国家自然科学基金(30872985)
- 作品数：18 被引量：32H指数：3
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- 相关机构：天津医科大学总医院天津医科大学天津市神经病学研究所更多>>
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- 反义miR-30a-5p抑制脑胶质瘤生长的体内实验研究
- 2013年
- 目的探讨敲低微RNA（miR）-30a．5p表达对裸鼠荷人脑胶质瘤细胞U87移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法建立裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤模型，采用随机数字表法将其分为对照组、无义序列治疗组和miR-30a-5p反义寡聚核苷酸（AS—miR-30a-5p）治疗组（每组8只）。分别给予相应治疗，隔日测量肿瘤大小以评估其疗效。治疗结束后处死动物，剥离肿瘤组织，提取RNA和蛋白，采用实时PCR方法检测治疗后miR．30a-5p表达水平，采用石蜡切片苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及Westernblot检测，评价治疗后肿瘤组织形态以及增殖、凋亡等生物学性状等相关指标的变化，包括隔蛋白7（SEFr7）、增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白（cyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）以及凋亡相关因子P53、bcl-2、caspase3等；应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。、结果AS—miR·30a·5p治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列组，差异有统计学意义（F=7．167，P〈0．05）；其miR-30a-5p表达下调为对照组的0．297±0．051；肿瘤细胞恶性生物学表型相关蛋白PCNA、cyclinD1等表达明显下调，P53、SEFl7、caspase3等肿瘤生长抑制因子表达上调；细胞凋亡数明显增加。结论miR-30a-5p为靶点的治疗能有效抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长，肿瘤恶性表型有明显逆转，可作为人脑胶质瘤靶向治疗的侯选靶点。
- 孙即奎贾志凡浦佩玉王广秀张安玲杨卫东
- 关键词：神经胶质瘤寡核苷酸类反义药物疗法
- SEPT7基因抑制U251MG裸鼠皮下荷瘤侵袭的体内实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨SEPT7基因在体内抑制胶质瘤生长和侵袭的作用。方法建立人脑胶质母细胞瘤U251细胞来源的裸鼠皮下胶质瘤模型，并给予SEPT7治疗，定期测量肿瘤体积变化，检测肿瘤组织中SEPT7以及侵袭相关蛋白MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP1、TIMP2和整合素αvβ3的表达。结果SEPT7显著抑制肿瘤生长。治疗组肿瘤体积明显小于对照组（P〈0．01）。SEPT7治疗组中，肿瘤组织细胞内SEPT7表达明显上调。MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素αvβ3，的表达下降，而TIMP1、TIMP2的表达明显升高。结论SEPT7基因对于胶质瘤的侵袭和生长具有抑制作用。
- 徐嵩贾志凡黄强康春生王广秀张安玲浦佩玉
- 关键词：神经胶质瘤基因治疗MMPSTIMPS整合素
- 下调miR-93表达抑制人脑胶质瘤细胞生长和侵袭的研究被引量：1
- 2012年
- 目的验证下调miR一93表达对人脑胶质瘤细胞株的生长和侵袭抑制作用。方法合成miR-93抑制物，应用脂质体转染人脑胶质瘤细胞以抑制其表达，实时定量PCR检测转染后miR-93表达情况，流式细胞术检测、四甲基偶氮噻唑法（MTT）试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长变化，tran—swell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果转染miR-93抑制物后，细胞中miR-93高表达被明显抑制，细胞周期进展迟滞，S期细胞减少，生长速度减慢，克隆形成能力减弱，穿过matrigel胶的细胞数减少，侵袭能力被抑制。结论下调miR-93表达可抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭。
- 张安玲王坤王广秀贾志凡浦佩玉
- 关键词：神经胶质瘤
- 敲低转录共激活子对胶质瘤细胞生物学特性的影响
- 2015年
- 目的 研究敲低带PDZ结合域的转录共激活子（transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ）表达后对胶质瘤细胞株细胞生物学特性的影响.方法 采用TAZ小干扰RNA（TAZsiRNA）敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ表达,用实时定量聚合酶链式反应（real time-PCR） 及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别鉴定转染后TAZ敲除效果,噻唑兰比色法检测两种细胞株的增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;Western blot法检测凋亡、增殖及侵袭等相关蛋白的表达变化.结果 转染TAZ siRNA可显著敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ mRNA及蛋白表达水平;两种细胞株中TAZ被抑制后,细胞增殖率均下降且呈逐渐下降趋势,而细胞凋亡率分别增高至（12.05±0.65）％和（8.02 ±0.66）％（LN229：F=414.2,P=0.000;SNB19：F=156.8,P=0.000）;两细胞株TAZ siRNA组细胞穿膜细胞数与对照组和无义序列组相比明显降低,划痕间隙融合能力也显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;Western blot法检测显示转染后细胞增殖核抗原（Kiel 67 antigen,Ki-67）、B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9,MMP-9）等增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达明显下调.结论 敲低TAZ可抑制胶质瘤细胞株LN229和SNB19增殖和侵袭能力,提示TAZ可能成为治疗胶质瘤的新靶点.
- 栗伟杰王广秀于福华张安玲康春生韩磊浦佩玉贾志凡
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤侵润
- 微RNA与p53调控的关系研究进展
- 2010年
- 微RNA（miRNA）是近年发现的一类内源性非编码单链小RNA，在转录后水平负调控基因表达，参与发育、凋亡和细胞增殖等重要生命过程。p53是一重要转录因子，调控细胞周期与凋亡。两者的异常表达均与肿瘤的生成密切相关。
- 王坤浦佩玉贾志凡
- 关键词：微RNAS基因P53肿瘤
- YAP调控人胶质瘤细胞生长的体外研究被引量：6
- 2014年
- 目的:研究YAP(Yes-associated protein)调控人脑胶质瘤细胞系LN229细胞生长的作用。方法:采用YAP干扰RNA(siRNA)敲低LN229细胞中YAP的表达,Western Blot法鉴定肿瘤细胞中YAP是否已被敲低;MTT比色法测定YAP敲低后对肿瘤细胞增殖的影响;Transwell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的变化;流式细胞术和AnnexinⅤ标记法分别检测胶质瘤细胞周期及凋亡的变化。Western Blot法检测相关蛋白。结果:经Western Blot法检测证实转染YAPsiRNA后LN229细胞中YAP被有效敲低;敲低LN229细胞中YAP表达,可以抑制胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,并可抑制细胞侵袭能力,促使细胞凋亡数显著增加。促增殖蛋白Ki-67、促侵袭蛋白MMP-9、促周期进展蛋白Cyclin D1以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达明显下调。结论:敲低人胶质瘤细胞中YAP活性可以抑制肿瘤细胞增殖和侵袭,促进凋亡,为进一步探究Hippo-YAP信号通路在胶质瘤中的分子病理机制中的作用提供依据。
- 于福华贾志凡浦佩玉王广秀张安玲杨卫东
- 关键词：胶质瘤凋亡
- miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外机制。方法脂质体介导反义miR-21（AS-miR-211转染体外常规培养的U251细胞，同时设无义寡脱氧核苷酸（ODN）组和对照组。测定荧光素酶活性验证3组细胞中miR-21的表达，Matrigel基质生长实验检测U251细胞的生长情况，Transwell细胞体外迁移实验检测U251细胞的迁移能力，Westernblotting检测细胞侵袭相关蛋白局部粘着斑激酶（FAK）、基质金属蛋白酶9／2（MMP-9／21、人基质金属蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）、微管蛋白α（Tubulin-α的表达，免疫荧光检测细胞Tubulin-a蛋白的形态。结果与对照组和无义ODN组比较，转染AS—miR-21组U251细胞miR-21表达水平降低，Matrigel基质生长实验显示转染AS—miR-21组U251细胞体外培养克隆平均直径较小，Transwell细胞体外迁移实验显示转染AS—miR-21组穿膜细胞数较少．Westernblotting结果显示转染AS-miR-21组U251细胞FAK、MMP-9／2表达较低，TIMP-1表达较高，差异均有统计学意义俨〈O．05）。Tubulin-ct的表达无明显变化，免疫荧光染色显示转染AS-miR-21组Tubulin-α蛋白形态扭曲。结论miR-21高表达可以促进U251胶质瘤细胞侵袭生长，提示miR-21可以作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点。
- 周旋任玉王广秀浦佩玉康春生
- 关键词：RNA干扰基因治疗
- 反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察敲低microRNA（miR）-30a-Sp表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物（miR-30a-Spinhibitor）于人脑胶质瘤U251细胞。采用实时聚合酶链反应（real—time PCR）检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果；噻唑蓝（MTT）比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用；Transwell实验检测细胞侵袭能力变化；流式细胞术检测细胞周期变化；AnnexinV法检测细胞早期凋亡。结果real-time PCR检测结果显示转染miR-30a-5p inhibitor后，肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降，细胞增殖活性降低，细胞侵袭能力明显受到抑制，细胞周期阻滞在G0／G1期及早期凋亡增加。结论miR-30a-5p可能是癌微RNA（oncomiR）之一，有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。
- 王坤贾志凡张安玲王广秀郝建伟浦佩玉
- 关键词：胶质瘤增殖细胞周期
- 敲低Yes相关蛋白表达对人脑胶质瘤细胞SNB19生长的抑制作用被引量：4
- 2014年
- 目的探究敲低Yes相关蛋白（YAP）对人脑胶质瘤细胞SNBl9细胞生物学特征的影响。方法采用YAP干扰RNA（YAPsiRNA）敲低SNBl9细胞中YAP的表达，Westernblot法鉴定肿瘤细胞中YAP是否已被敲低；噻唑蓝（MTY）比色法测定YAP敲低后胶质瘤细胞的增殖能力；Transwell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的变化；流式细胞术和AnnexinV标记法分别检测胶质瘤细胞周期及凋亡的变化。应用统计软件SPSS18．0进行统计学处理。结果Westernblot证实转染YAPsiRNA可有效敲低SNB19细胞中Yes相关蛋白的表达；敲低Yes相关蛋白的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖活性，细胞存活率由（100．00±0．00）％下降为（52．32±3．10）％（F=33．00，P〈0．01），细胞周期阻滞于G0-G1期（F=8．76，P〈0．01），细胞侵袭能力明显受抑，穿膜细胞数由（163．20±10．10）个下降至（37．71±2．52）个（F=282．05，P〈0．01），凋亡增加，凋亡率由（3．56±0．35）％增加至（18．99±0．66）％（F=931．99，P〈0．01）。结论敲低胶质瘤细胞SNB19中YAP表达可抑制肿瘤细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡；YAP可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在靶点。
- 于福华贾志凡浦佩玉王广秀张安玲杨卫东
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖细胞凋亡
- 反义微RNA25抑制人脑胶质瘤细胞生长的研究被引量：1
- 2012年
- 目的观察抑制微RNA（miRNA，miR）-25表达对人胶质瘤细胞生长与凋亡的影响。方法脂质体转染miRNA抑制物，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测抑制效果；流式细胞术检测分析细胞周期分布及凋亡变化、噻唑蓝（MTT）试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长能力，Tran—swell实验检测细胞侵袭力。结果miR-25抑制物可抑制miR-25的表达，使得S期细胞比例减少（下降6％～10％），生长速度减慢（P〈0．05），凋亡增加10％（P〈0．05），非锚定依赖性生长的克隆形成能力减弱（P〈0．05），穿过Matrigel的细胞数无明显变化。结论抑制miR-25可以抑制胶质瘤细胞的生长，促进凋亡，但对细胞侵袭能力元明显影响。
- 张安玲王坤王广秀贾志凡浦佩玉
- 关键词：胶质瘤细胞生长
