国家高技术研究发展计划(2003AA219051)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 相关作者：金宁一张立树金洪涛王宏宋英今更多>>
- 相关机构：军事医学科学院暨南大学天津大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究
- 2007年
- 将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）,ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性。结果表明：HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高。研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答。
- 张立树金宁一宋英洪宝庆马鹤雯尚玉璞王宏孙岩松金洪涛战大伟李昌
- 关键词：人免疫缺陷病毒I型重组鸡痘病毒恒河猴免疫应答
- 抗HIV-1 gp41单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控表达及活性检测被引量：1
- 2004年
- 目的 获得抗HIV 1gp4 1单链抗体与葡萄球菌外毒素A融合表达的重组导向毒素蛋白。方法 人工合成能广泛识别HIV 1gp4 1的单链抗体 (ScFv4 1)基因和金黄色葡萄球菌外毒素A(SEA)基因 ,将SEA基因第 2 2 7位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT ,并对两基因进行密码子优化。以大肠杆菌温控型表达质粒pBV2 2 0为载体 ,分别构建单表达ScFv4 1的质粒pBV 4 1和SEA与ScFv4 1融合表达的质粒pBV SL4 1,转化大肠杆菌感受态细胞 ,通过提高温度诱导表达 ,表达产物经分子筛层析折叠复性后 ,检测单链抗体结合活性及重组导向毒素介导的细胞毒淋巴细胞 (CTL)杀伤活性。结果 表达质粒pBV 4 1和pBV SL4 1分别在E .coliBL2 1(DE3)plys中 4 4℃诱导 6h、4 2℃诱导 7h得到较高表达 ,经SDS PAGE、薄层扫描分析表明 ,目的蛋白分别占菌体总蛋白的14 .35 9%和 2 3.4 82 % ,目的蛋白经复性后可与HIV 1抗原条发生良好的结合反应 ,并且SL4 1可激活外周血淋巴细胞 (PBMC)并介导其杀伤稳定表达HIV 1gp16 0蛋白的靶细胞。结论 成功得到ScFv4 1与SEA融合表达蛋白SL4 1,为研制抗HIV 1重组导向毒素奠定基础。
- 王宏金宁一徐一鸣金洪涛张立树江文正
- 关键词：活性检测淋巴细胞
- 抗HIV-1重组导向毒素SL120在毕赤酵母中的表达及其活性检测被引量：2
- 2005年
- 以pPIC9K为载体,构建抗HIV 1gp12 0单链抗体scFv12 0与葡萄球菌肠毒素A(StaphylococcalenterotoxinA ,SEA)融合基因表达质粒,线性化、电转化法整合入巴斯德毕赤酵母菌,经表型鉴定、PCR分析和G4 18筛选得到Muts型多拷贝整合菌,甲醇诱导培养可分泌表达5 7kD的预期大小蛋白—重组导向毒素SL12 0 ,表达量达5 0 1mg L。通过单链抗体亲和力测定,表明蛋白SEA和scFv12 0的构象有微弱的相互影响,但此重组导向毒素仍可高效介导CTLs杀伤HIV 1靶细胞。
- 王宏金宁一尹革芬徐一鸣金洪涛张立树李子建
- HIV-2 gp105重组鸡痘病毒引起小鼠细胞和体液免疫应答被引量：1
- 2005年
- 张立树金宁一李子健江文正宋英今王宏
- 关键词：重组鸡痘病毒HIV-2体液免疫应答IMMUNODEFICIENCYCTL表位
- HIV-2 gag rFPV与rDNA疫苗的联合免疫研究
- 2006年
- 目的探讨HIV-2核心蛋白基因gag重组DNA疫苗与重组鸡痘病毒进行联合免疫引起小鼠的免疫应答,为研究HIV-2基因重组疫苗的免疫策略提供实验基础。方法大量制备并纯化HIV-2gag重组DNA疫苗和重组鸡痘病毒,以肌肉注射的方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清HIV-2抗体,流式细胞仪测定CD4+、CD8+T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾CTL对HIV-2靶细胞的杀伤活性。结果重组DNA疫苗和重组鸡痘病毒单独免疫及二者联合免疫均刺激小鼠产生HIV-2特异性抗体,脾T细胞亚类数量增加,并产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性,但联合免疫组在各项指标上均高于单独免疫组。结论以HIV-2gag重组DNA疫苗进行基础免疫、以HIV-2gag重组鸡痘病毒进行加强免疫能诱导小鼠产生更强的特异性细胞和体液免疫应答。
- 李子健金宁一张立树江文正
- 关键词：核心蛋白重组鸡痘病毒免疫策略
- 人类免疫缺陷病毒-2 gag重组鸡痘病毒疫苗的构建及实验免疫研究
- 2006年
- 目的构建并探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)-2 gag重组鸡痘病毒(FPV)在小鼠体内的免疫应答,为开发HIV-2基因重组活载体疫苗提供实验依据。方法将HIV-2结构基因gag插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7．5×20下游．构建出鸡痘病毒重组转移质粒pUTA2-gag;经转染和BrdU加压筛选,以基因组聚合酶链反应(PCR)和Western blot法鉴定重组病毒;将获得的重组病毒大量制备并纯化后,肌内注射免疫Balb/c小鼠,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清HIV-2抗体,流式细胞仪测定CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果构建出重组鸡痘病毒转移质粒pUTA2-gag;从重组病毒的基因组中可扩增出大小为766bp的目的基因,其表达产物可与人HIV-2阳性血清发生反应,目的蛋白的相对分子质量约为55000;重组病毒免疫组小鼠的血清出现HIV-2抗体．脾T细胞亚类的数量增加,并产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性。结论获得一株重组鸡痘病毒,该病毒可稳定表达HIV-2结构蛋白Gag,并能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答。
- 张立树金宁一李子健江文正王宏宋英今
- 关键词：HIV-2鸡痘病毒抗体生成
- 治疗性HIV-1重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价被引量：5
- 2005年
- 目的 构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法 将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV -1特异性抗体 ,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV -1特异性T淋巴细胞增殖反应。结果 构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI -MEGp2 4免疫恒河猴后 ,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应 ,并诱导产生抗HIV -1特异性抗体。结论 所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应。
- 宋英今金宁一张立树李子建金洪涛郎守民
- 关键词：HIV-1治疗性多表位抗原原基免疫效果ELISA试剂盒
- HIV多表位核酸疫苗构建及其免疫原性被引量：6
- 2007年
- 目的设计新型HIV复合多表位疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效果。方法检索抗原表位数据库,进行新型HIV多表位核酸疫苗的设计,利用化学合成的方法合成多表位基因,并构建重组质粒pVAX1-MEGNp24,转染BHK-21细胞,间接免疫荧光法检测多表位基因的表达。重组质粒免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体动态变化,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类。结果重组质粒pVAX1-MEGNp24经酶切及测序分析,证明构建正确。间接免疫荧光显示能在BHK-21细胞中表达多表位基因。免疫小鼠可诱导小鼠特异性体液免疫和细胞免疫。结论已成功构建了重组质粒pVAX1-MEGNp24,小鼠免疫试验显示其具有良好的免疫原性。
- 李臻金宁一金洪涛沈国顺付延军辛苏文韩贞珍刘玉生
- 关键词：人免疫缺陷病毒核酸疫苗多表位抗原
- 恒河猴对人工设计的HIV-1 DNA疫苗的免疫反应被引量：3
- 2006年
- HAART对HIV/AIDS的治疗起到了重要的作用,但研制有效的疫苗是解决该全球性问题的最终方案.将人工设计的HIV-1多表位-p24DNA疫苗质粒pVAX1-MEGp24大量制备并纯化后,于0,4,8及18周肌肉注射免疫恒河猴,分别在第3次免疫和第4次免疫后2周(第10与第20周)采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性,ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力.结果表明,HIV-1多表位-p24DNA疫苗免疫组的恒河猴PBMC在恒河猴限制性HIV-1CTL表位肽刺激下产生针对HIV-1靶细胞的特异性杀伤活性,分泌Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2的水平升高,并出现HIV-1特异性细胞增殖反应;该重组疫苗同时能诱导恒河猴产生HIV-1特异性抗体.结果提示,HIV-1多表位-p24DNA疫苗能诱导恒河猴产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.
- 张立树金宁一宋英今孙岩松王宏战大伟马鹤雯尚玉璞金洪涛洪宝庆李昌
- 关键词：DNA疫苗恒河猴免疫
