江苏省博士后科研资助计划项目(0901012B)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 相关作者：徐虹齐向辉朱宏阳陈华友沈晓波更多>>
- 相关机构：南京工业大学江苏大学广西大学更多>>
- 发文基金：江苏省博士后科研资助计划项目国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程农业科学更多>>
- 一种构建新型T载体的简便方法及应用被引量：4
- 2011年
- T载体能够用于PCR产物的快速克隆且易于操作。以常用的克隆载体pGEM-3zf(+)为出发材料,将其进行改造为通用的T载体。通过一步反向PCR方法在该载体中插入带有Xcm I酶切位点的一段序列,在Xcm I酶的切割下产生两端含有T核苷酸的线型核苷酸序列,最终获得用于克隆PCR产物的T载体。外源基因xdh克隆试验表明该载体构建成功,此载体完全可以用于PCR产物的基因克隆试验,为相关载体的改造提供了思路。
- 齐向辉陈辉沈琦何晨曦刘学郭齐陈华友徐虹
- 关键词：T载体I
- 克雷伯氏菌gdrA和gdrB基因的克隆、协同表达与功能鉴定
- 2009年
- 1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,其生物法生产的研究越来越受到广泛的关注。以克雷伯氏菌的总DNA为模板,通过PCR分别扩增出约1.8 kb的gdrA和0.4 kb的gdrB的两个基因片段,随后,将此两基因以多顺反子的方式与pSE380相连构建表达载体,并在大肠杆菌中进行了高效表达,表达量约占总蛋白的30%。将高效表达的激活因子用金属亲合层析和分子筛进行了纯化,得到电泳纯级的激活因子,SDS-PAGE分析显示:大、小亚基分子量约为64 KDa和12 kDa;非变性胶分析显示:全酶的分子量约为150 kDa,扫描分析激活因子是以α_2β_2方式结合的。以克雷伯氏菌甘油脱水酶为研究对象,进行激活实验,结果证实该激活因子具备甘油脱水酶激活因子的功能。该研究为进一步阐明甘油脱水酶的激活机制及1,3-丙二醇的高效生产奠定了基础。
- 齐向辉韦宇拓徐虹黄日波
- 关键词：甘油脱水酶
- Gluconobacter oxydans NH-10中短链D-阿拉伯糖醇脱氢酶的研究被引量：2
- 2010年
- 以氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)NH-10基因组DNA为模板,扩增得到D-阿拉伯糖醇脱氢酶基因arDH,将其克隆到大肠杆菌表达载体JM109(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE电泳分析ArDH的分子量约为30kDa,是一个短链脱氢酶,既能催化D-阿拉伯糖醇氧化为D-木酮糖,又能催化D-木酮糖还原为D-阿拉伯糖醇。催化氧化反应时,对D-阿拉伯糖醇的Km为60.67mmol/L,Vmax为0.803U/mg;它能同时依赖于NAD+和NADP+,但是更加偏好辅酶NAD+;最适pH为12.0。还原反应对D-木酮糖的Km为36.39mmol/L,Vmax为1.71U/mg;最优pH为7.0,最适温度均为30℃。
- 戴小燕沈晓波朱宏阳徐虹
- 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌克隆
- 超滤膜浓缩重组α-乙酰乳酸脱羧酶及酶法清洗被引量：2
- 2012年
- 采用聚醚砜超滤膜对重组枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶液进行超滤浓缩,研究了温度和pH值对膜通量的影响,进行了化学法和酶法对超滤膜的清洗再生条件的试验.结果表明:酶液pH值对膜通量影响显著,浓缩10倍时,pH=5.1的膜通量仅为pH=7.1的20.3%;在压力为0.1MPa、酶液温度35℃、pH=7.1条件下,超滤可保持较高膜通量,酶活力回收率可达89.6%.酶法清洗超滤膜时,中性蛋白酶活性超过1.25×104U.L-1可对超滤膜形成二次污染;活性为1.25×104U.L-1的中性蛋白酶与体积分数1%的次氯酸钠复合清洗可达到最佳的清洗再生效果,膜通量恢复率提高到97.0%.
- 蒙健宗齐向辉李丛吴华德农翠菲
- 关键词：超滤膜膜通量Α-乙酰乳酸脱羧酶中性蛋白酶
- 枯草杆菌重组水蛭素(HV3)的发酵工艺研究被引量：1
- 2009年
- [目的]确定芽孢杆菌发酵生产水蛭素的最佳工艺条件。[方法]以枯草芽孢杆菌为供试菌种,研究菌种活化时间、接种量、培养基装量、温度、初始pH值、碳源、氮源等对发酵的影响,在此基础上对发酵条件进行优化。[结果]最佳发酵条件为:温度37℃,初始pH值7,培养基装量20ml/250ml,菌种活化时间6h,接种量3%,氮源为1.5%Tryptone,碳源为9.0%大豆浸出液,转速220r/min,16h后添加0.3%Tween80,发酵时间29h。[结论]优化条件下,发酵液活性可达210ATU/ml,较优化前提高13.1倍;优化条件上50L罐放大后具有很好的重复性,发酵液活性可达208ATU/ml。
- 陈华友齐向辉谭小力乌慧玲
- 关键词：水蛭素枯草杆菌发酵
- 氧化葡萄糖酸杆菌驯化选育及其产二羟丙酮被引量：3
- 2012年
- 通过梯度增加种子培养基中甘油浓度驯化氧化葡萄糖酸杆菌(Cluconobater oxydans),有效地提高了该菌对甘油的耐受性,菌株产二羟丙酮水平比驯化前提高了29%,在此基础上,采用单因素试验,对其发酵工艺进行优化。考察甘油质量浓度、酵母膏质量浓度、CaCO_3质量浓度、接种量对发酵的影响,结果显示最佳工艺条件为:甘油质量浓度为60 g/L,酵母膏质量浓度为5 g/L,CaCO_3质量浓度为10 g/L,接种量4%,在此条件下,经72 h摇瓶发酵甘油转化率达96%,二羟丙酮产量可达57.4 g/L,7.5 L发酵罐分批发酵54 h时甘油转化率达97%,二羟丙酮产量可达58.2 g/L。
- 游庆红戴小燕朱宏阳徐虹
- 关键词：甘油氧化葡萄糖酸杆菌驯化发酵
- Gluconobacter oxydans木糖醇脱氢酶基因的克隆表达及木糖醇的转化分析被引量：4
- 2009年
- 从氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)的基因组DNA上扩增出木糖醇脱氢酶基因xdh,构建了诱导型表达载体pSE-xdh,导入E.coliJM109后获得了高效表达木糖醇脱氢酶基因的重组菌JM109/pSE-xdh。通过HisTrap HP亲和层析和SephacrylS-300分子筛两步纯化从细胞中得到纯酶,并对酶学性质进行研究。XDH最适还原反应的pH值为5.0,最适还原反应的温度为35℃;最适氧化反应的pH值为11.0,最适氧化反应的温度为30℃。重组菌中的XDH依赖NADH,对NADH的米氏常数Km=57.8 mmol/L,最大反应速率Vmax=1209.1 mmol/(ml.min)。重组菌的XDH酶活力为13.9 U/mg。利用重组菌和原始菌混合静止细胞转化D-木酮糖,16 h28.0 g/L D-木酮糖生成16.7 g/L木糖醇,而原始菌单独转化只生成8.3 g/L木糖醇。
- 沈晓波齐向辉朱宏阳徐虹
- 关键词：木糖醇脱氢酶克隆木糖醇
- 海藻糖在生物组织器官保护方面的新应用被引量：3
- 2009年
- 海藻糖是具有独特生物学功能的二糖,它在生物活性材料的保护保存等方面起着不可估量的作用,是一种非常优良的生物活性保护剂。综述了海藻糖在血液、脂质体、气管、肝、肺、肾、胚胎等器官保护中的应用情况及新的发展动态。
- 齐向辉陈华友蒙健宗侯守海梁淑华徐虹黄日波
- 关键词：海藻糖器官
