山东省科技攻关计划(032050112)
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
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- VEGF_(165)基因对大鼠软组织缺损修复及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响被引量：8
- 2006年
- 目的将pcDNA3·1-VEGF165质粒用于软组织缺损局部,观察其对软组织修复的作用和I型、III型胶原mRNA表达的影响。方法SD大鼠32只于两侧臀部制备直径12mm圆形全层皮肤、肌肉的复合软组织缺损;随机分为实验组,对侧为对照组。于实验组注射0·2ml(含200ng)质粒液,对照组以同量生理盐水代替。分别于术后3、5、7、14、30d照相计算创面收缩率、取材。以RT-PCR法检测局部I型、III型胶原mRNA表达;制备常规切片观察局部组织血管形成(MVD)及修复情况。结果所有动物术后无死亡、感染。实验组及对照组创面愈合时间分别为14·2d及17·4d,于1、2周时新生血管密度分别为63·38±9·20、52·72±7·06(P<0·05)及76·64±12·27、66·84±9·82(P<0·05),差别有统计学意义。RT-PCR示I型及III型胶原mRNA于术后3d即开始有表达,2周达到高峰后减弱,实验组表达量较大。结论pcDNA3·1-VEGF165质粒用于创面后,具有上调I型及III型胶原mRNA表达,促进软组织缺损区血管生成、加速创面愈合作用。
- 赵冬梅杨加峰邱丽萍武士清刘军莉蔡景龙
- 关键词：基因转染基因治疗
- 血管内皮细胞生长因子165基因转染对兔骨缺损修复的影响被引量：7
- 2007年
- 目的构建 pcDNA3.1-血管内皮细胞生长因子(VEGF)165质粒,观察其对兔骨缺损修复的影响。方法构建成重组真核表达质粒 pcDNA3.1-VEGF165;采用30只新西兰大白兔,制备双侧桡骨骨缺损模型,实验组以体积等大的明胶海绵置于创腔,局部直接注射稀释的质粒液200 ng;对照组以同量生理盐水代替质粒液,同法处理。于术后1、2、4、6、8和12周行 X 线照片后获取标本,观察缺损局部组织修复及新生血管并计算微血管密度(MVD)。结果 pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功,测序正确。术后 X 线:1周时两组无明显差别,实验组2周骨痂形成、骨质修复,12周时骨质已正常,对照组表现为修复迟缓;HE 染色:实验组2周大量新生血管形成、通血,4周成骨细胞大量增殖、骨小梁形成,12周骨皮质改建完成,骨髓腔再通;对照组经历过程类似,但相对时间延迟,12周时骨髓腔及皮质改建尚未完成。2周时对照组及实验组 MVD 分别为56.1±6.1、69.1±5.4,均较1周时42.2±6.4、47.0±7.5时增加,组间及组内间差异有统计学意义(t=8.0347,P=0.0000)。结论骨缺损局部直接应用 PcDNA3.1-VEGF165质粒液后,可表达并上调 VEGF165,具有促进局部微血管形成、加快骨缺损修复的作用。
- 赵冬梅杨加峰武士清邱丽萍刘军莉王海斌许复郁蔡景龙
- 关键词：基因转移内皮血管内皮细胞生长因子
- pcDNA3．1-血管内皮生长因子165质粒局部注射对大鼠软组织缺损修复的影响被引量：2
- 2008年
- 背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多。目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探讨其对软组织缺损修复的影响。设计、时间及地点:于2004-09/2006-01在山东大学动物实验中心和分子生物学实验室完成自身对照观察实验。材料:健康SD大鼠30只。方法:Trizol法提取兔组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,将此基因片段与pMD18-T构建真核表达载体,双酶切,在T4DNA连接酶作用下,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165;采用SD大鼠30只,于脊背后部两侧对称部位制备圆形全层皮肤(直径15mm)、肌肉(切除2mm厚肌肉)软组织缺损,两创缘相距4cm;选择一侧为实验组,直接注射0.2mL(含200ng)质粒液,对侧为对照组,以等量生理盐水同法处理。主要观察指标:创面愈合、血管生成及局部胶原表达。结果:30只均进入结果分析。①经赵冬梅等的方法鉴定,pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功。②质粒液局部注射后实验组创面愈合时间早于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);实验组术后7,14d微血管密度高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。③实验组3d即有Ⅲ型胶原表达,14d达高峰,30d时略有降低。对照组Ⅲ型胶原表达部位和趋势与实验组一致,只是时间延迟。结论:pcDNA3.1-VEGF165质粒局部注射可促进软组织缺损区血管生成和细胞外基质合成,加速创面愈合。
- 杨加峰武士清赵冬梅刘军莉邱丽萍王海斌许复郁
- 关键词：基因转染血管内皮细胞生长因子胶原
- 重组VEGF165质粒对骨缺损修复的影响被引量：5
- 2006年
- 目的构建pcDNA3.1-VEGF165质粒,观察其对骨缺损修复的影响。方法用Trizol法提取兔骨组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,与pMD18-T构建真核表达载体,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165。取28只新西兰大白兔制备双侧桡骨骨缺损(10mm)模型。实验侧局部直接注射质粒液0.2ml(含质粒200ng),对照侧注射等量生理盐水。标本于术后1、2、4、6、8和12周摄X线片后取材。以HE染色法、免疫组化染色法观察局部组织的修复情况及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达。结果pcDNA3.1-VEGF165构建成功,测序正确。X线摄片观察于第2周开始两组出现区别。HE染色显示术后2周两组缺损区组织炎性细胞浸润;4周开始实验组成骨细胞大量增殖、骨小梁形成;12周时实验组骨缺损修复正常,对照组修复时间迟缓。免疫组化结果显示,术后8周及12周两组Ⅲ型胶原及Ⅰ型胶原均有阳性表达,实验组表达较强。结论应用pcDNA3.1-VEGF165质粒直接转染骨缺损局部组织细胞,具有增加局部Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达、加快骨缺损修复的作用。
- 赵冬梅杨加峰刘军莉王海斌许复郁武士清贾玉秀
- 关键词：基因转染血管内皮生长因子类免疫组织化学
