国家自然科学基金(30600632)
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
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- 胶原／羟基磷灰石支架负载软骨细胞修复兔膝关节骨软骨缺损被引量：10
- 2010年
- 目的探讨胶原复合梯度羟基磷灰石（Col／HA）双相支架负载软骨细胞修复兔膝关节骨软骨缺损的可行性及疗效。方法构建Col／HA双相支架，将软骨细胞种植于支架培养1周，再将软骨细胞-支架复合体移植修复兔膝关节股骨髁的骨软骨缺损，并对骨软骨缺损的修复进行检测。结果光镜及扫描电镜观察显示软骨细胞在Col／HA支架中贴附良好，表型维持稳定，分泌胞外基质。大体观察和组织学检测显示，植入体内16周后实验组软骨层呈透明软骨样修复，软骨下骨缺损有新骨构建；对照组骨软骨缺损修复不良，组织学检测以纤维性组织或纤维软骨组织形成。Wakitani评分显示实验组修复组织优于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论双相Col／HA复合支架可作为骨软骨组织工程支架，负载软骨细胞可修复兔膝关节骨软骨缺损，重建关节软骨的结构和功能。
- 卢华定曾春蔡道章吴刚王昆温小粤
- 关键词：胶原羟基磷灰石软骨细胞骨软骨缺损
- 壳聚糖微球介导人IL-1Ra与TGF-β1基因转染兔软骨细胞的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨壳聚糖微球介导人IL-1Ra与TGF-β1基因转染兔软骨细胞。方法制备壳聚糖微球介导IL-1Ra质粒与TGF-β1质粒转染系统，检测其载药、体外释药、降解，转染体外培养的兔膝软骨细胞，荧光显微镜、荧光定量PCR、MTF检测。结果壳聚糖-IL-IRa DNA和壳聚糖-TGF-β1 DNA微球平均径粒（2．8±0．2）μm和（2．6±0．1）μm，包封率（88．3±4．1）％和（87．2±2．6）％；缓释分3个阶段。荧光显微镜观察、荧光定量PCR证实软骨细胞转染基因得到30d表达。MTY提示转染促进软骨细胞增殖。结论壳聚糖微球介导IL-1Ra与TGF-β1基因转染软骨细胞可获得较长期目的基因表达，可促进软骨细胞增殖，为用于基因治疗软骨退变和促进软骨修复提供基础。
- 温小粤蔡道章卢华定曾春刘斌
- 关键词：壳聚糖微球转化生长因子Β基因转染软骨
- 壳聚糖微球转染人IL-1Ra与TGF-β1基因治疗兔骨关节炎被引量：3
- 2011年
- 目的探讨壳聚糖微球转染人IL-1Ra与TGF-β1基因治疗兔膝关节早期骨关节炎的方法与效果。方法制备分别包裹IL-1Ra质粒DNA和TGF-β1质粒DNA的壳聚糖微球缓释系统，分组向兔膝关节早期骨关节炎模型关节腔注射含IL—1Ra基因和（或）TGF-β1基因的壳聚糖微球、不含上述基因的壳聚糖溶液，定期处死，使用ELISA检测关节腔灌洗液的IL-1Ra、TGF-β1浓度，取关节标本Mankin评分、苏木精一伊红（HE）染色、番红O染色及免疫组化检测。结果经过60d观察，壳聚糖微球转染基因组的IL-1Ra与TGF-β1的基因可持续表达，双基因组的软骨标本从外观、染色观察，损伤程度轻于单基因组。双基因组的Mankin评分明显低于单基因组（P〈0．05），单基因组的Mankin评分明显低于空白组（P〈0．05）。结论关节腔注射壳聚糖微球转染IL-1Ra与TGF-β1基因能抑制软骨的退变和促进软骨的修复。
- 温小粤卢华定蔡道章陈郁鲜王昆曾春
- 关键词：壳聚糖转化生长因子Β1骨关节炎
- 体外培养包埋透明质酸/壳聚糖/质粒DNA纳米粒的壳聚糖支架负载软骨细胞被引量：2
- 2014年
- 目的 观察包埋透明质酸（HA）/壳聚糖（CS）/质粒DNA （pDNA）纳米粒的壳聚糖支架对软骨细胞生物学性状的影响及基因转染能力,探讨其作为基因活化软骨组织工程支架的可行性.方法 构建包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架,负载兔关节软骨细胞体外培养,1～2周后通过扫描电镜、组织学、免疫组织化学、倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜检测支架对软骨细胞表型及功能的影响,以及基因转染的能力.结果 支架孔径为100～300 μm,孔孔隙率为（86.0±1.2）％;软骨细胞在包埋HA/CS/pDNA纳米粒的支架中贴附良好,维持表型稳定,1～2周时实验组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原等软骨细胞外基质较对照组明显增多,1周时测得支架中的HA/CS/pDNA纳米粒介导基因转染软骨细胞并表达绿色荧光蛋白.结论 包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架细胞相容性良好,能转染培养的软骨细胞表达绿色荧光蛋白.
- 卢华定吕璐璐赵慧清戴驭虎
- 关键词：壳聚糖软骨细胞
- 透明质酸/壳聚糖/pEGFP纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞的比较被引量：2
- 2012年
- [目的]以透明质酸(HA)修饰的壳聚糖(CS)/质粒DNA(pDNA)纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞,以明确其作为非病毒基因载体治疗关节疾病的潜能。[方法]将HA修饰的CS与负载增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的pDNA以复凝聚法制成纳米粒,以扫描电镜检测纳米粒形态;激光粒度仪测定其粒径、Ze-ta电位及分散度(PDl);凝胶电泳阻滞试验检测HA/CS和pDNA的结合力及pDNA的释放;体外转染兔关节软骨细胞与滑膜细胞,以流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率。[结果]HA/CS/pDNA纳米粒多呈球形,粒径平均为(142.5±20.3)nm,表面Zeta电位平均为(25.99±8.48)mV,分散度平均为(0.283±0.089),可有效保护pDNA免受核酸酶的降解;通过调节pH值至7.5以上或加入壳聚糖酶可促使纳米粒中的pDNA释放;体外转染实验证明HA/CS/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染软骨细胞和滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,其对软骨细胞的转染能力较强,比裸pEGFP和CS/pEGFP纳米粒有更高的转染效率(P<0.05);但对滑膜细胞的基因转染效率较低,与CS/pEGFP纳米粒无明显差别(P>0.05)。[结论]复凝聚法制备的HA/CS/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染载体,在体外可介导基因转染关节软骨细胞和滑膜细胞,其转染效率具有明显的细胞依赖性。
- 吕璐璐卢华定陆慧琼张富程赵慧清
- 关键词：壳聚糖透明质酸基因转染软骨细胞滑膜细胞
- 透明质酸修饰壳聚糖／pDNA纳米微球的制备及体外转染软骨细胞被引量：6
- 2011年
- 目的以透明质酸（HA）修饰基因载体壳聚糖（CS）纳米微球，制作一种新型的HA／CS／pDNA基因转染系统，观察其结构特征及体外对软骨细胞的转染能力。方法将不同比例的HA和CS与负载增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）的质粒DNA（pDNA）以复凝聚法制成纳米微球，以扫描电镜检测纳米微球形态，Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位；凝胶电泳阻滞实验观察CS和pDNA的结合力；体外转染兔关节软骨细胞，以流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率。结果HA／CS／pDNA纳米微球多呈球形，粒径为（223±51）mm，表面Zeta电位为（17．4±6．1）mV，可有效保护pDNA免受DNaseⅠ的降解。体外转染实验证明HA／CS／pDNA纳米微球能介导pEGFP转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白，转染率达（15．450±0．404）％，比裸pDNA组和CS／pDNA组有更高的转染效率（P〈0．05）。结论复凝聚法制备的HA／CS／pDNA纳米微球是一种有效的新型非病毒基因转染系统，对软骨细胞有着潜在的靶向基因转染能力。
- 赵慧清卢华定王昆温小粤史德海
- 关键词：透明质酸基因载体转染软骨细胞
- 转化生长因子β1基因缓释的壳聚糖纳米粒制备及体外检测被引量：3
- 2012年
- 背景:壳聚糖作为一种非病毒载体,具有低毒性、低免疫原性、良好的生物相容性以及带可高正电荷密度的特性,易与带负电荷的DNA通过静电作用形成相互作用体避免核酸酶的降解。目的:构建负载重组人转化生长因子β1基因的壳聚糖纳米粒,检测其体外缓释转化生长因子β1基因及对软骨细胞基因转染等性能。方法:将壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白基因和转化生长因子β1基因的质粒DNA(pDNA)以复凝聚法制成壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒。结果与结论:制备的壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒呈球形,粒径、表面电位与pH值相关,随着pH值升高,粒径增大,表面电位减少。纳米粒可有效保护pDNA免受核酸酶的降解。纳米粒的pDNA包封率为(87.5±2.3)%;pDNA可从纳米粒中缓慢释放。体外转染实验证实壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒能转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白。提示壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒能有效保护pDNA免受核酸酶降解,具有良好的缓释转化生长因子β1基因的能力,并能介导基因转染软骨细胞。
- 卢华定吕璐璐赵慧清王昆
- 关键词：转化生长因子Β1壳聚糖基因载体
- 壳聚糖-负载增强型绿色荧光蛋白基因的质粒DNA纳米微球体外转染软骨细胞的能力及影响因素被引量：2
- 2011年
- 目的探讨壳聚糖介导体外基因转染软骨细胞的能力及不同条件下基因转染率的变化，以筛选最佳转染条件。方法将壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的质粒DNA（pDNA）以复凝聚法制成壳聚糖／pEGFP纳米微球，用扫描电镜检测纳米微球的形态，Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位及分散度。以脂质体为对照，观察对软骨细胞的毒性。体外转染兔关节软骨细胞，以裸pDNA及脂质体为对照，流式细胞仪及荧光显微镜检测基因转染率。检测在不同pH值、N／P比值及pDNA剂量下壳聚糖／pEGFP纳米微球介导对软骨细胞的转染率变化。结果壳聚糖／pEGFP纳米微球呈球形，平均粒径为（141．5±26．7）nm，表面Zeta电位平均为（17．8±3．9）mV，分散度平均为0．227±0．025。细胞毒性试验显示壳聚糖／pEGFP纳米微球与软骨细胞相容性良好，与脂质体比较差异有统计学意义（P〈0．05）。体外转染实验证实壳聚糖／pEGFP纳米微球能转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白，在pH值为7．0、N／P为5、pDNA浓度为4．0μg／mL时基因转染率最高，48h转染率达10．9％±0．2％。结论复凝聚法制备的壳聚糖／pEGFP纳米微球是一种有效的非病毒基因转染系统，细胞毒性小，对软骨细胞有一定基因转染能力，其转染率与pH值、N／P比值及pDNA剂量等密切相关，pH值为7．0、N／P为5、pDNA浓度为4．0μg／mL是其最佳转染条件。
- 卢华定赵慧清吕璐璐王昆
- 关键词：壳聚糖绿色荧光蛋白质类转染软骨细胞
