“十五”国家科技攻关计划(2004BA718802)
- 作品数：18 被引量：195H指数：9
- 相关作者：庄辉梁争论李河民胡忠玉李杰更多>>
- 相关机构：北京大学中国药品生物制品检定所江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市科委课题国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎疫苗免疫研究进展被引量：7
- 2008年
- 乙型肝炎（乙肝）疫苗自20世纪80年代问世以来，逐渐在世界各国得到广泛应用，由最初采用乙肝血源疫苗逐渐过渡到基因重组疫苗（酵母和CHO基因重组疫苗），以及各种类型的联合疫苗。应用不同类型和剂量的乙肝疫苗在各种人群中的免疫效果研究证实，该疫苗具有良好的免疫原性和保护效果。以下对乙肝疫苗控制HBV感染所取得的成效，以及对免疫应答和加强免疫等方面主要研究进展简要综述。
- 刘学恩庄辉
- 关键词：乙型肝炎疫苗计划免疫
- 重组乙型肝炎疫苗和乙型肝炎表面抗原诱导细胞免疫应答被引量：3
- 2008年
- 目的 探讨重组乙型肝炎（乙肝）疫苗和汉逊酵母菌表达的乙肝表面抗原（rHBsAg）诱导动物和人体细胞免疫应答的动态变化。方法 应用不同剂量rHBsAg免疫小鼠（BALB／c，H-2^d），酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测小鼠脾单个核细胞（MNC）体外刺激诱生IFN-γ的水平；单剂rHBsAg免疫后不同时间检测MNC、CD8^＋T淋巴细胞产生IFN-γ水平；同时测定免疫后不同时间细胞毒T淋巴细胞反应（CTL）活性；检测免疫单剂和多剂乙肝疫苗后小鼠MNC分泌IFN-γ、IL-2、IL-5和抗-HBs抗体水平；对乙肝感染标志阴性的4名成年人按0、1、2个月程序接种乙肝疫苗，检测免疫后外周血单个核细胞（PBMC）、CD；T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2和IL-4水平以及抗体动态。结果 应用ELISPOT法，汉逊rHBsAg免疫小鼠7d时，可检测到IFN-γ应答，14d时达到高峰；CTL在免疫后7d时可检出，峰值位于28d。在1～8ug免疫剂量范围内，MNCs IFN-γ免疫应答与剂量呈显著正相关（阳转率：r=0．951，P=0．049〈0．05；SFC：r=0．996，P=0．000〈0．05），在1～4ug免疫剂量范围内，CD8^＋T淋巴细胞的IFN-γ与剂量也呈显著正相关（r=0．999，P=0．025〈0．05）；三剂乙肝疫苗免疫小鼠诱生细胞免疫和体液免疫应答水平均显著高于单剂（P值均〈0．05）；成年人接种汉逊乙肝疫苗后不同个体间细胞免疫和体液免疫应答的模式不同，IL-2、IL-4应答与个体抗体滴度有关。结论 用ELISPOT法成功测定了汉逊HBsAg免疫小鼠后不同淋巴细胞的细胞免疫剂量效应和CTL时间动态变化，并分析了成年人的细胞免疫应答特点，为规范疫苗细胞免疫评价提供了基础。
- 胡忠玉何鹏张瑞方鑫朱凤才邱少辉李河民汪华梁争论庄辉
- 关键词：乙型肝炎疫苗乙型肝炎表面抗原
- 乙型肝炎病毒B基因亚型（Ba，Bj）半巢式PCR检测方法的建立
- 2008年
- 目的建立一种灵敏特异且简便易行的乙型肝炎病毒（HBV）B基因Ba和Bj亚型分型方法。方法用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的B基因型HBV（HBV／B）和C基因型HBV（HBV／C）的基因序列，分别设计出HBv／B型特异性引物HB及Ba和目基因亚型特异性引物BA和BJ。第一轮PCR反应以HBV／B型特异性引物HB作为上游引物，以日本学者Sugauchi等设计的引物HBAS-4V作为下游引物（外引物）；第二轮PCR反应同样以HB作为上游引物，亚型特异性引物BA和BJ作为下游引物（内引物），在同一个反应管中进行。根据PCR产物片段的大小判定B基因亚型。随机选取实验室内经型特异性引物PCR法鉴定为HBv／B（56份）及经preS／S区序列测定证实为HBV／C（15份）的HBV慢性感染者血清标本共71份，以研究设计的引物进行半巢式PCR反应，检测Ba和Bj基因亚型，并以载有HBVBi亚型基因组的质粒作为尉亚型的阳性对照。然后随机选取15份B型样本的第一轮PCR产物直接测序，利用Blast和DNAStar软件将测序结果与GenBank中登录的Ba及Bj亚型序列进行同源性分析，验证该半巢式PCR法的准确性。结果56份HBV／B血清标本经该半巢式PCR法检测，均为Ba亚型，随机选取的15份B型PCR产物直接测序，结果均为Ba亚型，与研究中应用的半巢式PCR方法检测结果一致。15份HBV／C的血清标本检测结果均为阴性。结论建立了HBVBa和Bi亚型半巢式PCR法。该方法灵敏、特异、简便、易行，可用于临床和流行病学大样本检测。
- 王杰高俊薇李杰庄辉王佳李雅娟金晖
- 关键词：B基因型半巢式聚合酶链反应
- 检测乙型肝炎病毒“a”决定簇热点突变基因芯片的制备和初步应用被引量：2
- 2007年
- 目的为快速、高通量检测HBV“a”决定簇热点突变，制备基因芯片，并进行了初步应用。方法应用HBV基因保守序列设计PCR扩增引物，针对“a”决定簇突变设计简并探针，制备了检测126A、126S、144A、145R、145E、144A＋145R和144A＋145E突变的基因芯片。通过对质粒参考品或样本进行测定，以评价芯片的特异性、灵敏度、重复性和检测劣势株的能力，并对45例乙型肝炎患者的血清样本同时应用基因芯片和PCR产物直接测序法进行检测比较。结果所制备的基因芯片能特异性检测出质粒参考品，灵敏度为5×10^3拷贝／μl。同一样本检测10次，芯片内和芯片间变异系数均小于15％。当劣势株占HBV毒株10％以上时，基因芯片即可检出。芯片法测得45例样本中126A、126S-1和126S-2的阳性率（分别为46．67％、35．56％和24．44％）显著高于PCR产物直接测序法（分别为9．00％、4．44％和2．22％;P值分别为0．000、0．000和0．002），克隆测序验证了基因芯片法的特异性。结论基因芯片法可快速、有效地检测HBV特定位点突变株，为HBV突变的大规模筛查提供了方法。
- 张瑞李荣成李艳萍王升启梁争论李河民庄辉
- 关键词：肝炎病毒乙型基因芯片突变
- 中国4城市慢性乙型肝炎病毒感染者中B基因亚型分布被引量：1
- 2008年
- 目的了解北京、石家庄、温州和深圳4城市慢性乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）感染者中B基因亚型（Ba和Bj）的分布情况。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP），对北京（18例）、石家庄（22例）、温州（34例）、深圳（27例）市101例乙肝患者血清标本，经多对型特异性引物巢式PCR鉴定为B基因型慢性HBV感染者的血清标本进行B基因亚型分析，并对部分血清标本以PCR产物直接测序法确定其亚型，以验证PCR-RFLP的准确性。结果经PCR-RFLP分析101例均为Ba亚型，未发现Bj亚型，其中30例经测序分析也证实为Ba亚型。结论4城市的HBV／B主要为Ba亚型。
- 王杰高俊薇庄辉李杰王佳李雅娟金晖
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型聚合酶链反应-限制性片段长度多态性
- 母亲乙型肝炎病毒表面抗原阴性婴儿接种重组乙型肝炎疫苗(酵母)后的抗体无应答分析被引量：16
- 2007年
- 目的探讨母亲乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)阴性婴儿,应用国产重组乙肝疫苗(酵母)常规接种后的乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)应答状况及其特征。方法在河南省开封市筛选母亲HBsAg阴性的7～24月龄婴幼儿8 093例,按0、1、6个月程序接种5μg国产重组乙肝疫苗(酵母),用固相放射免疫法检测抗-HBs,对<10mIU/ml者的性别、城乡、不同月龄等特点进行分析。结果2 970例7～10月龄婴儿中,56例抗-HBs<10mIU/ml,无应答率为1.89%。其中1 911例城市婴儿中7例无应答(0.37%),1 059例农村婴儿中无应答者49例(4.63%),城乡婴儿抗-HBs无应答率的差异有非常显著的统计学意义(χ2=66.87,P<0.01),不同性别婴儿抗-HBs无应答率的差异无显著的统计学意义。城乡婴儿抗-HBs无应答率的差异与疫苗管理及接种质量综合评估呈显著负直线相关。婴儿11～24月龄间抗-HBs下降速度快,至22～24月龄时,已有15.53%抗-HBs阴转,较7～10月龄时增加8.22倍。结论母亲HBsAg阴性的婴儿常规接种5μg国产重组乙肝疫苗(酵母)后,抗-HBs无应答率为1.89%。城市低于农村。全程免疫后婴儿抗-HBs的下降速度快,提示应加大新生儿期疫苗的剂量,重组乙疫苗(酵母)可由5μg/剂提高到10μg/剂。
- 荆庆梁争论王建峰任玲君梁秀芳杨跃进李艳玲李义清刘建生李河民吴晓音胡忠玉贺艳霞庄辉
- 对四种国产乙型肝炎酶联免疫试剂盒的灵敏度和特异度分析被引量：14
- 2008年
- 目的比较4种国产乙型肝炎（乙肝）ELISA试剂盒的灵敏度和特异度。方法取慢性乙肝患者和不合格献血员血液样本594份，应用4种国产乙肝ELISA试剂盒检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hge和抗-HBc，并与1种国外乙肝化学发光试剂盒（Abbott公司Architect）比较，对结果不一致的样本再用各试剂盒做双孔重复检测，对HBsAg临界值附近的样本用Abbott HBsAg确证试剂盒（Architect HBsAg confirm）验证；以Abbott试剂盒（Architect）的检测结果为标准，计算4种国产ELISA试剂盒的灵敏度、特异度、总符合率和约登指数。然后用上述试剂盒检测HBV5项标志物的灵敏度参比品，比较不同试剂盒的灵敏度。结果与Abbott公司Architect试剂盒相比，国产IqBsAg ELISA试剂盒的灵敏度低4～10倍；抗-HHs、HBeAg、抗-HHe和抗-HBcELISA试剂盒的灵敏度低4～16倍；且有假阳性。HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc的总符合率分别为96．46％～98，15％、94．28％～98．15％、98．15％～99，49％、90.07％～96．30％、92.09％～96．80％。结论国产乙肝ELISA试剂盒的灵敏度和特异度有待进一步提高。
- 吴星周诚黄维金祁自柏梁争论李河民庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒诊断试剂酶联免疫吸附试验
- 新生儿乙肝酵母疫苗免疫后抗体无应答者的再免、加强免疫与细胞免疫的研究被引量：15
- 2007年
- 目的HBsAg阴性母亲婴儿应用国产乙型肝炎重组酵母疫苗常规接种后的抗-HBs无应答者的再免、加强免疫效果，以及抗体阴性婴儿细胞免疫应答状况。方法在河南省开封市筛选8093例7-24月龄，母亲HBsAg阴性，按0、1、6月程序接种国产5μg乙肝酵母疫苗的健康婴儿，RIA法检测抗-HBs。对无应答者进行5μg×2或×3；10μg×2或×3剂4组疫苗再免、加强免疫效果的比较。随机选择加免后抗体阳性和仍阴性的婴儿，用ELISPOT方法测定PBMC体外刺激产生的IFN—r和IL-2。结果2970例7～10月龄婴儿中56例抗-HBs低于10mIU／ml者分4组再免后，抗-HBs阳转率〉85％。而11～24月龄5933例中346例无应答者也同上分为4组。加强免疫后，抗-HBs阳转率为92．59％～97．92％，无统计学差异。10例加强免疫后抗体仍持续阴性婴儿TH1类细胞因子IL-2和IFN-r的阳性率分别为30％和20％，低于有应答人群（19／32，59．38％；11／32，37．04％）。结论母亲HBsAg阴性的婴儿常规接种5μg乙肝疫苗后抗体无应答者，用5μg、10μg两剂或三剂加强免疫都有良好的抗体阳转效果。加免抗体仍阴性婴儿与正常应答者存在明显的细胞免疫应答的差别。
- 荆庆梁争论王建峰任玲君梁秀芳李仪清刘建生杨跃进李艳玲贺艳霞李河民吴晓音胡忠玉庄辉
- 关键词：再免加强免疫细胞免疫
- 乙型肝炎疫苗免疫效果影响因素和加强免疫策略研究被引量：32
- 2007年
- 我国“八五”、“九五”科技攻关期间，曾对不同种类国产和进口重组乙肝疫苗进行了免疫原性和免疫效果的比较，证明重组乙肝疫苗特别是乙肝酵母重组疫苗具有较高的母婴阻断保护效果。在此基础上，又在“十五”期间，通过建立敏感、特异的病毒变异株检测技术，规范细胞免疫检测方法，结合现场流行病学调查，对影响我国乙肝疫苗免疫效果的主要因素进行了系统研究。
- 梁争论李河民庄辉
- 关键词：疫苗免疫效果乙型肝炎重组乙肝疫苗现场流行病学调查病毒变异株
- 中国11城市乙型肝炎病毒慢性感染者中乙型肝炎病毒基因型分布被引量：38
- 2007年
- 目的了解中国乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染者中HBV基因型的分布情况。方法收集北京、清远、深圳、石家庄、汉川、南京、长春、济南、聊城、宁波和温州市共1214份HBV DNA阳性的慢性HBV感染者血清样本,用型特异性引物聚合酶链反应法（PCR）进行基因型测定,并对其中部分样本以PCR产物直接测序验证。结果在1214份血清中,检测到A基因型9例,占0．7%;B基因型345例,占28．4%;C基因型709例,占58．4%;B、C混合基因型（B＋C）151例,占12．4%。未检测到其他基因型。北方地区（长春、北京、石家庄市等）慢性HBV感染者中,C基因型比例较高,分别为58．2%、67．5%和63．6%,山东省聊城和济南市的C基因型比例分别高达90．2%和87．9%。随地理位置南移,B基因型比例逐渐增加,广东省清远和深圳市的B基因型比例分别为71．4%和63．6%。结论HBV基因型分布有明显地区差异。在中国慢性HBV感染者中,HBV C和B基因型为主要流行株。北方地区以C基因型为优势株,而南方地区则B基因型较为多见。
- 高俊薇李雅娟庄辉李杰王佳董庆鸣陈雅洁牛俊奇马为民赵伟赵保安钟金群
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶链反应基因型
