河南省医学科技攻关计划项目(200701006)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：刘章锁肖静王雅楠赵国强王沛更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院郑州大学北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：河南省医学科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用抗肾小球基底膜抗体的中和性单克隆抗体治疗抗肾小球基底膜肾炎大鼠的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的 应用抗肾小球基底膜（GBM）抗体的中和性单克隆抗体注射抗GBM肾炎大鼠,观察各种生化指标及肾脏病理学的变化.方法 将Wistar大鼠随机分为5组,每组9只：（1）肾炎模型组：经尾静脉注入人抗GBM抗体;（2）正常对照Ⅰ组：经尾静脉注入非抗体性的健康人IgG;（3）对照Ⅱ组：经尾静脉注入抗GBM抗体的中和性单克降抗体;（4）干预Ⅰ组：经尾静脉注入人抗GBM抗体,第7天后再经尾静脉注入抗GBM抗体的中和性单克隆抗体（1.5ml/100 g）;（5）干预Ⅱ组：经尾静脉注入人抗GBM抗体,第14天后再经尾静脉注入抗GBM抗体的中和性单克隆抗体.分别在实验后第7、14、21天观察大鼠24 h尿蛋白量、BUN、Scr和肾组织病理学的变化.结果 第21天干预Ⅰ组尿蛋白量为（16.62±5.53）g/d、BUN为（11.53±2.26）mmol/L、Scr为（102.46±16.86）μmol/L,均显著低于肾炎模型组（P＜0.05）;干预Ⅱ组较肾炎模型组也有所降低,但差异无统计学意义（P＞0.05）.干预Ⅰ组和干预Ⅱ组肾脏细胞增生、新月体的形成及免疫复合物的沉积均少于肾炎模型组,但干预Ⅰ组更为明显.对照Ⅰ组和对照Ⅱ组之间无明显变化.结论 早期应用抗GBM抗体的中和性单克隆抗体能够有效改善抗GBM肾炎大鼠的肾脏病变.
- 肖静刘章锁聂志勇王雅楠赵国强
- 中和抗肾小球基底膜抗体的单链抗体的筛选与鉴定
- 2010年
- 目的 制备人抗肾小球基底膜（GBM）抗体的特异性人源化单链可变区抗体.方法 采用噬菌体表面展示技术,获得一个与人抗GBM抗体结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对该克隆进行DNA序列测定分析.结果 对噬菌体单链可变区抗体库经过3轮筛选后,与第1轮相比富集了137倍.噬菌体抗体与人抗GBM抗体的结合活性其中有35株克隆ELISA的吸光度较高.对这些噬菌体抗体进行交叉反应后,确定其中有10株交叉反应较弱.确定1株（C31）阳性克隆提取质粒,进行DNA序列测定,大小为750 bp,并符合人源化单链可变区抗体的序列结构.结论 应用噬菌体展示技术成功获得人-抗GBM抗体的单链可变区抗体基因,为临床上治疗Goodpasture综合征奠定实验基础.
- 肖静刘章锁王沛黄留玉宋宏彬赵明辉
- 关键词：噬菌体展示技术抗肾小球基底膜抗体
- 抗GBM抗体特异性单链抗体scFv3原核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 目的:构建单链抗体scFv3的原核表达载体pET28a-scFv3并诱导表达,纯化并检测表达产物的免疫抗原性。方法:用PCR扩增抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3基因,构建pGEM-scFv3重组质粒并测序。将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化,用间接ELISA检测纯化的单链抗体scFv3的免疫抗原性。结果:酶切和测序证实得到的scFv3基因序列正确。间接ELISA检测表明,纯化获得的scFv3能与抗GBM抗体结合。结论:成功构建了pET28a-scFv3原核表达系统并获得纯化的scFv3蛋白。表达产物具有良好的抗原性,为进一步研究该单链抗体在抗GBM抗体病中的治疗作用奠定了基础。
- 王雅楠刘章锁邢国兰赵国强肖静王沛
- 关键词：蛋白表达纯化抗GBM抗体
- 人源化抗肾小球基底膜抗体的单链抗体scFv3的原核表达及鉴定
- 2011年
- 目的:在原核细胞中构建并表达抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3,并鉴定其活性。方法:用PCR扩增抗GBM抗体单链抗体scFv3基因,将scFv3 DNA与pGEM-T Easy质粒连接,构建克隆载体pGEM-scFv3。用酶切后电泳鉴定构建载体的正确性;测序检测质粒重组后序列有无改变。再将scFv3亚克隆入表达载体pQE-80L,构建pQE80L-scFv3重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta2,酶切鉴定。IPTG诱导表达蛋白后,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物的抗体活性。结果:PCR扩增scFv3 DNA片段约为750 bp,与预期结果相同;克隆载体pGEM-scFv3酶切后显示scFv3成功的克隆入pGEM-T Easy质粒;测序验证插入片段全序列无改变;表达载体pQE80L-scFv3酶切图谱与预期相同;SDS-PAGE显示,在分子量约为27 kD处可见目的蛋白带,Western blot证实scFv3能与抗GBM抗体结合。结论:成功构建并表达了抗GBM抗体的单链抗体scFv3蛋白,为进一步研究scFv3的生物学特性和基因工程抗体的制备奠定了基础。
- 肖静刘章锁王雅楠赵国强王沛
- 关键词：抗GBM抗体原核表达
