国家自然科学基金(30571671)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 非病毒载体基因复合物经胆道分支导入活体肝脏局部表达的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的经胆道分支逆行导入非病毒载体基因复合物，观察目的基因在正常及急性损害大鼠局部肝脏的定量定位表达。方法运用D-氨基半乳糖制作大鼠急性肝损害模型；非病毒载体基因复合物polylysine-molossin／DNA／fusogenic经胆管分支分别将包含萤火虫荧光素基因质粒pGL3及包含大肠埃希氏菌β半乳糖苷酶基因质粒CMVβ逆行导人大鼠局部肝脏，定量检测荧光素酶和定位检测β半乳糖苷酶在肝脏的表达。结果荧光素酶基因在正常大鼠肝脏极少表达，在急性肝脏损害恢复期（造模后第4—7天）表达水平显著增加（P〈0．05），在造模后第9天表达水平与正常组无显著差别。大肠埃希氏菌β半乳糖苷酶定位检测见急性肝损害大鼠肝脏内显著表达，正常大鼠肝脏几乎无表达，其中可见较多肝细胞表达。基因导入可引起血清ALT、AST水平升高，血清白蛋白水平略下降，但基因表达与肝功能酶生化指标水平及变化无明显相关。组织学改变不显著。结论非病毒载体基因复合物导入急性损害肝脏局部能获得较好表达，且无明显加重肝脏损害，该项方法为肝脏基因治疗的实验研究提供了良好的技术平台。
- 胡瑾华许彪何卫平王业东杜宁王慧芬
- 关键词：基因疗法
- 同种异基因皮肤移植对昆明小鼠荷H22型肝癌细胞生长的影响
- 2008年
- 目的观察同种异基因皮肤移植对昆明小鼠肝细胞癌生长及相关免疫指标的影响。方法采用荷H22型肝癌昆明小鼠为动物模型并分为3组,在皮下接种小鼠H22肝癌细胞悬液后,接受C57/BL6小鼠皮肤移植物的昆明小鼠为实验组,而接受同种同基因移植和不移植组均作为对照组,比较肿瘤的生长情况;同时检测小鼠外周血淋巴细胞亚群和肿瘤组织内细胞的凋亡细胞,比较各组间差异。结果接受同种异基因皮肤移植的昆明小鼠,肿瘤的生长速度慢于其他2组;接受同种异基因皮肤移植的小鼠瘤组织内凋亡细胞数量高于对照组。结论同种异基因皮肤移植对小鼠H22肝癌细胞的生长具有抑制作用,这种作用可能通过诱导肝癌细胞凋亡而发挥作用。
- 许海苗段学章王慧芬胡瑾华
- 关键词：肝细胞癌昆明小鼠
- 大鼠FasL全长cDNA真核质粒的构建及转染HepG2细胞体外诱导细胞凋亡的作用被引量：1
- 2011年
- 目的观察HepG2细胞过表达FasL介导细胞凋亡的作用。方法从大鼠睾丸细胞中扩增出rFasL全长cDNA,亚克隆到T载体中,再克隆到pDC315载体中。转染HepG2细胞后用RT-PCR、Wester blot检测rFasL mRNA和蛋白表达,培养48h后收集细胞计数,进行比较分析。结果 rFasL cDNA序列与其在Genbank中的序列完全一致。rFasL真核表达载体转染HepG2细胞后能表达rFasL mRNA和蛋白;转染pDC315-rFasL的实验组HepG2细胞大量死亡。结论成功克隆了rFasL基因并构建其真核表达载体,证明能有效表达于HepG2中,表达FasL的HepG2细胞通过Fas-FasL结合介导周围及自身表达Fas的HepG2细胞凋亡。
- 许彪胡瑾华徐东平李晓东刘妍陈婧王业东王慧芬
- 关键词：克隆细胞
- 裸露DNA经胆道分支导入活体肝脏的局部表达
- 2010年
- 目的经胆道分支逆行导入裸露DNA，观察目的基因在正常及急性损害大鼠局部肝脏的定量和定位表达。方法运用D-氨基半乳糖制作大鼠急性肝损害模型；经胆管分支将Cy3荧光标记CMVD质粒通过胆道分支逆行导入局部肝脏，观察裸露DNA导入肝脏的情况。同时运用包含萤火虫荧光素基因质粒pGL3及包含大肠埃希氏菌D半乳糖苷酶基因质粒pCMVp逆行导入大鼠局部肝脏，定量检测荧光素酶和定位检测B半乳糖苷酶在肝脏的表达。应用非参数Kruskal—Wallis法秩和检验进行统计分析。结果肝组织冰冻切片观察到Cy3荧光标记DNA在汇管区附近聚集。按100ug／ml浓度进行基因导入，荧光素酶基因在正常大鼠肝脏，急性损害大鼠肝脏均有显著表达。大肠埃希氏菌β半乳糖苷酶定位检测结果显示正常大鼠肝脏及急性肝损害大鼠肝脏内有β半乳糖苷酶显著表达，并可见较多肝细胞表达β半乳糖苷酶。结论裸露DNA经胆道逆行导入正常及急性损害肝脏局部能获得较好表达，且无明显加重肝脏损害，该项方法为肝脏基因治疗的实验研究提供了良好的技术平台。
- 胡瑾华许彪陈婧何卫平王业东王慧芬
- 关键词：基因疗法肝损害
