国家自然科学基金(30772782)
- 作品数：10 被引量：30H指数：4
- 相关作者：刘加军林东军肖若芝王春芝刘晓丹更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学江门市中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省中医药管理局基金更多>>
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- 干扰素α对BEL-7402细胞生长与端粒酶活性影响的观察被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨干扰素α(IFN-α)对肝癌BEL-7402细胞的生长抑制作用及其对肝癌细胞端粒酶hTERT-mRNA表达水平和端粒酶活性的影响。方法:以不同浓度的IFN-α作用于体外培养的肝癌BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及ho-echst33258荧光染色法观察细胞凋亡;并对细胞凋亡前后的端粒酶hTERT-mRNA表达水平及端粒酶活性进行检测。结果:IFN-α可显著抑制肝癌BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。在细胞凋亡过程中端粒酶hTERT-mRNA的表达水平及端粒酶活性均显著下降。结论:IFN-α能抑制BEL-7402细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低端粒酶hTERT-mRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制。
- 刘加军张俊峰林东军陆敏强蔡常洁
- 关键词：干扰素端粒酶
- 冬凌草甲素对THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制
- 2008年
- 目的 探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲素(16～56 μmol/L)作用于体外培养的THP-1细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,用免疫印迹法(Western Blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化.结果 32 μmol/L以上的冬凌草甲素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,在Hoechst 33258荧光染色后,细胞出现核浓缩及核碎裂等典型的凋亡特征.Western Blotting检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量为20×103的裂解片段,PARP被裂解后出现相对分子质量为89×103的亚单位片段.结论 冬凌草甲素能显著抑制THP-1细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3途径可能是冬凌草甲素诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这为冬凌草甲素用于白血病的辅助治疗提供了有力的实验依据.
- 徐妍胡婷王春芝林东军肖若芝潘祥林刘加军
- 关键词：冬凌草甲素THP-1细胞细胞凋亡
- 冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制被引量：6
- 2008年
- 目的探讨冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,瑞氏染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果冬凌草甲素可显著的抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48～60h后在瑞氏染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论冬凌草甲素能抑制HL-60细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。
- 刘加军林东军陆敏强张俊峰陈规划
- 关键词：冬凌草甲素白血病端粒酶细胞凋亡
- 冬凌草乙素对白血病NB4细胞的体外诱导凋亡作用研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨冬凌草乙素(PON)对急性白血病NB4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以不同浓度的PON(0～50μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡时的形态学变化。应用免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对凋亡调节蛋白Bax、Bcl-2、Bak、Bad及Survivin的表达水平进行检测。结果:>20μmol/L的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,>20μmol/L的PON作用48h后,凋亡细胞逐渐增多,在Hoechst染色后可见典型的细胞凋亡现象。蛋白质印迹法检测结果表明,药物作用48h后Caspase-3被活化出现17×103的亚单位,同时PARP被裂解出现89×103的亚单位片段。蛋白质印迹法检测结果显示,凋亡抑制蛋白Survivin的表达水平明显降低,促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高,而其他凋亡调节基因Bcl-2、Bak、Bad则无明显变化。结论:PON可以通过诱导白血病NB4细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,降低Survivin以及升高Bax的表达水平可能是PON诱导白血病细胞发生凋亡的重要作用机制之一。
- 刘晓丹刘文达王春芝徐妍林东军刘培庆黄河清吴传斌肖若芝黄仁魏刘加军
- 关键词：白血病
- 鼻咽癌Ib区是否常规预防照射的临床分析被引量：6
- 2011年
- 目的通过分析鼻咽癌Ib区转移的发生率及其转移规律,探讨Ib区是否需要常规进行预防照射,为准确进行颈部放疗靶区的个体化设计、减少颌下腺照射提供证据。方法收集2001年1月～2005年6月病理确诊的初治鼻咽癌患者疗前增强CT/MRI影像学资料,颈部转移淋巴结分区方法采用SOM分区法。结果共338例可评价,颈部淋巴结转移率75.1%。颈部Ⅰb、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴa、Ⅴb及锁上区淋巴结转移率分别为0.9%、49.1%、60.7%、26.0%、5.9%、9.5%、3.8%和0.9%,跳跃性转移率为2.4%;按转移风险(以>5%为高危区域)分析其转移的规律为:(1)当发生Ⅱ区淋巴结转移时,高危区域为同侧Ⅲ、Ⅳ、Ⅴa、Ⅴb区;(2)Ⅲ区淋巴结转移时,高危区域为同侧Ⅱ、Ⅳ、Ⅴa、Ⅴb区;(3)Ⅳ区淋巴结转移时,高危区域为同侧Ⅱ、Ⅲ、Ⅴa、Ⅴb、锁上区;(4)Ⅴa区淋巴结转移时,高危区域为同侧Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴb、锁上区;(5)Ⅴb区发生淋巴结转移时,高危区域为同侧Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴa、锁上区;(6)一侧颈发生淋巴结转移时,高危区域为对侧Ⅱ、Ⅲ、Ⅴa区。结论Ⅰb区淋巴结转移的发生率极低;当颈部任何区域发生淋巴结转移时,Ⅰb区均非高危区域。Ⅰb区不常规预防照射符合鼻咽癌淋巴结转移规律。
- 谭洁媚梁颖赵充李明毅刘加军
- 关键词：鼻咽肿瘤淋巴结转移口腔干燥症
- 冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用被引量：3
- 2010年
- 背景：已有研究证明,冬凌草乙素可以通过诱导许多实体肿瘤的细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,目前,冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的作用尚未见资料报道。目的：观察冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其机制。方法：以不同浓度的冬凌草乙素（10~50μmol/L）作用于体外培养的HL-60细胞24,48,72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）表达水平的变化,并对细胞周期调节蛋白P21、P16的表达水平进行检测。结果与结论：冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。流式细胞术检测结果表明细胞主要被阻滞在G0/G1期,50μmol/L的冬凌草乙素作用48h后可以出现典型的亚G1期峰（细胞凋亡峰）。免疫印迹法检测结果显示Mr32000的Caspse-3酶被活化出现Mr20000亚单位片段,同时Caspse-3的底物PARP被裂解出现Mr89000的亚单位片段,免疫印迹法检测结果还显示50μmol/L的冬凌草乙素作用不同时间后,细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平逐渐升高。结果提示冬凌草乙素在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生凋亡,通过上调细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平及激活Caspse-3可能是冬凌草乙素引起HL-60细胞G0/G1阻滞及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一。
- 刘晓丹刘文达王春芝徐妍林东军刘培庆黄河清吴传斌肖若芝黄仁魏刘加军
- 关键词：冬凌草素HL-60细胞细胞凋亡白血病
- 冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及β-catenin表达水平的影响
- 2010年
- 目的:探讨冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草乙素作用于体外培养的U937细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;采用RT-PCR对细胞凋亡前后β-catenin的表达水平进行检测。结果:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。在冬凌草乙素抑制细胞增殖过程中β-catenin的表达水平显著下降。结论:冬凌草乙素能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低β-catenin的表达水平可能是其重要作用机制之一。这为冬凌草乙素抗白血病的进一步研究提供了有力的实验依据。
- 刘加军刘文达刘晓丹肖若芝王春芝林东军刘培庆黄河清
- 关键词：白血病冬凌草乙素Β-CATENIN
- 冬凌草甲素对Nalm-6细胞的增殖抑制作用及其作用机制被引量：9
- 2009年
- 目的:探讨冬凌草甲素(oridonin,ORI)对淋巴细胞白血病Nal m-6细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的ORI(0～48μmol/L)作用于体外培养的Nal m-6细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的DNA梯状条带,应用透射电镜观察细胞形态学的变化,用蛋白质印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化,并对凋亡调节蛋白Bax及Bcl-2的表达水平进行检测。结果:>16μmol/L的ORI可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系,药物作用48 h后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA梯状条带。蛋白质印迹法检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量20×103的亚单位,同时PARP被裂解出现相对分子质量89×103的亚单位片段。同时,药物作用48 h后凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高。结论:ORI能显著抑制Nal m-6细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3以及降低Bcl-2、升高Bax的表达水平是ORI诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这些结果表明ORI是一种潜在的抗白血病药物。
- 刘加军张俊峰林东军陆敏强
- 关键词：白血病淋巴细胞细胞增殖
- 重组Bmi1基因的慢病毒的制备和鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的制备携带B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点1基因(Bmi1基因)的慢病毒pSin-Bmi1,并在人胚胎干细胞H1中过表达Bmi1基因和BMI1蛋白。方法根据GeneBank提供的Bmi1基因序列,以H1来源的cDNA为模板扩增其cDNA序列,回收片段,Bmi1基因和pSin载体分别进行双酶切,连接后的质粒转化。经菌落PCR、双酶切鉴定及测序鉴定pSin-Bmi1阳性克隆。将阳性表达的pSin-Bmi1和包装质粒转染到293T细胞中制备病毒液。将包装好的病毒感染人胚胎干细胞H1细胞系并用嘌呤霉素筛选稳定表达BMI1的细胞株。通过Western blot验证H1细胞中外源性BMI1蛋白表达。结果经菌落PCR、限制性核酸内切酶酶切和测序证实目的基因Bmi1序列正确。Western blot检测发现感染重组Bmi1的慢病毒的细胞中有外源性BMI1蛋白的高表达,而未感染重组Bmi1的慢病毒的对照组未检测到BMI1表达。结论成功制备了携带Bmi1基因的慢病毒,并得到了稳定高表达外源Bmi1的细胞株。
- 赵羽刘加军
- 关键词：慢病毒
- 冬凌草乙素对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及机制研究被引量：4
- 2010年
- 目的：探讨冬凌草乙素（ponicidin,PON）对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：以不同浓度的PON（10~50μmol.L-1）作用于体外培养的K562细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,收集药物作用72h后的细胞Annexin V染色并通过流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞凋亡时的形态学变化。应用免疫印迹法（Western blot）检测caspase-3及其裂解底物多聚（ADP-核糖）聚合酶PARP的表达水平,并对MAPKs（mitogen-acti-vated protein kinase）信号转导通路相关蛋白（p-P38,p-ERK和p-JNK）以及PI3K（磷脂酰肌醇-3-激酶）/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平进行检测。结果：30μmol.L-1以上的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,不同浓度的药物作用72 h后,随药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐升高,50μmol.L-1的PON作用不同时间后在瑞氏-姬姆萨染色下可见典型的核浓缩及核碎裂等细胞凋亡现象。Western blot检测结果表明,药物作用48 h后caspase-3被活化出现17 kD的亚单位,同时PARP被裂解出现89 kD的亚单位片段。Western blot检测结果进一步显示药物作用48 h后MAPKs信号途径中p-P38,p-ERK和p-JNK蛋白的表达水平无明显变化,而PI3K/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平则随着药物浓度增加而逐渐下降。结论：PON可以通过诱导白血病K562细胞调亡而发挥体外抗白血病作用。PON对K562细胞的诱导凋亡作用机制与caspse-3的活化以及降低PI3K/AKT信号通路中p-AKT及p-P85蛋白的表达水平有关,而与MAPKs信号通路中的相关调节蛋白无关;这些研究结果为进一步研究冬凌草素的抗白血病作用提供了有力的实验依据和技术平台。
- 刘晓丹刘文达徐妍刘培庆王春芝林东军黄河清吴传斌肖若芝黄仁魏刘加军
- 关键词：冬凌草乙素白血病K562细胞细胞凋亡
