国家自然科学基金(30271333)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
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- 视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理变化被引量：1
- 2009年
- 目的:观察视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理改变,探讨胶质细胞与神经元的相互作用,为慢性视神经损伤的修复研究提供基础。方法:30只成年家猫随机等分为正常对照组、假手术组、压迫1周组、压迫2周组、压迫4周组和压迫8周组(n=5)。后4组利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。各组动物灌注固定,取视神经组织,行透射电镜观察和免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)、碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)和ED-1的表达变化。结果:电镜下正常视神经髓鞘结构完整,各髓板清晰、排列紧密;受压2周后见轻微脱髓鞘;4周后出现板层分离、髓鞘泡状解离,并可见变性的胶质细胞;8周后髓鞘崩解更为明显,大部分髓鞘明显变薄,并可见凋亡小体形成。免疫组化染色在受压2周后无明显改变;4周后视神经MBP染色出现排列紊乱,有缺失现象;8周后染色缺失更为明显。受压4周后视神经压迫区出现CAⅡ染色紊乱,有缺失现象;8周后更为明显。非压迫区在受压8周后CAⅡ染色仍基本正常。受压4周后视神经直接受压区GFAP染色强度下降,损伤区近侧端染色强度增加;至8周时更为明显。正常视神经内可见散在的ED-1染色阳性细胞;受压4周后损伤区周围ED-1染色阳性细胞明显增多;8周后更为明显。结论:视神经慢性受压后损伤区出现胶质细胞变性和坏死,损伤区周围出现星形胶质细胞增殖和小胶质细胞激活,提示胶质细胞改变参与了慢性视神经损伤的病理过程。
- 吕立权楼美清董艳蔡如珏胡国汉骆纯侯立军卢亦成
- 关键词：少突胶质细胞星形胶质细胞小胶质细胞
- 视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析被引量：1
- 2008年
- 目的：对构建的猫视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库进行初步克隆、鉴定和分析。方法：用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行cDNA文库扩增和蓝白斑筛选，每个文库随机挑取300个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。对阳性克隆菌落进行DNA测序以获得差异表达基因片段序列。将测序所得的序列通过互联网用Blast程序查找日本国家DNA数据库进行同源性分析。用实时定量PCR验证差异克隆。结果：PCR鉴定获得1000个阳性菌落，测序获得674个EST片段，序列长度在200～800bp之间。同源性分析结果提示4周正向文库得到14个同源基因，4周反向文库得到20个同源基因，8周正向文库得到23个同源基因，8周反向文库得到19个同源基因。这些基因可归类于能量代谢、物质转运、信号转导、基因转录、细胞损伤与修复、MHC分子等。实时定量PCR检测的4个克隆证实是差异表达序列。结论：本研究构建的视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库为进一步鉴定和研究慢性视神经损伤相关基因提供了实验基础。
- 吕立权楼美清董艳蔡如珏胡国汉骆纯侯立军卢亦成
- 关键词：CDNA文库基因表达
- 猫慢性视神经损伤模型的建立及病理学的动态变化被引量：10
- 2006年
- 目的建立慢性视神经损伤动物模型,为进一步实验研究提供基础。方法模仿临床翼点入路,在猫视交叉视神经下植入球囊,分次注入造影剂使球囊逐渐增大,对视交叉视神经形成慢性压迫。所有动物在术前2周用DiI逆行标记视网膜神经节细胞(RGC),在受压后1、2、4和8周分别进行闪光视觉诱发电位(F-VEP)记录,在光镜、电镜下观察视网膜和视神经及对RGC进行计数。结果在光镜下视网膜在8周时出现明显的变化;视神经在2周开始出现髓鞘脱失,随时间延长病变加重,4周出现轴索变性,8周时变性更为明显。电镜下RGC在4周时出现病变,随时间延长进一步加重;视神经在2周时见轻微脱髓鞘,细胞骨架排列轻度紊乱,随时间延长脱髓鞘和轴索变性进一步加重,在8周时可见髓鞘再生。RGC计数显示8周时数量下降约37％(293／465)。F-VEP在4周组开始出现异常,8周组改变更为显著。结论所建立的慢性视神经压迫损伤模型稳定可靠,易于重复。视神经慢性受压后的病理学改变随受压时间的延长和压迫程度的增加而逐渐加重,视网膜发生继发变性,且明显晚于轴索变性。
- 吕立权朱爱红楼美清蔡如珏董艳卢亦成
- 关键词：视神经损伤动物模型病理学
- 少突胶质细胞和视神经损伤
- 2006年
- 少突胶质细胞在中枢神经系统中具有重要和广泛的生理功能。视神经损伤后,出现髓鞘脱失、少突胶质细胞死亡和髓鞘再生等病理改变,产生的髓鞘碎片能抑制视神经轴索再生。少突胶质细胞的抑制特性由特定的抑制分子介导,目前已鉴定的抑制分子主要有Nogo、髓鞘相关糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(oligodendrocyte myelin glycopro-tein,OMgp)等,它们通过同一受体复合体传导抑制信号。阻滞抑制分子及其受体,或调整神经元的内在生长状态以克服抑制分子的抑制作用,可以促进视神经损伤后再生。本文就这方面的进展作一综述。
- 吕立权卢亦成
- 关键词：少突胶质细胞视神经损伤
- 猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库的构建被引量：3
- 2008年
- 目的:构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库。方法:15只成年家猫随机分为正常对照组、视神经压迫4周组和视神经压迫8周组(n=5),压迫4周组和压迫8周组猫利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。取各组动物视神经,TRIzol法提取总RNA.SMART技术合成cDNA,随后利用抑制消减杂交方法分离受压4周和8周视神经中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选。随机挑取300个白色克隆进行菌落PCR鉴定。结果:菌落PCR扩增显示每个文库80%的克隆中均有200～800 bp的插入片段。结论:成功构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆慢性视神经损伤相关差异表达基因奠定了基础。
- 吕立权楼美清董艳蔡如珏胡国汉骆纯侯立军卢亦成
- 关键词：抑制消减杂交基因文库
- 猫慢性视神经压迫损伤模型的建立被引量：1
- 2007年
- 目的建立猫慢性视神经压迫损伤动物模型。方法成年健康猫20只,按置入球囊内注入不同剂量造影剂分为健康对照组、0.2ml、0.25ml、0.35ml 4个组,每组5只。模仿临床上翼点入路,显微手术暴露视神经后,置入充盈的不可脱球囊于其下,后接导管,以注入造影剂的方式控制球囊大小,形成类似鞍区肿瘤占位,并辅以CT和视觉诱发电位检查,研究慢性视神经损伤前后视觉电生理方面的变化。以上动物按分组处死后,取视神经标本,进行电镜分析,研究视神经损伤后的病理改变。结果早期(术后2周),因占位病变(0.2cm3)在颅内代偿范围内,视觉诱发电位改变不明显。术后4周颅内占位达0.3cm3时超出颅内代偿空间,视觉诱发电位改变,颅内占位达0.35cm3时视觉诱发电位改变更为明显,表现为P1波潜伏期明显延长,振幅明显减小。结论首次建立的慢性颅内段视神经压迫损伤模型稳定,可模仿鞍区肿瘤引起的视神经病变,慢性视神经压迫的视觉诱发电位改变呈渐进性,早期在代偿范围内改变并不明显,晚期表现为P1波潜伏期延长,振幅减小,如不去除压迫难以恢复。
- 于峰卢亦成楼美清隋刚黄承光蔡如珏
- 关键词：视神经损伤动物模型
- 髓鞘相关抑制分子和视神经再生被引量：5
- 2006年
- 哺乳动物视神经损伤后不能成功再生,除了视网膜神经节细胞再生能力低下外,与中枢神经系统中存在抑制微环境密切相关。少突胶质细胞产生的髓鞘相关抑制分子是构成这种抑制微环境的重要成分。目前已经鉴定的抑制分子主要有 Nogo、髓磷脂相关糖蛋白及少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白,他们通过同一受体复合体转导抑制信号。通过阻滞抑制分子及其受体或改变神经元的内在状态,可以克服抑制分子的抑制作用,促进视网膜神经节细胞轴索再生,为人类视神经损伤修复带来希望。
- 吕立权卢亦成
- 关键词：髓磷脂相关糖蛋白视神经损伤神经再生
- 猫视神经慢性受压后视网膜神经节细胞的动态观察被引量：1
- 2008年
- 目的观察猫视神经慢性受压后视网膜神经节细胞（R6Cs）的动态变化。方法30只成年家猫按随机数字表法等分为正常对照组、假手术组、压迫1周组、压迫2周组、压迫4周组和压迫8周组，每组5只。利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。所有动物在术前2周用DiI逆行标记RGCs。取各组动物视网膜进行光镜、电镜观察，并存荧光显微镜下对RGCs进行计数。结果正常成年猫视网膜HE染色可见三层细胞核．各层间界限较为清楚，从玻璃体腔向巩膜依次为神经节细胞层、双极细胞层和感光细胞层；视神经慢性受压4周时视网膜变化仍不明显；受压8周时可见RGCs核明显稀疏，大而染色浅的细胞核基本消失，视网膜总厚度变薄，胶质细胞增生。电镜下正常猫RGCs核呈卵圆形、核大、核质均匀，有时可见核仁，胞浆占细胞比例小，但细胞器丰富；受压2周时视网膜无明碌改变：受压4周和8周时可见RGCs胞浆成分疏松、内质网扩张、线粒体肿胀、质膜下出现空泡、核膜皱缩内陷、胞浆空化、染色质边聚。正常组DiI逆行标记的RGCs的密度在406～527个／mm^2之间．平均为（465±381个／mm^2，中央区密度高于周边区；视神经受压后前4周RGCs数量无明显改变：受压8周时RGCs数量有显著下降，平均密度为（293±32）个／mm^2，下降约37％。结论视神经慢性受乐后RGCs将出现延迟的变性，为视神经受压后RGCs的保护提供了时机。
- 吕立权楼美清蔡如珏董艳胡国汉骆纯侯立军卢亦成
- 关键词：视网膜神经节细胞病理学
