国家高技术研究发展计划(2002AA2Z3318)
- 作品数：18 被引量：73H指数：5
- 相关作者：李校堃郑青许华吴晓萍苏志坚更多>>
- 相关机构：暨南大学吉林大学温州医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- aFGF核转位序列的敲除后蛋白结构稳定性及促分裂活性的变化被引量：2
- 2006年
- 目的通过比较野生及重组人类酸性成纤维细胞生长因子(waFGF,raFGF)的蛋白结构稳定性、细胞增殖活性的影响,探讨核转位序列的敲除对aFGF促分裂活性的影响。方法Western-blot检测waFGF和raFGF两种蛋白结构稳定性;MTT法检测NIH3T3细胞增殖,即促细胞分裂活性;流式细胞术检测其对细胞周期的影响;同时,检验肝素(HS)对waFGF和raFGF有关生物学作用。结果waFGF的结构稳定性大于raFGF;细胞增殖实验表明,waFGF的促分裂活性大于raFGF,P<0.05。在肝素的参与下,waFGF和raFGF表现出更大的促分裂活性;结论与waFGF比,raFGF的结构稳定性小于waFGF,具有较弱的促分裂性,仍具有刺激DNA合成和细胞增殖的能力。肝素具有增强aFGF活性的作用,可作为aFGF体外实验中模仿机体内环境的辅助因子。
- 吕文天付士波彭菲吕喆顾加祥王志成李校堃龚守良
- 关键词：肝素细胞增殖
- nmhaFGF对SD大鼠缺血再灌注视网膜SOD、MDA、NO的影响被引量：11
- 2005年
- 目的观察非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后视网膜超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的影响。方法40只SD大鼠随机分为对照组10只,实验组(nmhaFGF组)30只。实验组(大鼠左眼)又分为nmhaFGF低剂量组(1.25μg组)、nmhaFGF中剂量组(2.5μg组)、nmhaFGF高剂量组(5μg组)各10只,右眼为模型组(给予等量生理盐水)。采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。再灌注24h后分光光度法测定视网膜MDA、SOD含量,GRIESS反应测定NO含量。结果与模型组相比,nmhaFGF中剂量组、nmhaFGF高剂量组MDA含量显著降低(P<0.01),SOD、NO含量显著升高(P<0.05);nmhaFGF低剂量组和模型组之间SOD、MDA、NO含量没有显著差异(P>0.05)。结论nmhaFGF具有抗视网膜缺血再灌注氧自由基的作用;视网膜缺血再灌注损伤时,nmhaFGF可以增加视网膜内NO的含量,并呈现一定的量效关系。
- 郑青湛敏许华吴晓萍李校堃
- 关键词：视网膜缺血再灌注超氧化物歧化酶丙二醛一氧化氮
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子复方喷剂治疗宫颈糜烂临床研究被引量：2
- 2006年
- 目的观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)-蛇床子复方喷剂对宫颈糜烂的治疗效果。方法将复方喷剂每日早晚各1次,喷于阴道深部,连用10d。计算治愈率、显效率、有效率及创面痊愈时间。比较单用复方喷剂与复方喷剂宫颈波姆光照射联用的疗效和创面痊愈时间。结果单用复方喷剂治疗宫颈糜烂的总有效率为94.5%,其中治愈率38.2%,显效率40.0%,有效率16.4%,同对照药治糜灵栓的疗效相似(P>0.05),但痊愈时间缩短(P<0.05)。复方喷剂与宫颈波姆光照射联用,可使后者的疗效提高,痊愈时间缩短(P<0.05)。结论复方喷剂可促进宫颈糜烂的愈合。
- 许华王艳萍刘太胜姚成灿郑青李校堃
- 关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子波姆光治糜灵
- 一种合成人血小板因子4基因的简便有效方法(英文)
- 2005年
- 目的:用一种简便有效的方法合成hPF4基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。方法:根据hPF4基因的序列,用touch-down PCR的方法合成hPF4基因,将合成的基因片断克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建了重组质粒pGEX-4T-1-hPF4,并将之转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达由谷胱甘肽转移酶和hPF4组成的融合蛋白。结果:用touch-down PCR的方法成功合成了hPF4基因。融合蛋白形成包含体,表达量约为全菌体蛋白的30%。结论:Touch-down PCR方法可作为合成其它目的基因的简便有效方法。BL21(DE3)/pGEX-4T-1表达系统能高效表达合成的hPF4基因,为下一步hPF4的纯化与生物学活性研究打下了基础。
- 吴晓萍苏志坚郑青吴思娴许华赵文李校堃
- 关键词：基因合成基因表达
- 一种缺失核定位信号区的hbFGF的表达及纯化(英文)
- 2005年
- 目的:为了研究缺失核定位信号区的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)独特的转运机制,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化了缺失核定位信号区的hbFGF。方法:将PCR扩增得到的hbFGFcDNA片断克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白,MTT法检测促分裂活性。结果:hbFGF的表达量约为全菌体蛋白的20%,纯化的缺失核定位信号区的hbFGF的促分裂活性与缺失核定位信号区的hbFGF标准品相当。结论:BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达缺失核定位信号区的hbFGF,纯化得到的hbFGF可用于进一步的研究。
- 吴晓萍苏志坚郑青吴思娴冯雅曲红艳许华李校堃
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子核定位信号纯化
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子Ⅰ期临床研究被引量：6
- 2005年
- 目的:确定人体对重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)的耐受性程度并研究其在人体的药动学特性。方法:将36例深Ⅱ°烧伤患者随机分为5组,分别在创面滴注不同剂量的rhaFGF(25,50,100,200和300 U.cm-2),qd,直至创面愈合,或用至21 d。比较各组创面愈合时间和愈合率,定期测定体温、脉搏、血压、呼吸及血尿常规、肝肾功能。并用ELISA方法测定血清rhaFGF的浓度。结果:除4例发生局部疼痛外,各剂量组均未见明显不良反应;该药很少经表皮创面吸收进入血液,各剂量组在用药后不同时间点均未能在血清中测到rhaFGF;各剂量组创面愈合时间以100 U.cm-2剂量组最短。结论:rhaFGF按剂量25,50,100,200和300 U.cm-2用于烧伤患者是安全的,以100 U.cm-2剂量组创面愈合所需时间最短。推荐Ⅱ期临床试验中使用剂量为100 U.cm-2。
- 许华郑青吴晓萍付小兵曹之舫李校坤
- 关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子创伤耐受性药动学
- 非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子的受体结合特性及对MAPK信号通路的影响被引量：21
- 2005年
- 目的:研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non- mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfac tor,nm haFGF)促细胞增殖活性的变化及其作用机制。方法:采用MTT法测定人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和nm- haFGF对NIH3T3细胞株的增殖活性;采用受体放射性配基结合法,测定haFGF和nm- haFGF与其受体结合的亲和力及受体总结合位点数RT ;利用Western印迹检测haFGF和nm- haFGF分别作用于NIH3T3细胞后MAPK信号通路中ERK信号分子的表达。结果:与haFGF比较,nm- haFGF对NIH3T3细胞的促增殖活性降低,nm -haFGF与NIH3T3细胞胞膜上aFGF受体结合的亲和力下降,但与受体结合的总位点数不变。Western半定量检测结果显示,nm -haFGF组信号蛋白ERK的表达水平明显低于haFGF组。结论:nm -haFGF与受体结合能力下降,下调MAPK信号通路是导致nm haFGF的促分裂活性降低的主要原因之一。
- 汪小凤郑青蔡绍晖吴晓萍许华赵文苏志坚李校堃张敏
- 关键词：受体信号通路
- 碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间质干细胞的作用被引量：3
- 2006年
- 黄志锋张翼郑青李校堃
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子
- 人类重组酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖和凋亡的影响
- 2006年
- 目的:通过对人类重组型和野生型酸性成纤维细胞生长因子(raFGF,waFGF)的比较研究,探讨raFGF与促分裂性有关的生物学作用。方法:应用NIH3T3细胞株,用MTT法通过细胞增殖实验检测waFGF和raFGF的促分裂性,通过流式细胞术检测细胞凋亡、细胞膜通透性和线粒体膜电位。同时检测肝素(HS)对aFGF生物学作用的影响。结果:raFGF对细胞增殖作用明显低于waFGF。raFGF对细胞凋亡的抑制作用及其对细胞膜通透性的增强作用也明显低于waFGF,对线粒体膜电位的增强作用明显低于waFGF。HS对aFGF的生物学作用具有促进作用。结论:raFGF的促分裂作用低于waFGF,而对细胞凋亡的影响不明显。
- 吕文天赵红光龚平生王志成姜晓燕李校堃龚守良
- 关键词：肝素细胞膜通透性线粒体膜电位细胞凋亡
- pH值对纤维素酶系内切β-葡聚糖苷酶活力影响的酶催化动力学模型被引量：15
- 2006年
- pH值是影响酶催化反应速率的重要因素之一,建立动力学模型有助于定量分析酶解反应。经典的“三状态”动力学模型未考虑pH值对底物解离状态的影响及产物抑制的作用,该文对“三状态”动力学模型进行改进。在一系列假设基础上提出绿色木霉产纤维素酶水解羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的反应机理,建立了pH值对纤维素酶系内切β-葡聚糖苷酶活力影响的动力学模型,推导出反应速率表达式。Lineweaver-Burk作图法求得内切β-葡聚糖苷酶水解CMC-Na在不同pH的动力学参数:K′m和V′max,试验最佳初始pH值与模型计算pH值符合,从而模型得以验证。
- 杨树林孟广荣曾亮亮
- 关键词：绿色木霉纤维素酶内切Β-葡聚糖苷酶酶催化PH值
