豆荚特异性启动子PSP片段具有启动基因在豆荚中特异性表达的功能。
- 宋阳王丕武张学明曲静
- 关键词：大豆GUS染色
