国家自然科学基金(30772741)
- 作品数：18 被引量：68H指数：5
- 相关作者：李薇喻良文吴文如吴波林小桦更多>>
- 相关机构：广州中医药大学广州医学院湖北中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 金属硫蛋白在参环毛蚓不同组织中的表达研究被引量：1
- 2012年
- 目的:研究金属硫蛋白(MT)在参环毛蚓不同组织中的表达。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,进行HE组织切片染色和免疫组化反应,并在显微镜下观察MT在参环毛蚓体内的分布。结果:在参环毛蚓表皮层和肌肉层均未发现明显的MT表达,而在其肠道的黏膜下腺细胞质之间均有明显的棕黄色斑点,且随着镉浓度的增加,MT的表达越来越强。结论:MT主要在参环毛蚓的肠道中表达,参环毛蚓对重金属的富集是通过肠上皮细胞来完成。
- 吴波李薇江庆萍喻良文张惠球
- 关键词：参环毛蚓免疫组化金属硫蛋白
- 地龙类药用动物的简单序列重复区间分子鉴定研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】探索利用简单序列重复区间(ISSR)分子标记方法在核酸分子水平上鉴别不同来源的地龙类药用动物。【方法】从100条ISSR引物中筛选出能扩增明显多态性条带的引物,对采集自广东、福建、湖北、上海等地的7个不同品种的地龙类药用动物样品进行扩增和凝胶电泳分析,寻找特征位点。采用NTSYS软件计算材料间的相似系数,并用UPGMA法构建系统树,按遗传距离构建分子聚类图。【结果】8条引物共扩增出137个DNA片段,其中127个片段呈现多态性,平均多态位点百分率为92.35%,可单独或联合应用鉴别地龙类药用动物。【结论】ISSR分子标记技术具有较好的可靠性和重现性,可用于地龙类药用动物的鉴别和遗传亲缘关系研究。
- 吴文如李薇赖小平
- 关键词：地龙分子鉴定基因扩增
- 地龙ISSR-PCR反应体系的建立与优化被引量：5
- 2009年
- 目的建立和优化地龙ISSR-PCR反应体系。方法以地龙药材为实验试材,采用异丙醇沉淀法提取了地龙总DNA模板,对地龙ISSR-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选。结果建立了标记位点清晰、稳定、重复性好,可用于地龙ISSR分析的最佳反应体系,50μl体系中含有:1×Taq酶配套缓冲液,DNA模板50ng,2.5UTaqDNA聚合酶,2mmol/LMgCl2,0.8μmol/L引物,0.2mmol/LdNTPs。扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,(据不同引物的退火温度)复性30s,72℃延伸1.5min,共35个循环;72℃延伸5min,反应结束后,4℃保存。结论这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行地龙类药用动物鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础。
- 吴文如李薇
- 关键词：地龙ISSR
- 动物细胞培养技术研究的现状与思考被引量：4
- 2010年
- 细胞培养是生物医学中一项重要技术,应用较为广泛,目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。文章主要对无脊椎动物和脊椎动物两大领域细胞培养取得的进展及应用作了较为详细的分析,并在此基础上探讨了动物细胞培养存在的问题以及未来的发展方向。为相关领域研究者探讨其他种类细胞系的建立及筛选合适的细胞系培养方法作为理论的参考依据。
- 侯雪芹林小桦李薇
- 关键词：动物细胞培养细胞系组织培养技术
- 参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究被引量：1
- 2016年
- 目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基于该序列设计3条特异引物,采用基因步移技术克隆其上游的启动子序列,同时运用Promoter Prediction在线软件分析预测其顺式元件。结果经PCR扩增、测序后获得2 826 bp MT-2基因编码区序列,将该序列与已知MT-2 c DNA序列(登录号为KC787373.1)进行比对,发现MT-2编码区由4个外显子和4个内含子组成。基因步移技术克隆得到1 534 bp的启动子序列,经Promoter Prediction在线软件分析,结果显示该序列不仅含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子软件,还具有3个特异响应重金属参与调控MT-2表达的MRE元件。结论参环毛蚓的MT-2基因能被重金属诱导表达,MT-2基因转录水平的金属调控是通过MT-2基因启动子区的金属调控元件MRE来实现的。
- 张秋凤李薇龚玲黄传奇陈立红
- 关键词：参环毛蚓重金属富集金属硫蛋白转录调控
- 镉胁迫条件下对参环毛蚓体壁结构影响的研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究不同浓度镉离子胁迫条件下对参环毛蚓体壁肌肉结构的影响,探索重金属镉在参环毛蚓体内的生物富集部位。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,HE组织切片染色,光学显微镜下观察体壁肌肉结构的变化,以分析参环毛蚓富集重金属的方式。结果:内侧的斜纹肌损伤要明显比体壁外侧的环肌肉层要严重得多。结论:参环毛蚓体壁的损伤来源于其身体的内部,即对其构成损伤的物质来源于肠道的主动吸收,而不是通过其表皮的被动扩散吸收。
- 吴波李薇喻良文付玉梅彭杰张惠球
- 关键词：镉胁迫参环毛蚓
- 4种重金属对参环毛蚓金属硫蛋白诱导特性的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:通过银饱和分析法研究4种重金属(Cu、Pb、Cd、Zn)对参环毛蚓金属硫蛋白(MTs)的诱导特性。方法:Cu、Pb、Cd、Zn4种重金属诱导参环毛蚓30d后提取其MTs,进行Ag饱和置换,然后使用原子吸收法测量MTs含量。结果:Cd、Pb多在内脏中诱导MTs,Cu对MTs的诱导在肌肉和内脏中都较平均,Zn则更多地在肌肉中诱导MTs。结论:4种重金属对参环毛蚓MTs存在不同的诱导特性。银饱和分析法具有简便、快速、准确的优点,可用于MTs的准确定量。
- 李维李薇吴文如王绪新
- 关键词：参环毛蚓重金属金属硫蛋白
- 重金属镉对参环毛蚓胃肠道上皮细胞超微结构损伤的研究被引量：5
- 2011年
- 目的:研究不同浓度重金属镉离子胁迫下对参环毛蚓胃肠道结构的影响。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒、HE组织切片染色、光学显微镜及透射电镜下观察参环毛蚓胃肠道超微结构损伤的变化。结果:随着镉离子浓度的增加,参环毛蚓的肠道粘膜上皮细胞有大量溶酶体增生,高尔基复合体增生、扩张呈大泡状,微绒毛、纤毛排列不整齐、紊乱,当镉离子浓度达到30mg/kg时,参环毛蚓肠粘膜上皮细胞微绒毛出现萎缩,纤毛细胞出现溃疡坏死病灶,核膜解体、核质外溢,最后导致坏死。结论:参环毛蚓胃肠道粘膜上皮细胞超微结构的受损程度,是随土壤重金属的污染量而定。在较低重金属浓度条件下,参环毛蚓肠上皮细胞是以溶酶体增生、存积一定量的重金属元素的方式来应对其毒害作用,也可视为肠上皮细胞对有毒异物的一种应答反应,为可逆性损伤;而在较高重金属浓度条件下,肠上皮细胞是以微绒毛和线粒体损伤为主,核膜解体、核质外溢,最后导致坏死,为不可逆性损伤。由此推断,参环毛蚓对重金属的高耐受性或富集作用是通过其肠上皮细胞的这种特性来实现的。
- 吴波李薇付玉梅喻良文彭杰张惠球
- 关键词：镉污染参环毛蚓超微结构
- HPLC法测定不同产地地龙中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量被引量：23
- 2011年
- 目的:测定不同产地、品种的地龙药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量,建立地龙质量控制的客观指标。方法:用0.9%生理盐水超声提取地龙药材,采用反相高效液相色谱法,Waters Symmetry C_(18)色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以0.01mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液和50%甲醇为流动相,流速为0.8ml·min^(-1),梯度洗脱,检测波长254nm,柱温27℃,同时测定尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷等4种成分的含量。结果:尿嘧啶的线性范围为0.75～24.00μg·ml^(-1)(r=0.9993),平均回收率99.82%,RSD=2.34%(n=6);次黄嘌呤的线性范围2.50～80.00μg·ml^(-1)(r=0.9992),平均回收率101.93%,RSD=1.45%(n=6);尿苷的线性范围1.25～40.00μg·ml^(-1)(r=0.9992),平均回收率97.53%,RSD=1.73%(n=6);肌苷的线性范围5.00～160.00μg·ml^(-1)(r=0.9991),平均回收率102.06%,RSD=2.44%(n=6)。结论:该方法重复性,回收率好,可用于地龙药材中尿嘧啶等4种成分的含量测定。
- 吴文如李薇赖小平
- 关键词：HPLC法地龙尿嘧啶次黄嘌呤尿苷肌苷
- DNA条形码技术在生物分类中的应用被引量：16
- 2010年
- DNA条形码技术是通过使用DNA序列对物种进行快速、准确识别的技术。目前在动物分类中最常使用的基因序列是线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ亚基（mtCOⅠ）。该技术的出现可以为研究物种的进化规律、遗传变异、系统发育以及生物多样性等提供理论依据。为了让更多非生物分类学研究者了解并将其应用于更多的领域,本文概述了DNA条形码技术的工作流程、技术特点以及在生物分类中的应用和对未来的展望。
- 韦健红吴文如喻良文林小桦李薇
- 关键词：DNA条形码生物分类物种鉴定
