国家高技术研究发展计划(2006AA100104-15)
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 相关作者：周延清李敏刘艳菊王芳邢延豪更多>>
- 相关机构：河南师范大学周口市农业科学院学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划河南省教育厅自然科学基金河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 根癌农杆菌介导反义fad2-1基因转化大豆的研究被引量：5
- 2010年
- 通过根癌农杆菌介导法将反义fad2-1基因导入大豆子叶节,研究了农杆菌菌液浓度、预培养时间、共培养时间、恢复培养时间、乙酰丁香酮浓度和pH值对大豆子叶节形成丛生芽的影响,建立了有效的转化体系,获得了转基因大豆再生植株。PCR、PCR-Southern blotting检测结果表明,反义fad2-1基因成功转入并整合于大豆基因组。GC检测结果表明,转反义fad2-1基因大豆种子油酸含量比非转基因大豆种子的油酸含量提高了14.44%,而亚油酸含量降低了20.27%。
- 周延清刘艳菊李敏段红英周春娥王芳苑保军
- 关键词：大豆根癌农杆菌
- 大豆fad基因反义表达载体构建及转化烟草研究被引量：1
- 2011年
- 使用PCR方法从大豆基因组DNA中扩增出大豆油酸脱饱和酶基因fad2-1,连接到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109菌株。测序后,用DNAstar软件进行同源性比对。然后将正确的序列反向克隆到表达载体pBt,并转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因反向序列的农杆菌工程菌,转化烟草无菌苗叶片外植体,经过组织培养和卡那霉素抗性筛选,获得抗性烟草转化植株共75株,PCR扩增出npt-II基因,RT-PCR检测到大豆反义油酸脱饱和酶基因转录产物和GC-MS测定其油酸含量增加而亚油酸含量降低。结果表明,克隆的fad2-1基因为1196bp,基因序列与NCBI中已发表的基因fad2-1序列蛋白质相似性达到96.7%,反义大豆fad2-1基因在烟草基因组中整合表达。
- 田苗苗刘艳菊李敏周延清姚换灵邢延豪
- 关键词：大豆根癌农杆菌烟草
- 农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究被引量：1
- 2010年
- 以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.
- 范红军李敏周延清楚素霞邢延豪
- 关键词：烟草根癌农杆菌
- 大豆脂肪酸脱饱和酶反义基因转化根癌农杆菌研究被引量：1
- 2011年
- 根据NCBI中大豆fad2-1序列设计引物,用PCR方法从大豆的基因组DNA中扩增大豆脂肪酸脱饱和酶基因,克隆到pMD18-Tvector中,转化大肠杆菌JM109菌株,进行测序与比对。然后,将其反向克隆到表达载体pBt,转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因的农杆菌工程菌。结果表明,克隆的fad2-1基因为1 196 bp,基因序列与NCBI中已发表的fad2-1序列只有4%的差异,相似性大于95%,说明克隆的基因是大豆fad2-1基因;构建了该基因的反向表达载体,转入农杆菌内。这为利用农杆菌介导法把该反义基因转入大豆,改良脂肪酸成分奠定了基础。
- 周延清田苗苗王芳陈艳梅张永华苑保军
- 关键词：大豆反义技术根癌农杆菌
