安徽省科技攻关计划(07010302176)
- 作品数：12 被引量：28H指数：4
- 相关作者：黄训端张部昌孔小卫刘道琴赵皓更多>>
- 相关机构：安徽大学军事医学科学院安徽文达信息技术职业学院更多>>
- 发文基金：安徽省科技攻关计划国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- 红色糖多孢菌染色体基因快速失活技术研究及应用被引量：2
- 2009年
- 目的:研究红色糖多孢菌染色体快速同源重组基因失活技术。方法:以Thio抗性基因(tsr)作为筛选标记,在其上下游分别连接失活目的基因两侧同源片段,利用PEG介导原生质体转化将线性DNA同源片段转入红色糖多孢菌,通过tsr基因两侧同源片段与染色体同时重组,将目的基因敲除或失活。结果:tsr基因两侧同源片段长度与红色糖多孢菌染色体同源重组效率密切相关,同源片段长度在500 bp左右时,线性片段与染色体有效重组率很低,而同源片段长度超过1000 bp时,可获得有效的基因失活突变菌株。通过这种技术构建的红色糖多孢菌ΔbldD基因突变体,合成红霉素产量显著降低,说明bldD参与红霉素合成基因调控。结论:红色糖多孢菌染色体快速同源重组基因失活技术,对于分析红色糖多孢菌基因功能具有重要作用。
- 刘惠黄训端刘道琴赵玮樊伟韩姝张部昌
- 关键词：红色糖多孢菌同源重组
- 红色糖多孢菌A226-SP突变体构建及代谢产物分析被引量：1
- 2009年
- 目的:构建红色糖多孢菌突变菌株,生物合成酮内酯类抗生素。方法:利用反向PCR技术,扩增红色糖多孢菌KR6酮还原酶基因突变DNA片段SP(KR6酶中Gly1141Ala1142替换成SerPro),克隆于pWHM3上构建染色体同源重组质粒pWHM3-SP。通过PEG介导原生质体转化,将pWHM3-SP导入红色糖多孢菌中。经染色体二次重组后,筛选出1株红色糖多孢菌KR6酶突变菌株A226-SP。结果:DNA序列分析表明,A226-SP染色体上编码KR6酶中Gly1141Ala1142序列GGTGCG突变成SerPro编码序列AGCCCT。HPLC-HRMS分析证实A226-SP菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B(DOEB),同时检测到其中间产物C18H34O6,但没有发现红霉素产物。结论:Gly1141Ala1142位于KR6酮还原酶的重要功能位点,红色糖多孢菌A226-SP突变体可以合成酮内酯类化合物。
- 刘道琴黄训端孔小卫马树梅刘惠张部昌
- 关键词：红色糖多孢菌同源重组
- 红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体的构建及产物分析被引量：1
- 2010年
- 目的构建红色糖多孢菌糖基转移酶EryCⅢ失活突变体,为探索红霉素糖基结构修饰和合成新型红霉素衍生物打下基础。方法通过PCR扩增方法将eryCⅢ基因缺失130bp后,克隆至同源重组型质粒pWHM3上,构建pWHM3-ΔeryCⅢ,将其导入红色糖多孢菌A226中。经过两次同源重组,筛选出1株缺失EryCⅢ酶活性的红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体。使用抑菌实验、薄层层析和质谱对其发酵产物进行分析,并通过回补实验进一步验证。结果与结论对红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ染色体序列测定表明,eryCⅢ基因相应位点缺失130bp,突变菌株发酵产物对枯草芽孢杆菌无抑制作用,薄层和质谱结果表明突变菌株积累3-L-mycarose红霉内酯B(MEB),而并没有发现红霉素产物。回补验证发现eryCⅢ基因导入A226-ΔeryCⅢ使得其恢复了红霉素合成能力。所构建的红色糖多孢菌EryCⅢ失活突变体A226-ΔeryCⅢ,为探讨组合合成红霉素衍生物奠定基础。
- 许晓娟黄训端赵玮郭金华陈惠鹏曹诚张部昌
- 关键词：红色糖多孢菌糖基转移酶同源重组红霉素
- bldD基因过量表达对红色糖多孢菌红霉素产量及孢子形成的影响被引量：5
- 2010年
- 目的通过增加红色糖多孢菌调控基因bldD拷贝,获得红霉素高产菌株,并探讨bldD基因过量表达对红色糖多孢菌形态分化的影响。方法以红色糖多孢菌A226为出发菌株,通过染色体同源重组方法获得红色糖多孢菌A226bldD基因失活突变菌株A226-△bldD。将bldD基因表达质粒pZMW-bldD分别导入突变株A226-△bldD及出发菌株A226中,获得A226-△bldD/bldD菌株和A226/bldD菌株,利用TLC法和HPLC法对其发酵产物进行分析,并观察孢子生长状况。结果红色糖多孢菌A226中bldD基因失活后产红霉素水平明显降低,不能形成孢子;bldD基因的回复表达使A226-△bldD突变菌株产红霉素能力得到恢复,且孢子形成恢复正常;在红色糖多孢菌A226中过量表达bldD基因可提高红霉素产量,较出发菌株A226提高20%,同时可使孢子形成时间提前。结论在红色糖多孢菌中过量表达bldD基因,可获得红霉素高产菌株,同时会影响红色糖多孢菌形态分化进程。
- 何晶晶黄训端宋平郭金华陈惠鹏曹诚张部昌
- 关键词：红色糖多孢菌红霉素形态分化基因表达
- 鸡矢藤环烯醚萜苷对大鼠的长期毒性试验研究被引量：8
- 2010年
- 目的观察大鼠长期口服鸡矢藤环烯醚萜苷(IGPS)所产生的毒性反应及停药后恢复情况,为临床应用提供理论和实验依据。方法IGPS分别按280、700、1750mg/kg剂量给大鼠连续灌胃给药12周,分别相当于推荐人临床拟用剂量的40、100、250倍。观察给药期间及停药后2周大鼠的一般状况、体重变化、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数和组织病理学等方面的变化。结果IGPS连续灌胃给药12周,除高剂量组红细胞数量有一过性短暂升高外,余各剂量组的大鼠体重、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数及各组织器官的病理形态与对照组比较均未见明显异常改变;停药2周后,各项检查均正常。结论IGPS长期大量口服,对大鼠无明显损害。
- 庞明群王双苗颜海燕胡才彪金辉周兰兰
- 红色糖多孢菌M合成3-脱氧-3-羰基-赤酮酸内酯B的限速因子研究
- 2010年
- 目的探讨红色糖多孢菌KR6基因突变体生物合成3-脱氧-3羰基-赤酮酸内酯B(DOEB)产量显著降低的原因。方法以KR6基因突变体M菌株为研究对象,采用相对实时荧光定量RT-PCR技术、抗原-抗体检测技术和高分辨LC-MS分析技术等,分别从基因的转录水平、翻译水平以及聚酮化合物水平等层面研究了DOEB的生物合成量。结果红色糖多孢菌M菌株与出发菌株A226相比,两者聚酮合酶(PKS)基因簇在转录水平和翻译水平上的表达差异均非造成DOEB产量降低的限速因子;而DOEB的前体转化能力却大幅度降低,因此,DOEB合酶的活力降低是造成生物合成DOEB产量降低的关键因素。结论 DOEB合酶的活力是生物合成DOEB的限速因子,本研究为进一步探讨利用基因工程途径提高新酮内酯类化合物产量奠定了基础。
- 马树梅黄训端王永中刘道琴刘惠曹诚陈惠鹏张部昌
- 红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK的克隆及原核表达
- 2008年
- 目的:探讨红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法:将eryK基因克隆到表达质粒pET-22b(+),使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并对装液量、接种量、诱导时间、IPTG浓度和FeC l3浓度等表达条件进行优化。结果与结论:SDS-PAGE电泳显示,在相对分子质量44×103处有EryK蛋白条带,其含量占菌体总蛋白的58%以上。证明高GC含量的红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因EryK可以在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达,为体外研究EryK酶学相关性质以及大规模发酵奠定了基础。
- 赵皓黄训端张部昌孔小卫张书祥查向东
- 关键词：红色糖多孢菌
- 糖多孢红霉菌保藏过程中生理生化变化的研究被引量：2
- 2008年
- 对糖多孢红霉菌菌种保藏过程中一些生理生化变化规律进行研究.采用氮蓝四唑还原法、愈创木酚法、紫外吸收法、硫代巴比妥酸(TBA)比色法和双组分分光光度计法,分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)与可溶性糖的含量.结果表明:在糖多孢红霉菌保藏过程中,SOD、POD、CAT酶活性与可溶性糖的含量随着菌种保藏时间的延长呈现先上升后下降,MDA随着时间的延长先下降再上升趋势.上述3种酶活性与MDA和可溶性糖含量的变化呈现出一定的规律,可以用SOD和MDA作为判断该菌种是否老化的一种生理生化指标.
- 孔小卫黄训端张部昌张宇
- 关键词：糖多孢红霉菌保藏生理生化变化酶活性
- 红霉素类药物基因工程被引量：7
- 2009年
- 红霉素类药物在临床上应用广泛，已通过化学修饰发展到第三代红霉素。红霉素基因工程发展迅速．不仅合成了100多种红霉素结构类似物．而且在提高红霉素产量方面也取得了重要进展，下面重点介绍红霉素类药物基因工程研究概况，特别对合成新的红霉素类似物和提高红霉素产量进行了阐述。
- 张部昌黄训端
- 关键词：红霉素糖多孢红霉菌基因工程
- 产红霉素B红色糖多孢菌突变体的构建(英文)被引量：1
- 2009年
- 目的:获得大量红霉素合成中间产物红霉素B,并进一步研究eryK基因的活性位点。方法:通过重叠PCR将eryK基因中包括BC环在内的关键氨基酸序列删除,克隆到同源重组质粒pWHM3上,继而通过染色体同源重组方法将EryK羟基化酶基因失活,构建了缺失C-12羟基化酶活性的红色糖多孢菌突变体。结果与结论:构建了红色糖多孢菌突变菌株AK17,对发酵产物进行TLC和MS分析,结果显示突变体主要合成红霉素B。
- 赵皓董翔张部昌袁华黄训端张书祥
