湖北省自然科学基金(2010CDB09102)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：阮绪芝李瑞明方娟陈洁陈洁更多>>
- 相关机构：湖北医药学院江西省中医院武汉大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人FAM92A1基因诱饵表达质粒的构建与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的 构建人FAM92A1基因（hFAM92A1）的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1并检测其蛋白表达、毒性和自激活作用.方法 PCR扩增hFAM92A1的基因编码序列并克隆入诱饵表达载体pGBKT7中,酶切和测序鉴定后,转化到酵母AHl09细胞中,Western印迹检测诱饵蛋白表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果 成功构建FAM92A1基因的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1,测序结果正确.Western印迹实验证实酵母细胞高表达诱饵蛋白hFAM92A1,诱饵蛋白没有自激活作用.结论 构建的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1可用于下一步酵母双杂交系统实验,为进一步研究hFAM92A1功能奠定了基础.
- 方娟李瑞明卢智勇孙晓东陈洁阮绪芝
- 关键词：诱饵蛋白
- siRNA-FAM92A1-289对HeLa细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:研究RNA干扰(RNAi)沉默基因FAM92A1-289对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:化学合成法合成小干扰RNA(siRNA),阳离子脂质体转染FAM92A1-289 HeLa细胞;实时定量RT-PCR检测其mRNA表达,MTT法和流式细胞仪检测转染后HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡变化。结果:转染合成FAM92A1-289 siRNA后,HeLa细胞中FAM92A1-289 mRNA表达下降(P<0.01),细胞增殖均明显增强(P<0.01);细胞周期分布改变,S期细胞明显增多,而G2/M期细胞减少,凋亡率无变化。结论:FAM92A1-289基因调节细胞增殖活动。
- 陈洁陈洁李瑞明方娟阮绪芝
- 关键词：小RNA干扰HELA细胞
- FAM92A1新转录变异体的鉴定及功能研究
- 2012年
- 目的:对高度保守新基因FAM92A1的变异体进行鉴定和功能分析。方法:利用RT-PCR和序列测定检测FAM92A1基因新的转录变异体;分别构建FAM92A1三个转录变异体的真核表达质粒(pFAM92A1-271,pFAM92A1-251,pFAM92A1-289),转染SKOV3细胞,用MTT、流式细胞仪分析FAM92A1基因各转录本在过表达情况下对细胞增殖及细胞周期的影响;通过构建其融合蛋白表达载体pFAM92A1-EGFP转染细胞,分析其蛋白的亚细胞分布。结果:发现了FAM92A1两个新的转录变异体FAM92A1-251、FAM92A1-289,三者结构相似,都具有保守结构域DUF1208;FAM92A1-271、FAM92A1-251和FAM92A1-289过表达均可抑制细胞增殖,改变周期分布且阻碍细胞由S期进入G2期,形成S期阻滞;FAM92A1-271融合蛋白在细胞中的分布与DNA分布基本一致,主要定位于细胞核。结论:FAM92A1基因存在至少9种转录变异体,参与细胞增殖及细胞周期活动调节,是一与细胞周期活动相关的重要基因。
- 阮绪芝阮绪芝沈君豪李瑞明刘志祥刘志祥杨寒朔
- 关键词：流式细胞术
