国家自然科学基金(30300324)
- 作品数：17 被引量：21H指数：3
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- 反义细胞外信号调节激酶-2基因治疗移植物动脉血管病内膜病变被引量：5
- 2011年
- 目的观察移植物动脉血管病（TA）的内膜病变机制和反义细胞外信号调节激酶2基因腺病毒载体（Adanti．ERK2）基因治疗的效果。方法建立Brown．Norway（BN）-Lewis移植物动脉血管病模型，分为同系组、Control组、LacZ组和Adanti—ERK2组（给予5×10^9pfuAdanti—ERK2基因治疗），每组各6例。术后60d检测各组内膜病变和血管腔内膜／（内膜＋中膜）比，α-肌动蛋白（d—actin）和血小板源性生长因子．BB（PDGF—BB）染色检测移植动脉平滑肌细胞（VSMCs）增殖和分泌功能，评估移植动脉新生毛细血管情况并检测移植动脉中环氧化酶．2（COX-2）的表达。结果术后60d同系组内膜无异常，Control组和LaeZ组典型内膜增殖改变，Adanti—ERK2组内膜病变较轻；内膜／（内膜＋中膜）比各组分别为7．6％、81．4％、85．9％、15．9％；α-actin阳性细胞（内膜平滑肌细胞）每视野计数各组分别为0、71．3±9．2、76．4±11．3、34．8±5．3；PDGF—BB阳性细胞每视野计数各组分别为0．9±0．5、28．4±3．4、29．1±3．2、8．6±1．7；移植动脉中膜和内膜新生毛细血管检测各组分别无、丰富、丰富、少量；COX．2新生血管阳性细胞计数各组分别为0、36．3±8．3、40．9±9．2、10．4±3．9。Adanti．ERK2组与其他组别间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论内膜增生，血管腔缩窄，PDGF．BB诱导内膜平滑肌细胞募集分化并激发血管新生是TA重要病理生理环节，Adanti—ERK2基因治疗可有效干预各发病环节，达到治疗效果。
- 赵波宫念樵
- 关键词：内膜血管新生ERK2基因治疗
- 阻断ERK2信号转导通路对血小板源生长因子-BB诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移和表达转化生长因子-β1的影响被引量：5
- 2008年
- 目的观察ERK2信号转导通路在血小板源生长因子（PDGF—BB）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖、迁移和表达转化生长因子（TGF）-β1中的作用。方法将原代培养的大鼠VSMC分为4组：（1）对照组；（2）PDGF刺激组；（3）Ad—LacZ组；（4）Adanti—ERK2组。用Western blot检测细胞磷酸化ERK2蛋白水平；噻唑蓝（MTF）比色法测定细胞增殖率；流式细胞仪检测细胞细胞周期；Boyden小室测定细胞的跨膜迁移能力；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞培养液上清中TGF—β1的浓度。结果Adanti-ERK2组和对照组细胞增殖率、S期细胞百分比及跨膜迁移细胞数目明显低于PDGF刺激组和Ad—LacZ组（细胞增殖率：2．75％、0．00％比64．45％、61．88％；S期细胞百分比：14．18％、13．58％比38．14％、32．99％；跨膜迁移细胞数：8．2±3．2、6．3±2．6比24．8±6．1、23．3±5．8，均P〈0．05）；（2）Adanti—ERK2组和对照组细胞培养上清液中TGF-β1含量明显低于PDGF刺激组和Ad—LacZ组（P〈0．05）；而Adanti—ERK2组明显高于对照组（P〈0．05）。结论ERK2信号转导通路参与调控PDGF—BB诱导的VSMC增殖、迁移和基因表达。反义ERK2基因预先转染阻断ERK信号转导能显著抑制PDGF-BB刺激的VSMC增殖、迁移，阻断细胞周期由G1期进入S期，并且部分下调TGF—β1的合成分泌。
- 陈曦林宫念樵陈知水丁召
- 关键词：胞外信号调节激酶血管平滑肌细胞迁移
- 结缔组织生长因子诱导人肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的实验研究
- 2009年
- 目的探讨结缔组织生长因子（CTGF）对肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的影响。方法体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2），按是否用CTGF处理将其分为实验组和对照组。直接免疫荧光法、间接免疫化学检测培养72h后肾小管上皮细胞E—cadherin、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、细胞外信号调节激酶2（ERK2）的表达；Western blot方法在72h检测E—cadherin、波形蛋白和ERK2的表达；Boyden小室在1、3、5d检测细胞迁移能力的变化。结果（1）实验组上皮细胞表型标志蛋白E-cadherin随着时间的延长而表达递减，波形蛋白表达渐增，ERK2表达上调；（2）在第1天，实验组与对照组细胞迁移能力差异无统计学意义，第3天实验组迁移至滤膜下面细胞多于对照组，第5天实验组细胞迁移数明显高于对照组[（45．0±1．1）：（14．0±1．2），P〈0．05]。结论在体外，人肾小管上皮细胞由CTGF刺激表现出向间充质细胞转化的特性，并且ERK2信号转导通路可能参与了对这一过程的调控效应。
- 丁召陈知水陈曦林郭晖宫念樵
- 关键词：肾小管上皮细胞结缔组织信号传导
- 慢性移植肾肾病的临床病理学特点与免疫抑制剂转换治疗
- 2007年
- 目的探讨慢性移植肾肾病(CAN)的病理学特点与临床应对策略。方法对20例临床诊断为慢性移植肾功能减退、病理诊断为CAN者的病理资料进行系统分析,依据Banff97标准对肾小球硬化、间质纤维化、肾小管萎缩及小动脉内膜炎等CAN特征性表现进行综合评分后,做出病理诊断和分层分析。20例肾移植后采用以环孢素A(CsA)为基础的免疫抑制方案,诊断为CAN后,3例转换为他克莫司(FK506)与霉酚酸酯(MMF)联用,17例转换为西罗莫司(Sir)与MMF联用,比较转换治疗前后肾功能的变化。结果9例(45%,9/20)合并发生亚临床排斥反应,激素冲击治疗有效;20例均存在间质纤维化、肾小管萎缩与肾小球硬化。慢性移植肾功能减退对转换治疗的反应与间质纤维化和肾小管萎缩的程度无明显相关性,但与肾小球硬化率密切相关,肾小球硬化率低于30%者预后良好,超过50%者移植肾功能丧失。结论肾小球硬化率有可能成为判断CAN病变程度和预后的指标;治疗慢性移植肾功能减退时应重视合并发生的亚临床排斥反应,撤除CsA、采用Sir与MMF联用方案值得推荐。
- 宫念樵明长生郭晖陈忠华
- 关键词：肾病移植物活组织检查针吸
- 血小板衍生生长因子B链与血管新生促进移植物动脉血管病发展
- 2008年
- 目的以大鼠颈总动脉移植为模型探讨移植物动脉血管病(TA)的病理生理机制。方法建立大鼠颈总动脉移植模型。受体随机分3组,同系组(n=6):Lewis至Lewis颈总动脉移植;TA组(n=7):Brown-Norway(BN)至Lewis颈总动脉移植;干预组(n=7):BN至Lewis颈总动脉移植,术后给予阿司匹林80mg/(kg·d)治疗8周。术后8周取移植动脉做病理学分析,观察动脉内膜平滑肌细胞增殖和新生毛细血管生成情况,评估内膜增生程度;免疫组织化学法检测血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)和环氧化酶2(COX-2)的表达。结果①同系组移植动脉内膜未见增生;TA组内膜见大量的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,新生内膜中见丰富的新生毛细血管形成;干预组较TA组内膜增生程度减轻(P<0.05),内膜厚度减少48.0%。②PDGF-B、COX-2在同系组几乎不表达,而在TA组移植动脉内膜显著表达;干预组较TA组PDGF-B、COX-2表达下调,阳性细胞显著减少(P<0.05)。结论TA的发病是一个多途径、多机制的病理生理过程;新生内膜高表达PDGF-B和血管新生促进了TA的发展。
- 陈文伟明长生杨亦荣夏鹏郭晖宫念樵
- 关键词：血管新生血小板衍生生长因子环氧化酶2
- 反向克隆法大鼠anti-ERK2腺病毒载体构建被引量：4
- 2006年
- 目的正义基因反向克隆法构建大鼠anti-ERK2腺病毒载体。方法酶切质粒p3XFLAG-CMV7.1-ERK2,得到ERK2cDNA片段,连接到T载体进行测序,经测序正确反向克隆法插入质粒pShuttle中,最后转入AdEasy(tm)XLAdenoviralVectorSystem系统中得到anti-ERK2基因腺病毒载体。结果DraI和NotI双酶切鉴定anti-ERK2基因腺病毒载体,发现插入的基因序列与插入方向均符合预期目标。结论成功构建了大鼠anti-ERK2腺病毒载体,为研究移植排斥中ERK2基因治疗的作用提供了良好工具。
- 董冲刘云宫念樵陈曦林唐莉朱国超陈知水叶启发
- 关键词：腺病毒载体
- 移植物转染反义细胞外信号调节激酶-2基因减轻慢性移植物血管病
- 2008年
- 目的研究转染反义ERK2基因对慢性移植物血管病的抑制作用及其机制。方法构建含有反义ERK2基因和带有LacZ基因的腺病毒载体。以BN大鼠为供者，Lewis大鼠为受者，制作大鼠腹主动脉移植模型。ERK2组接受转染反义ERK2基因的腹主动脉移植，LacZ组接受转染LacZ基因的腹主动脉移植，对照组接受不进行处理的腹主动脉移植。移植后60d，取各组移植血管和血清样本，以2，3二羟基丙醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参照，计算ERK2条带灰度与GAPDH条带灰度的比值（ERK2／GAPDH，即为ERK2的相对表达强度）；测量移植血管内膜厚度（I）和中膜厚度（M），计算I／（I＋M）之百分比；检测移植血管平滑肌细胞（VSMC）的数目和分布；检测血清血小板源性生长因子一BB（PDGF_BB）的浓度。结果对照组、LaeZ组和ERK2组ERK2／GAPDH的比值分别为1．21±0．15、1.02±0.06和0.47±0．09，后者显著低于前二者（P〈0．05）。对照组和LaeZ组移植血管呈典型的移植物血管病表现，两组I／（I＋M）比值分别为84．1％和79．9％；ERK2组移植血管呈移植动脉内膜炎表现，该组1／（I＋M）比值为13．7％，显著低于前两组（P〈0．05）。对照组和LacZ组内膜增厚处散在分布大量VSMC，计数分别为（71．3±9．2）个和（76．4±11．3）个；ERK2组内膜处VSMC计数为（34．8±5．3）个，明显少于前两组（P〈0．05）。对照组和LaeZ组受者血清PDF-BB浓度分别为（1075±70）pg／ml和（1200±25）pg／ml，ERK2组为（626±27）pg／ml，ERK2组明显低于对照组和LacZ组（P〈0．05）。结论转染反义ERK2基因可减轻慢性移植物血管病，并延缓其进展，其机制可能与VSMC增殖和迁移受到抑制以及PDGF-BB表达下调有关。
- 陈曦林宫念樵陈知水丁召董冲郭晖
- 关键词：细胞外信号调节MAP激酶类转染移植物
- 大鼠供肾转染反义ERK2基因减缓肾移植后慢性移植肾肾病的作用及机制
- 2008年
- 目的研究腺病毒介导的反义ERK2（Adanti-ERK2）基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病（CAN）的作用及机制。方法建立大鼠间肾移植模型。按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组，每组6只。对照组供肾灌注无菌HTK液0．5ml，空载病毒组供肾灌注含5×10^9pfuLacZ基因腺病毒（Ad-LacZ）的HTK液0．5ml，基因转染组供肾灌注含5×10^9pfuAdantbERK2的HTK液0．5m1。肾移植术后24周行移植肾的病理学观察，免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞表面标志蛋白E-Cadherin、Vimentin、TβRⅠ的表达以及CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞的浸润情况；酶联免疫法检测受者血清中转化生长因子β（TGF-β1）的含量。结果肾移植术后24周，对照组和空载病毒组移植肾呈CAN表现；肾小球硬化，肾小管萎缩明显，伴严重间质纤维化以及明显的CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；病变区肾小管上皮细胞E-Cadherin表达减少，Vimentin、TβRI表达显著增多。基因转染组移植肾间质内仅有少量CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；肾小管上皮细胞E-Cadherin表达正常。对照组和空载病毒组血清中TGF-β。含量明显高于基因转染组。结论AdantkERK2基因转染移植肾可减缓CAN的发生，对移植肾具有保护作用。这种保护机制可能与减少炎症细胞的浸润、下调TGF-β等致纤维化因子的表达以及抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化有关。
- 丁召宫念樵陈曦林郭晖陈知水陈孝平
- 关键词：肾移植细胞外信号调节MAP激酶类
- 反义细胞外信号调节激酶对移植物血管的保护作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨反义细胞外信号调节激酶(ERK1/2)基因治疗对移植物血管的保护作用及可能的保护机制。方法建立BN至Lewis大鼠的腹主动脉移植模型。反义ERK1/2治疗组移植前取供者动脉血管段给予经脂质体包装的反义ERK1/2基因转染;腹主动脉移植术后1个月内受者每日从尾静脉或阴茎背静脉注入经脂质体包装的反义ERK1/2寡核苷酸100μl。对照组移植未经任何处理的血管段,移植后也无特殊处理。移植术后60d取移植段主动脉进行组织病理学观察内膜和胶原纤维变化;免疫组织化学法观察移植段血管ERK1/2基因的表达和CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润情况;ELISA法检测血清中细胞间粘附分子(ICAM-1)的变化。结果移植术后60d,对照组的移植动脉呈慢性移植物血管病表现,血管内膜显著增厚,移植血管中ERK1/2基因高表达,CD4+、CD8+T淋巴细胞大量浸润;反义ERK1/2基因治疗组移植动脉呈血管内膜炎改变,ERK1/2基因表达不明显,内膜有少量CD4+、CD8+T淋巴细胞;对照组ICAM-1表达显著高于反义ERK1/2治疗组(P<0.05)。结论反义ERK1/2基因治疗对移植物血管具有保护作用,可以减缓慢性移植物血管病的发生,这种保护机制可能和减少ICAM-1的表达以及减少移植血管T淋巴细胞的浸润有关。
- 董冲陈知水宫念樵陈曦林郭晖
- 关键词：细胞外信号调节激酶类移植物外周血管病
- 脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗延长同种心脏移植物存活的研究被引量：2
- 2005年
- 目的观察脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗对同种心脏移植物存活的影响。方法大量扩增pcDNA3-TGF-β1,制备脂质体-靶基因混合物及杂交探针,建立同种心脏移植模型,行脂质体载体pcD-NA3-TGF-β1基因转染,观察移植后5d心肌细胞中TGF-β1mRNA表达状况和移植心脏病理改变,观察受体存活情况。结果移植后5d脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗组心肌细胞中TGF-β1mRNA原位杂交阳性表达率为11%,移植心脏排斥反应病理改变明显延缓,同种心脏移植物存活明显延长,但未诱导出长期存活。结论脂质体载体pcDNA3-TGF-β1基因治疗延长了同种心脏移植物的存活。
- 赵波刘云宫念樵叶启发
- 关键词：基因治疗脂质体心脏移植
