浙江省自然科学基金(Y3090546) 作品数:7 被引量:12 H指数:2 相关作者: 孙梅好 马建辉 王艳兴 黄园波 张冰倩 更多>> 相关机构: 浙江师范大学 中国科学院上海生命科学研究院 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 国家自然科学基金 浙江省“钱江人才计划” 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
原核生物硒蛋白的生物合成 被引量:1 2013年 硒是包括哺乳动物在内许多生物的必需微量元素,与人类健康密切相关。硒分布的不平衡导致所在地食物中硒含量差异较大,且高硒地区的人易发生硒中毒,而低硒地区的人易硒缺乏。胞内硒酸盐经还原及硒磷酸合成酶的活化,在硒代半胱氨酸合酶(SelA)催化下利用Ser-tRNAUGAsec合成硒代半胱氨酸(selenocysteine,Sec),Sec经tRNAUGAsec特异性的类EF-TU延伸因子SelB整合入蛋白质形成硒蛋白。文中主要概述了原核生物硒酸盐的还原代谢和硒代半胱氨酸的插入机制,并提出了利用硒蛋白的合成机制作为检测硒酸盐含量的思路。 沈林星 邱洋松 孙婧 邬丹妮 孙爱 张冰倩 马建辉 孙梅好关键词:硒 硒蛋白 硒代半胱氨酸 基于硒蛋白生物合成机制的硒生物检测器 2013年 硒是许多生物的必需微量元素,与人类健康关系密切。硒在自然界中分布的不平衡导致不同地区的硒含量差异较大,易引起硒缺乏或者中毒。原核生物的硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Sec)及硒蛋白的生物合成途径已较为清楚,此为构建硒酸盐生物检测器,进而补充目前常用硒含量测定方法提供了可能。该研究利用原核载体构建硒代半胱氨酸插入所需茎环结构(Selenocysteine insertion se-quence,SECIS)及其突变载体,通过氨苄青霉素筛选获得高效、高准确率的SECIS,并以此构建GFP超表达载体pSEGFP。通过pSEGFP和pSelABC共转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达,测定分析发现胞质蛋白的荧光强度与培养基硒酸盐浓度在一定范围内具有较好的线性关系。此结果表明,试验已初步构建了大肠杆菌硒生物检测器,为利用此方法进一步分析测定环境及生物样品中的硒含量奠定了基础。 邱洋松 孙婧 孙爱 邬丹妮 张冰倩 马建辉 徐丽珊 孙梅好关键词:硒蛋白 硒代半胱氨酸 茎环结构 硫酸盐活化复合体的分类及其功能 被引量:4 2011年 硫酸盐进入细胞内活化的第一步是ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5’-磷酰硫酸(adenosine 5’-phosphosulfate,APS)和焦磷酸,此反应非常不易进行。研究发现某些ATPS可与硫酸盐同化代谢相关酶组成硫酸盐活化复合体(sulfate activating complex,SAC)而促进硫的同化。本文介绍了目前已发现的三类SAC:GTPase型SAC(GTPase type SAC)、APSK型SAC(APSK type SAC)和APSR型SAC(APSR type SAC),并对其促进APS合成的方式及目前的研究热点进行了讨论。 王艳兴 杨玲 孙梅好关键词:硫酸盐 ATP硫酸化酶 亮氨酸拉链作为一种蛋白二聚化的工具 被引量:1 2014年 亮氨酸拉链是蛋白质中一种常见的结构模体,也是最简单的二局界面之一,它由可特异结合DNA的"碱性区"和螺旋盘绕起二聚作用的"拉链区"组成。本文简述其二聚化的特性,探讨了利用其诱导蛋白二聚化的思路。 张文强 巩菊芳 郑婕施 张静 孙梅好关键词:亮氨酸拉链 二聚化 球形红细菌无机焦磷酸酶的原核表达、纯化及初步分析 被引量:2 2013年 无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)水解在许多生物大分子的生物合成过程中产生焦磷酸并释放能量,形成的热力学拉力可促进合成反应的进行。球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides 2.4.1)无机焦磷酸酶(RsPPase)属于II型可溶性焦磷酸酶,钴离子对于其活性的维持具有重要的功能,而其活性调控及其表达对细菌生长的影响尚未报道。研究克隆、原核表达纯化RsPPase。结果发现,钴离子会导致谷胱甘肽S-转移酶(glutathione sulfotransferase,GST)标签不能进行蛋白酶切,且融合蛋白GST-PPase水解焦磷酸的催化效率较低(Km/kcat=2.0×104mol(/L.s));在球形红细菌胞内表达大肠杆菌焦磷酸酶(Km/kcat=5.5×107mol/(L.s))没有影响细菌的生长,暗示球形红细菌胞内PPase活性足够高。通过对其结构的模拟推测,在钴离子存在的情况下为闭合构象,GST标签的存在可能影响PPase羧基端结构域的运动,而影响其结合底物和释放产物的能力;在钴离子不存在的情况下为开放构象,GST标签具有较大的自由度,可暴露蛋白酶识别位点酶切产生无标签RsPPase。 黄园波 王艳兴 戴梦瑶 马建辉 孙梅好关键词:球形红细菌 无机焦磷酸酶 原核表达 5'-腺苷磷酰硫酸激酶及其R68K突变体对5'-腺苷一磷酸3'羟基的磷酸化 2013年 硫作为生命活动的必需元素,主要以-2价和+6价发挥生物学功能。硫的同化代谢包括胞内活化、转移以及还原等反应。其活化是同化代谢的关键反应,包括ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5'-磷酰硫酸(adenosine 5'-phosphosulfate,APS)和焦磷酸(pyrophosphate,PPi)以及腺苷-5'-磷酰硫酸激酶(adenosine 5'-phosphosulfate kinase,APSK)催化APS 3'羟基磷酸化生成3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate,PAPS),APSK催化APS磷酸机理已经较为清楚。利用APSK对AMP的磷酸化进行了初步分析,发现AMP可作为APSK的底物,反应生成3,5'二磷酸腺苷(3'-phosphoadenosine 5'-phosphate,PAP);对APSK的三维结构进行分析发现,R68同时和APS的磷酸根和硫酸根形成氢键,稳定APS的结合,而K侧链基团比R短2.4魡,R68K突变将导致K不能和距离较远的硫酸根离子相互作用,从而减弱APS的亲和力,而增加与磷酸根离子的相互作用,可能提高AMP的亲和力。研究结果表明,R68K突变体的最适底物变为AMP,KmAMP是对照的0.2倍,而催化效率是对照的5倍。以R68K为偶联酶成功测定了具有较低KmPAP的酵母3,5二磷酸核苷酸酶(3',5'-bisphosphate nucleotidase,YND)动力学常数,为分析测定AMP底物的酶活提供了工具。 杨洋 黄园波 马建辉 孙梅好关键词:磷酸化 植物硒转运蛋白的研究进展 被引量:4 2012年 硒是哺乳动物、细菌等许多生物的必需微量元素,也是植物生长发育的有益元素。植物主要吸收土壤中的硒酸盐和亚硒酸盐,经进一步代谢成为人类所需硒的直接或间接来源。研究表明,植物主要利用硫酸盐转运蛋白吸收硒酸盐,而吸收亚硒酸盐的方式还不太清楚。最近的研究结果发现,水孔蛋白及阴离子通道蛋白等参与亚硒酸盐的吸收,且受到多种因素调控,如呼吸抑制剂、代谢抑制剂、pH值、硝酸盐、磷酸盐及谷胱甘肽等。对近几年植物硒转运蛋白的研究结果进行了总结,并对未来的研究方向进行了展望。 马建辉 孙梅好关键词:转运蛋白 硒酸盐 亚硒酸盐 硫酸盐