国家自然科学基金(30600707)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：金洁樊明文李宇红卢冠凡更多>>
- 相关机构：武汉大学附属口腔医院教育部武汉大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 变形链球菌表面蛋白PAc的原核表达及纯化被引量：6
- 2010年
- 目的:对在大肠杆菌中表达重组变形链球菌表面蛋白抗原PAc的培养条件进行优化,制备高纯度重组蛋白rPAc。方法:载体构建原核表达载体pET20b(+)-AP对不同培养基、诱导浓度,温度和时间等进行筛选确定最佳条件,采用亲和层析分离纯化rPAc蛋白。结果:含原核表达载体pET20b(+)-AP的大肠杆菌在LB培养基中培养至A600=0.6时,终浓度为1mM的IPTG诱导,30℃继续振荡培养4h,可使rPAc的表达量达到最大。分离纯化的蛋白在SDS-PAGE中显示为单一条带。结论:对PAcA-P区的重组质粒pET20b(+)-AP表达的rPAc经纯化后可用于动物免疫,为探索防龋DNA疫苗pCIA-P的新型免疫策略奠定必要的物质基础。
- 卢冠凡杜霞金洁樊明文
- 关键词：重组蛋白
- 重组变形链球菌表面蛋白PAc发酵工艺研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究表达重组变形链球菌表面蛋白(rPAc)的工程菌pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS的发酵条件。方法:通过摇瓶培养,进行发酵条件优化,在5L发酵罐中发酵pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌,并对发酵产物进行SDS-PAGE、Western印迹分析鉴定。结果:确立了pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌的高密度发酵工艺,即LB-2培养基,初始pH值为7.2,溶氧控制为30%以上,补料为10%甘油、5%酵母粉和5%蛋白胨。目的蛋白呈可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的45%以上,菌体密度达到44。Western印迹分析显示,rPAc蛋白和抗PAc抗体有良好的结合活性。结论:通过发酵工艺优化,提高了rPAc蛋白的可溶性表达量,为进一步规模化研究和生产奠定了基础。
- 金洁李宇红樊明文
- 关键词：发酵纯化发酵优化
- 重组变异链球菌表面蛋白的可溶性表达及抗体制备被引量：4
- 2012年
- 目的探讨重组变异链球菌表面蛋白(rPAc)在大肠杆菌中可溶性表达的最佳诱导条件并制备其多克隆抗体。方法通过改变pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌的培养条件,提高rPAc可溶性表达水平。用纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和Western blot法鉴定抗体的免疫学活性。结果pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌在Luria-Bertan(iLB)培养基(pH值为7.2)上培养,至表示菌体密度的光密度值OD600 nm=0.6时加入1.0 mmol.L-1异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),30℃诱导培养4 h,rPAc的可溶性表达量最高。以纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠,制备抗rPAc多克隆抗体,ELISA法测定抗体效价为1∶6 000,Western blot法鉴定出该抗体可特异性识别rPAc。结论 rPAc高效可溶性表达和抗rPAc多克隆抗体的制备为DNA初次免疫—蛋白质加强免疫策略的深入研究奠定了必要的物质基础。
- 金洁樊明文李宇红
- 关键词：原核表达抗体制备
