国家教育部博士点基金(20060025003)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 相关机构：首都医科大学北京市疾病预防控制中心更多>>
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- 抗旋毛虫副肌球蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2009年
- 目的利用杂交瘤技术制备分泌抗重组旋毛虫副肌球蛋白N端抗原(rTsP3)的单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法以rTsP3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化,采用间接ELISA法测定培养细胞上清液及腹水中的McAb滴度、相对亲和力及抗体亚类,Western blot法鉴定抗体对抗原识别的特异性。结果获得了2株稳定分泌抗旋毛虫rTsP3的McAb杂交瘤细胞株,分泌的McAb分别为IgG2b亚类κ型和IgG1亚类κ型,亲和力常数分别为8.98×108mol/L和9.7×108mol/L,Western blot显示2株单抗均能识别旋毛虫成虫匀浆蛋白、rTsP3及重组副肌球蛋白(rTsPmy)。结论成功制备了抗旋毛虫rTsP3单克隆抗体,该单抗能识别旋毛虫副肌球蛋白抗原。
- 魏骏飞崔世娟潘晋李强顾园杨静杨雅平诸欣平
- 关键词：旋毛虫副肌球蛋白杂交瘤细胞单克隆抗体
- 应用噬菌体随机十二肽库筛选旋毛虫Ts87蛋白抗原表位
- 2009年
- 以抗旋毛虫Ts87蛋白单克隆抗体2A2作为靶标，对噬菌体展示随机十二肽库进行筛选。通过ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并对阳性克隆提取DNA进行测序分析。结果显示，经3轮生物淘洗后，目标噬菌体得到433倍富集。随机挑选20个克隆进行ELISA鉴定，其中有18个噬菌体克隆可以与单抗2A2特异性结合。测序分析发现，这18个克隆带有4种氨基酸序列，分别为：TPHPHIFYREAS、DWKAWTQMLDSY、WQIEYPTLHSLW和VSPYwHEYwsEL。经比对未发现这4种序列与Ts87蛋白序列有明显同源性。将这4株噬菌体克隆扩增后，经Western．blot鉴定均可被单抗2A2识别。结果表明本次筛选鉴定得到的4个噬菌体展示肽可能是旋毛虫Ts87蛋白的模拟抗原表位。
- 顾园魏骏飞李洁崔世娟赵夕诸欣平
- 关键词：旋毛虫单克隆抗体噬菌体展示肽库抗原表位
- 应用RNA干扰技术对旋毛虫Ts87基因功能的初步研究被引量：6
- 2008年
- 为研究旋毛虫Ts87基因的功能,通过RNA干扰途径抑制目的基因的表达。针对Ts87基因序列设计并合成特异性dsRNA、siRNA,通过浸泡方式分别将dsRNA、siRNA导入肌幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析Ts87基因及旋毛虫管家基因GAPDH的表达。此外,测定RNA干扰作用下的肌幼虫体外存活率的变化。根据实时荧光定量PCR结果,dsRNA及siRNA均能有效抑制Ts87基因mRNA的表达。此外,两种RNA能够在一定程度上降低肌幼虫体外存活率。实验表明,RNA干扰技术能够有效抑制旋毛虫功能基因Ts87表达,从而为研究旋毛虫基因的功能提供一种新的有效途径。
- 郝冉杨雅平杨静王少华诸欣平
- 关键词：RNA干扰小干扰RNADSRNA旋毛虫
