浙江省重点科技创新团队项目(2009R50032)
- 作品数：8 被引量：38H指数：4
- 相关作者：陈剑平严成其余初浪杨勇王栩鸣更多>>
- 相关机构：浙江省农业科学院浙江师范大学湖南农业大学更多>>
- 发文基金：浙江省重点科技创新团队项目浙江省自然科学基金引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 植物组培过程中污染微生物种类及其季节性的变化被引量：20
- 2013年
- 为研究植物组培过程中污染微生物种类及其季节性变化规律,以浙江省杭州和宁波的植物组培生产车间中的污染物为监测对象,利用NA、PDA等培养基对污染物进行分离纯化和培养。结果发现:植物组培污染物主要为细菌和真菌,其中细菌占52.13%,分布于9个种,主要为芽孢杆菌属和假单胞菌属;真菌占43.87%,分为18个种,芽枝霉(Cladosporium spp.)、黑曲霉(Aspergillus niger)、青霉(Penicillum spp.)和酵母为主要污染真菌。污染物的数量及真菌与细菌的污染比例呈现季节性变化,夏秋季是污染物的高发期,而春冬季节污染发生相对较少。
- 方丽王连平茹水江王汉荣
- 关键词：植物组织培养污染物真菌细菌
- 植物组培产业化生产中污染防控技术研究被引量：8
- 2012年
- 对浙江省植物组培产业生产中心的主要污染微生物的防控技术进行了研究,从11个杀菌剂和消毒剂中筛选出了对污染细菌德氏假单胞菌(Pseudomonas delafieldii)、丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)、蜡状芽胞菌(Bacillus cereus)和污染真菌指状青霉(Penicillum digitatum)、黑曲霉(Aspergillus niger)预防效果好,且对组培植物安全的药剂为乙蒜素和链.土霉素。乙蒜素可以在培养基分装前加入,与培养基同时灭菌使用;而链.土霉素在培养基使用前加入可有效预防污染物生长,该药剂对组培器皿和环境也有较好的消毒效果。
- 方丽汪一婷吕永平Kumar陈剑平王汉荣
- 关键词：植物组织培养乙蒜素
- HPT-mCherry融合标签在水稻转基因筛选鉴定中的应用被引量：2
- 2013年
- 目的:利用HPT-mCherry融合标签加速转基因筛选过程。方法:构建HPT-mCherry融合表达载体,采用农杆菌介导的转基因技术获得转基因植株,并利用荧光显微镜观察转基因愈伤和植株。结果:HPT-mCherry融合标签可用于转基因愈伤的筛选和转基因植株的鉴定;HPT与mCherry融合后互不影响,一方面可利用潮霉素抗性筛选愈伤,另一方面能通过观察mCherry红色荧光蛋白进行鉴定。结论:利用HPT-mCherry融合标签可以快速有效地鉴定并得到转基因阳性植株。
- 陈娟周洁严成其王栩鸣杨勇余初浪程晔陈剑平
- 基于Gateway技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统被引量：6
- 2013年
- 创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景。同时由XcmⅠ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致。此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究。
- 周洁王栩鸣陈斌陈娟杨勇余初浪严成其陈剑平
- 关键词：BIFC基因互作GATEWAY
- 组织培养中肾形穗螨发生特性及隔离措施
- 2013年
- 为有效地控制肾形穗螨Siteroptesreniformis对组培物的侵染，防止稻黑孢霉Nigrosporaoryzae污染组培物，研究分析了共生菌及温度对肾形穗螨发生的影响，以及不同的隔离措施对肾形穗螨侵染的影响。结果表明，大部分肾形穗螨携带有一颗或两颗黑孢霉菌孢子，分别占总数的31．6％和49．1％；只有稻黑孢霉菌能促进肾形穗螨发生及世代的繁殖；穗螨在16～30％条件下能完成发育及繁殖，随着温度的升高，孕腹体逐渐缩小，产仔量减少，生活周期变短，在16℃下孕腹体最大，直径为1．88±0．05mm；产仔量最多，为78．4±1．7头·雌-1，而在30~C下生活周期最短，世代时间为7．2±0．3d。采用不同的隔离效果进行评价，发现在瓶口涂矿物油加封保鲜膜和瓶口单独包裹Parafilm膜两种方法具有较好的隔离效果。综上所述，共生菌的存在及适宜的温度范围是肾形穗螨发生的重要条件。另外，合适的隔离措施也能有效控制穗螨的发生。
- 郦卫弟林文彩吕要斌
- 关键词：共生菌
- 一个水稻β-肌动蛋白基因的克隆及其亚细胞定位被引量：4
- 2014年
- 目的:克隆一个水稻β-肌动蛋白基因,并研究其蛋白的亚细胞分布。方法:利用RT-PCR技术从日本晴水稻中扩增得到β-肌动蛋白基因Os Actin,将其与拟南芥肌动蛋白基因家族进行分子进化分析;利用胶体金免疫电镜技术对水稻β-肌动蛋白基因进行定位分析。结果:核苷酸和氨基酸序列分析表明,Os Actin与水稻的Os RAc1基因有较高的同源性(98%);胶体金免疫电镜定位结果显示β-肌动蛋白在细胞核、细胞质中均有分布。结论:获得了水稻β-肌动蛋白基因Os Actin,并研究了其蛋白在水稻韧皮部内的分布,为进一步探讨该基因的功能及作用机理奠定了基础。
- 李培培谢礼薛进羊健李静严成其张恒木陈剑平
- 关键词：克隆分子进化分析亚细胞定位
- 水稻与病原物互作蛋白质组学研究进展被引量：1
- 2010年
- 植物与病原物互作的分子机制一直是植物病理学研究的热点。近年来,功能基因组学研究策略,包括蛋白质组学和转录组学,已广泛应用于基因、蛋白的功能鉴定和表达谱研究。蛋白质组学作为转录组学研究的一个互补内容,已成为系统研究植物应答病原物侵染的蛋白质表达谱和翻译后修饰的有力工具。水稻作为已完成基因组测序的单子叶植物,是研究植物与病原物互作分子机理的理想模型。因此,着重介绍了蛋白质组学的研究技术,水稻响应细菌、真菌及病毒等病原物侵染的蛋白质组学研究进展和水稻与病原物互作磷酸化蛋白质组学的概况。
- 余初浪杨勇王栩鸣严成其陈剑平
- 关键词：水稻病原物蛋白质组学
- 水稻病程相关基因OsPR1b启动子的表达特性研究
- 2014年
- 目的:分析水稻病程相关基因OsPR1b的表达特性,以进一步了解其表达和调控机制。方法:利用PCR技术从水稻日本晴基因组中扩增OsPR1b基因的启动子片段,命名为OsPR1bp,并构建相应的OsPR1bp::GUS融合表达载体,采用农杆菌介导的转基因技术获得转基因植株,进行GUS组织化学分析;利用Real-time PCR对OsPR1b基因在植物激素、非生物因子和水稻白叶枯菌(Xoo)毒性菌株P10(PXO124)处理下的表达水平进行分析。结果:GUS组织染色结果表明OsPR1b在水稻叶片中的表达量较高,而在茎、根、愈伤和花器中的表达量较低;植物激素水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、激动素(KT)、脱落酸(ABA)及NaCl、PEG均可不同程度地提高OsPR1b在叶片中的表达水平,Me-JA、KT和NaCl的处理能提高其在根部的表达水平,但这些激素在诱导OsPR1b在叶片和根部的表达程度上存在明显差异;单独接种Xoo毒性菌株P10 24 h对OsPR1b表达的影响不大,而MeJA与其共同处理后则可显著增强其在叶片中的表达。结论:作为一种防卫基因,OsPR1b在健康植株中的表达水平较低,容易受盐/干旱胁迫及Xoo病原菌的诱导,多种植物激素如JA、KT和ABA很可能作为信号分子参与激活和介导了这种系统性的反应。
- 虞飞博周洁王栩鸣杨勇余初浪程晔严成其陈剑平
- 关键词：启动子水稻
