国家自然科学基金(30600625)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 沉默结缔组织生长因子基因重组腺病毒的构建及功能验证被引量：2
- 2010年
- 目的:构建沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-siCTGF,并进行功能验证。方法:选取已验证的能高效沉默CTGF基因的靶序列,克隆入载体pSES-HUS中;将质粒线性化处理后与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠埃希菌BJ5183,构建重组腺病毒载体Ad-siCTGF;腺病毒载体用PacI酶切线性化处理后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒;采用"乒乓交互感染法"提高病毒滴度。用此病毒感染4T1细胞,行实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)及Western印迹法验证其沉默效果。结果:PacI酶切电泳证实重组腺病毒载体Ad-siCTGF构建成功,扩增纯化后测定重组病毒Ad-siCTGF的滴度为2.6×1010pfu/mL。感染此病毒后,4T1细胞中CTGF mRNA表达水平下调至36.27%,蛋白表达水平下调至31.56%。结论:成功构建能沉默CTGF基因的重组腺病毒,为进一步研究CTGF在肿瘤中的作用机制奠定了基础。
- 梁睿康权谭俊杰赵利华索涛莉孙艳辉金先庆罗庆
- 关键词：RNA干扰
