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汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因的克隆与表达被引量：5: 2003年; 目的　构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H82 0 5株G1基因片段 ,将回收的G1片段经双酶切插入到pcD NA3 1/His B IL 2 ,构建成新的质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1。采用脂质体介导包裹 ,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达 ;采用原位杂交观察细胞内的基因表达 ,SDS PAGE法作重组质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1瞬时表达产物的鉴定。结果　融合基因可转录并表达一分子量为 78kD左右的蛋白 ,对照组则未见电泳条带出现。结论　成功构建pcDNA3 1/His B IL 2 G1融合基因。; 孙辉关武祥黄汉菊; 关键词：汉坦病毒融合基因克隆白细胞介素2

汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G_2-IL-2嵌合基因的稳定表达被引量：1: 2006年; 目的探讨汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2-IL-2嵌合基因(IL-2-G2)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞获得稳定表达可溶性融合蛋白的可行性。方法将人源IL-2基因与汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G2的cDNA分别克隆于真核表达载体pcDNA3.1-HisB,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-HisB-IL-2-G2,在脂质体介导下,将其导入CHO细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养6周,然后用原位杂交、ELISA、SDS-PAGE电泳方法检测IL-2-G2基因在CHO细胞中的稳定表达情况。结果经原位杂交和SDS-PAGE电泳证实,转染pcDNA3.1-HisB-IL-2-G2的CHO细胞内有IL-2-G2的mRNA转录,且在培养上清和CHO细胞胞质中有融合蛋白的表达,经人IL-2 ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物中所表达的融合蛋白有IL-2特性。结论在脂质体介导下,外源性IL-2-G2嵌合基因能够成功导入CHO细胞并获得稳定表达。; 朱振华黄汉菊; 关键词：白细胞介素2 中国仓鼠卵巢细胞基因表达

汉坦病毒H8205株G2-人源IL-2融合基因免疫效果的研究被引量：4: 2005年; 　目的　对比研究两种融合基因pcDNA3 -1/HisB IL2 -G2与pcDNA3. 1/HisB- G2的免疫效果。方法　大量制备重组质粒后免疫Balb/c小鼠, 剂量为100μg/次。于0、4和8周, 共免疫 3 次。免疫前和免疫后第 2、6、10 周采血, 用间接免疫荧光法 (IFA) 与ELISA检测抗汉坦病毒 (HTNV) 抗体; 用空斑减少中和试验 (PRNT) 检测免疫血清的中和效价; 用淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的细胞免疫反应; 用免疫脾细胞转移保护实验检测疫苗的保护效应。结果　两种融合基因均可刺激机体产生特异性的抗汉坦病毒 76 118 株的交叉抗体和中和抗体, 且差异无显著性意义, 而 pcDNA3 1/HisB- IL2- G2 诱导特异的细胞免疫明显高于 pcDNA3 .1/HisB -G2。结论　pcDNA3. 1/HisB- IL2-G2融合基因的免疫效果优于 pcDNA3 .1/HisB -G2, 该研究结果为进一步研制有效的肾综合征出血热 (HFRS) 基因疫苗提供了重要实验依据。; 吴志洪黄汉菊秦国伟潘侠; 关键词：融合基因汉坦病毒 PCDNA3 免疫效果免疫后细胞免疫反应

中国汉坦病毒H8205株G1、G2-人源IL-2融合基因免疫效果的实验研究被引量：2: 2007年; 汉坦病毒属于布尼亚病毒科，可致人类肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征。我国是世界上受其危害最为严重的国家，寻找安全有效的疫苗是控制该病流行和发生的关键，很多学者对此已有所研究。因病毒存在较广泛的变异，故有着良好社会效益的汉坦病毒疫苗应是多价的，因为多价疫苗才能提供最大程度的交叉保护性。; 熊颖张泽华贾珉黄汉菊; 关键词：汉坦病毒属免疫效果融合基因汉坦病毒肺综合征

波氏假性霉样菌、尖端赛多孢子菌攻击小鼠腹腔建立系统性感染模型: 2004年; 目的　为证实波氏假性霉样菌及尖端赛多孢子菌腹腔局部感染能否引起系统性疾病。方法　采用该菌的不同浓度孢子注射小鼠腹腔 ,记录并统计分析小鼠平均生存时间 (MST)以及该菌在小鼠的肝、脾、肠、肾、肺、脑分离阳性率 ,感染小鼠各脏器病理切片HE及PAS染色。用扫描电镜观察尖端赛多孢子菌临床株在马铃薯培养基(PDA)上的生长物。结果　发现各动物模型组内各菌株组间MST及各脏器菌分离阳性率无差异 ,但不同动物模型组间存在差异。感染小鼠各脏器经病理检查发现孢子、菌丝及中性粒细胞浸润。电镜观察尖端赛多孢子菌临床株可见尖端单生孢子 ,无子囊果 ,无有性阶段。结论　波氏假性霉样菌及尖端赛多孢子菌致病力与是否具有有性阶段无关 ,多次 1× 10 7CFU/ml孢子连续腹腔内攻击免疫抑制小鼠可制备较稳定、可靠的系统性感染小鼠模型 ,并证实了当机体免疫力下降时 ,可由局部感染该菌导致全身性感染性疾病。; 王燚燕黄汉菊邬焱卿郑岳臣任刚张徐凯; 关键词：小鼠腹腔脏器孢子扫描电镜观察

汉坦病毒H8205株MIL-2融合基因的构建: 2005年; 目的研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗,构建融合基因pcDNA3.1/HisBIL2M(G1+G2)。方法采用PCR扩增汉坦病毒H8205株G1和G2基因片段,将回收的G1和G2片段经双酶切插入到pcDNA3.1/HisBIL2,构建成新的质粒pcDNA3.1/HisBIL2M。结果融合基因转录一分子量为100kD左右的蛋白,对照组则未见电泳条带出现,回收的片段与预期的相符。结论成功构建pcDNA3.1/HisBIL2M融合基因。; 余晖黄汉菊; 关键词：汉坦病毒白细胞介素-2 融合基因 PCDNA3.1 基因片段

中国汉坦病毒H8205株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达被引量：3: 2002年; 从感染病毒乳鼠脑组织提取总 RNA,采用 RT- PCR和分子克隆技术将扩增到的 G2糖蛋白基因插入含 CMV启动子的 pc DNA3.1/ His质粒载体中 ,通过脂质体介导转染 COS- 7细胞 ,用 SDS- PAGE、 Western- blot及 IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的 G2 - pc DNA3.1/ His重组表达质粒 ,表达产物的相对分子量为 5 6 ku,与理论预期大小一致 ,并且可与汉坦病毒 H82 0 5株的腹水抗体起特异反应。表明构建的 G2 - pc DNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有 ,能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性 ,重组质粒可应用于汉坦病毒的; 王小红黄汉菊任刚李钟铎陈秀珠; 关键词：汉坦病毒 DNA疫苗基因表达基因克隆真核细胞

汉坦病毒G2囊膜蛋白基因的克隆及其免疫原性的初步研究被引量：1: 2004年; 目的　构建汉坦病毒G2囊膜蛋白基因真核表达载体 ,进一步研究其免疫效果。方法　采用PCR方法扩增出G2基因 ,亚克隆于 pcDNA3.1/HisB载体 ,重组阳性克隆进行酶切和测序鉴定。将重组质粒免疫BALB/C小鼠 ,用间接免疫荧光法 (IFA)检测免疫小鼠血清中抗汉坦病毒76～ 118株的交叉抗体。结果　 5只免疫小鼠血清中均检测到特异性的抗汉坦病毒 76～ 118株的交叉抗体 ,与对照组相比有显著性差异 ,其滴度为 1∶10 .99。结论　G2囊膜蛋白基因构建成功并能刺激机体产生特异性抗体 ,但其效价不高 ,该研究结果为研制有效的HFRS核酸疫苗奠定一定的实验基础。; 黄汉菊吴志洪王小红; 关键词：汉坦病毒免疫原性免疫小鼠显著性差异

汉坦病毒H8205株G1-G2/人源白细胞介素2融合基因的稳定表达和免疫效果: 2007年; 目的:探讨汉坦病毒H8205株G1-G2/人源性白细胞介素2(IL-2)融合基因在非洲绿猴肾(Vero)细胞获得稳定表达的可能性,评价融合基因pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2的DNA免疫效果。方法:在脂质体介导下,将pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2导入Vero细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用间接免疫荧光(IFAT)、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)等方法检测其在Vero细胞中稳定表达的情况。采用肌肉注射质粒的方法来免疫Balb/c小鼠,免疫3次,加强2次,间隔2周,然后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清特异性抗体,用空斑减少中和试验检测中和抗体。结果:转染了pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2后在Vero细胞培养上清和胞质中有融合蛋白的表达,其相对分子量为110 ku。pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2可诱导小鼠产生特异性抗汉坦病毒抗体和中和抗体,其效价均高于其他对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:融合基因在脂质体介导下能导入Vero细胞并获得稳定表达。融合基因真核载体疫苗免疫Balb/c小鼠可诱导特异性体液免疫应答,为进一步将其用于我国汉坦病毒疫苗研制提供了依据。; 熊颖张泽华黄汉菊; 关键词：汉坦病毒融合基因

汉坦病毒核酸疫苗研究进展被引量：2: 2004年; 黄汉菊吴志洪; 关键词：汉坦病毒核酸疫苗

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