国家自然科学基金(30600518C030112)
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 相关作者：方强王雪梅夏惠骆江坤齐文娟更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院安徽医科大学蚌埠医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
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- 结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析
- 2013年
- 目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果:PCR产物电泳显示扩增片段约为300 bp,测序获得的片段开放编码框由303 bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100%,推导出编码氨基酸序列同源性为100%。结论:成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFP10基因序列无差异。
- 薛玉芹王英陈勇李江艳李倩唐洁夏惠王雪梅方强
- 关键词：结核分枝杆菌克隆
- 猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达被引量：4
- 2010年
- 目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。
- 方强骆江坤崔琢齐文娟胡元生沈继龙
- 关键词：克隆原核表达
- 皖北地区脑囊尾蚴病216例临床分析
- 2010年
- 目的:探讨皖北地区脑囊尾蚴病的临床特点及治疗方法。方法:对皖北地区216例脑囊尾蚴病患者的临床资料进行分析和总结。结果:脑囊尾蚴病临床表现复杂多样,以癫痫样抽搐、头痛为主。发病人群以青壮年和男性居多。囊尾蚴血清学检查阳性率为91.67%,CT或MR I检查异常者占88.89%。以吡喹酮和阿苯达唑治疗为主,有效率为93.98%。结论:根据患者典型的临床表现,结合相关辅助检查,及时采用合理的治疗方案对脑囊尾蚴病患者具有重要意义。
- 常雪莲王小莉方强沈继龙
- 关键词：囊尾蚴病流行病学
- 结核分枝杆菌ESAT6疫苗的研究进展被引量：1
- 2013年
- 结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的一种严重危害人类健康的重要传染性疾病。根据WHO发布的《2011年全球结核病（TB）控制报告》，患结核病的人数降到2010年的880万，结核病死亡数降到140万人，结核病死亡率在1990年和2010年之间下降了40％，除非洲之外，其他区域都可按期实现到2015年时使死亡率降低50％这一目标；但是流动人口剧增、结核菌与艾滋病毒双重感染和耐药结核菌病的增多均增加了结核病防治工作的难度，使得结核病疫情的形势依然严峻，防治任务仍然十分艰巨。在艾滋病感染患者中结核的发病率则更高，艾滋病毒携带者同时感染了结核分枝杆菌后，发生结核病的可能性是正常人的34倍。
- 王英王雪梅方强
- 关键词：结核分枝杆菌疫苗ESAT6
- 人白细胞介素23 p19亚基基因的克隆和序列分析
- 2010年
- 目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23)p19亚基基因。方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/m l刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PCR鉴定后进行序列测定。结果:RT-PCR产物电泳结果显示所扩增的基因为734 bp,基因测序显示其序列与GenBank报道的人IL-23 p19基因序列完全一致。结论:成功地克隆了人IL-23 p19 cDNA编码基因。
- 骆江坤方强齐文娟王雪梅
- 关键词：P19RT-PCR基因克隆
- 囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价
- 背景:囊尾蚴病一种严重人兽共患寄生虫病,有效的囊尾蚴病疫苗,将可以有效的保护易感者,对于有效的控制甚至最终消灭囊尾蚴病具有极其重要的作用。现有的囊尾蚴病疫苗尚不令人十分满意。而本研究针对寄生虫生活史多阶段的特点,研制囊尾...
- 齐文娟王媛媛常雪莲焦玉萌陈勇王雪梅夏惠方强
- 关键词：囊尾蚴病六钩蚴囊尾蚴复合基因疫苗免疫效应
- 文献传递
- 猪白细胞介素12 p35、p40亚基基因的克隆和序列分析
- 2008年
- 目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础。方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10h后用IFN-γ(100ng/ml)刺激增殖12h,随后加入细菌脂多糖(1μg/ml)刺激培养3h,分别收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增猪IL-12p35、p40cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测定。结果:猪IL-12p35、p40cDNAPCR产物电泳结果证明所克隆的基因分别为616bp和1011bp,基因测序结果与GenBank报道的基因序列各有一个碱基差异,但编码氨基酸无差异,证实分别为猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。结论:成功克隆了猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。
- 袁远英方强孙新王雪梅李柏青夏惠
- 关键词：囊尾蚴病白细胞介素12P35P40RT-PCR基因克隆
- 真核表达的重组猪单链IL-12生物学活性的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影响;ELISA法测定细胞培养上清刺激人PBMC分泌IFN-γ的水平;流式细胞术(FCM)检测细胞培养上清对人淋巴母细胞增殖水平的作用。结果:融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中表达产物pscIL-12融合蛋白含量较高;生物学活性鉴定表明:pscIL-12融合蛋白可增强NK细胞活性、提高IFN-γ的产生和促进人淋巴母细胞的增殖。结论:转染pcDNA3.1(+)-pscIL-12质粒的CHO-K1细胞成功表达了具有良好生物学活性的pscIL-12。
- 王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青
- 关键词：白细胞介素-12融合基因真核表达
- 结核病DNA疫苗研究进展
- 2016年
- 结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mtb）引起的以呼吸道为主的一种传染性疾病,严重危害人类健康。随着医学科学技术的发展,人类对抗TB已取得了一定的成果,包括有效的治疗药物及疫苗的研发。但同时由于Mtb耐药的严重性、人类免疫缺陷性病毒（HIV）与Mtb的双重感染及流动人口的日益增多、吸毒等,加上不少国家对TB的忽视,TB在全球范围内呈回升趋势。
- 薛玉芹方强
- 关键词：结核病DNA疫苗
- 猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接,构建pMV261-cC1穿梭质粒,测序验证正确后,将pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌,构建重组耻垢分枝杆菌,经热诱导后,以猪囊尾蚴病患者血清为一抗进行Western-blotting鉴定。此外,比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果构建的重组穿梭载体经酶切、测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后,SDS-PAGE电泳分析显示,在40 kDa处有外源性蛋白表达,与预期值相符。Western-blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别,表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论成功构建了表达猪囊尾蚴特异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。
- 王雪梅骆江坤李倩李江艳陈勇陶志勇夏惠方强
- 关键词：猪囊尾蚴耻垢分枝杆菌疫苗
