广西壮族自治区自然科学基金(2012GXNSFAA053105) 作品数:10 被引量:39 H指数:6 相关作者: 赵永忠 肖绪华 成秋宸 黄大健 董勇 更多>> 相关机构: 桂林医学院附属医院 桂林医学院 广西壮族自治区南溪山医院 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区自然科学基金 国家自然科学基金 广西教育厅科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织TLR4/NF-κB信号通路的影响 被引量:11 2014年 目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法雄性SPF级SD大鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、TFL小剂量组、TFL大剂量组。除正常对照组外,其余各组均采用胆总管结扎法(CBDL)制备肝纤维化大鼠模型。造模后第2天开始,正常对照组、模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃(5 mL·kg-1),TFL小剂量组给予TFL 100 mg·kg-1、TFL大剂量组给予TFL 200 mg·kg-1灌胃,均每天1次,共4周,第4周末处死大鼠,留取肝脏组织。苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变,免疫组化法(IHC)检测TLR4、NF-κB在4组大鼠肝组织内的表达。结果与模型组比较,TFL大剂量组肝组织纤维化程度明显减轻,胶原表达明显减少(P<0.01);正常对照组、模型组、TFL小剂量组、TFL大剂量组的大鼠肝组织TLR4免疫组化评分分别为(0.4±0.5),(3.3±0.6),(3.1±0.5),(1.4±0.5)分;NF-κB免疫组化评分分别为(0.80±0.77),(5.12±0.89),(4.68±0.70),(3.47±0.61)分,模型组TLR4、NF-κB表达明显高于正常对照组和TFL大剂量组(P<0.01),与TFL小剂量组比较,差异无统计学意义。结论 TLR4和NF-κB高表达可能与胆管阻塞型大鼠肝纤维化的发生发展有关,大剂量荔枝核总黄酮可能通过抑制大鼠肝组织TLR4、NK-κB的表达来改善胆管阻塞型大鼠肝纤维化程度。 何志国 赵永忠 卢青 周英琼 肖绪华 侯巧燕 黄大健 成秋宸关键词:荔枝核总黄酮 肝纤维化 TOLL样受体4 核因子-ΚB 荔枝核总黄酮对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞内NF-κB、α-SMA表达的影响 被引量:2 2015年 目的研究荔枝核总黄酮(TFL)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞T6(HSC-T6)细胞增殖的影响及其相关分子机制。方法 0.25%胰蛋白酶消化收集细胞,用含10%FBS的DMEM+5μg/L TGF-β1培养液配成单细胞悬液。(1)MTT法检测细胞增殖活力。将细胞接种于96孔培养板中,设TGF-β1组,对照组(含5‰DMSO),TFL80、160、320、640、800组(80、160、320、640、800 mg/L TFL),每组设3个复孔。加药24、48、72 h后,采用酶标仪测定490 nm处各孔吸光度(A)值并计算细胞抑制率;根据半数抑制质量浓度(IC50)确定后续实验的药物浓度组及药物作用时间。(2)采用PCR和Western blot分别检测HSC-T6细胞核转录因子(NF)-κB、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白的表达。将细胞接种于10 cm培养皿中,设TGF-β1组,对照组(含5‰DMSO),TFL125、250、500组(125、250、500 mg/LTFL),分组培养48 h后测定。结果同一作用时间点,随着TFL浓度的增高,HSC-T6细胞的A值基本逐渐降低,细胞抑制率逐渐上升。TGF-β1组NF-κB、α-SMA mRNA和蛋白表达量与对照组差异均无统计学意义,TFL125组与TGF-β1组、对照组差异均无统计学意义。随着TFL浓度的增高,HSC-T6细胞NF-κB、α-SMA mRNA和蛋白表达量基本逐渐降低。结论 TFL可抑制活化的HSC-T6细胞增殖,其可能通过抑制NF-κB、α-SMA的表达来发挥抗肝纤维化作用。 刘燕秀 赵永忠 李彩 董勇 覃桂金 成秋宸 郑清华关键词:荔枝核总黄酮 肝星状细胞 Α-平滑肌肌动蛋白 荔枝核总黄酮对体外活化肝星状细胞-T6增殖、凋亡及TLR4/NF-κB途径的影响 被引量:8 2016年 目的:研究荔枝核总黄酮(TFL)在体外对转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡及TLR4/NF-κB途径的影响,探究该药抗肝纤维化的作用机制。方法:体外培养HSC-T6,用TGF-β1刺激24h后以不同浓度的TFL干预24、48、72h,用MTT法检测TFL对HSC-T6增殖的影响,Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞形态学变化,采用流式细胞术、荧光定量PCR检测TFL对细胞凋亡及α-SMA、TLR4、NF-κB、Survivin m RNA表达水平的影响。结果:TFL以时间和浓度依赖性抑制活化的HSC-T6增殖,并以作用48h最为显著。TFL可促进细胞凋亡,下调HSC-T6中α-SMA、TLR4、NF-кB和Survivin m RNA表达水平,并具有浓度依赖性。同时Hoechst 33258染色显示TFL各组细胞可见细胞核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。结论:TFL在体外可以抑制活化的HSC-T6增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与降低活化的HSC-T6内TLR4、NF-кB和Survivin m RNA的表达有关。 韦铮武 李彩 林丽馨 肖绪华 刘燕秀 董勇 覃桂金 赵永忠关键词:荔枝核总黄酮 增殖 凋亡 荔枝核总黄酮对活化大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用及TLR4表达的影响 被引量:7 2015年 目的研究荔枝核总黄酮(TFL)在体外对活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用及Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法使用转化生长因子β1(TGF-β1)(5 ng/ml)激活HSC-T6,显微镜下观察HSC-T6和激活的HSC-T6形态变化;CCK8试剂盒(CCK8)法观察TFL作用24、48、72 h后活化的HSC-T6的增殖情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSC-T6中TLR4的表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果显微镜下观察HSC-T6和激活的HSC-T6形态有明显变化;CCK8结果显示TFL可以抑制HSC-T6的增殖(P<0.05),并且随着TFL浓度和作用时间增加,HSC-T6增殖明显下降,呈浓度依赖性;RT-PCR结果显示随着TFL浓度增加,HSC-T6中TLR4表达下降,与实验对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果表明TFL阻滞细胞于S期,G0/G1期细胞减少(P<0.05),S期细胞增加(P<0.05),促进细胞的凋亡(P<0.05),呈浓度依赖性。结论 TFL可以抑制HSC-T6的增殖,其作用机制可能是通过降低TLR4在HSC-T6中的表达,阻滞其细胞增殖和诱导细胞凋亡,达到抗肝纤维化效果。 董勇 赵永忠 肖绪华 刘燕秀 李彩 成秋宸关键词:荔枝核总黄酮 肝星状细胞 流式细胞术 荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体2、4表达的影响 被引量:5 2013年 目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆管阻塞型肝纤维化大鼠肝组织Toll样受体(TLR)2、TLR4表达的影响。方法雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、TFL小剂量组(C组)、TFL大剂量组(D组)。除A组外,其余各组均采用胆总管结扎法制备肝纤维化大鼠模型。在造模后第2天开始,A、B组给予生理盐水灌胃,C、D组分别给予100、200 mg/(kg·d)的TFL灌胃,均1次/d,共4周,第4周末处死全部大鼠,留取肝脏组织。HE、Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变,免疫组化法及免疫印迹法检测TLR2、TLR4在4组大鼠肝组织内的表达。结果与B组比较,D组肝组织肝纤维化程度明显减轻,胶原表达明显减少(P<0.01);D组大鼠肝组织中TLR2和TLR4蛋白明显减少(P<0.01),C组介于B组和D组之间,但与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR2和TLR4蛋白表达增加可能与胆总管结扎大鼠肝纤维化的发生发展有关,200 mg/(kg·d)TFL能抑制肝纤维化大鼠TLR2、TLR4的表达,并改善大鼠肝组织纤维化程度。 何志国 赵永忠 卢青 周英琼 肖绪华 刘 黄大健 成秋宸关键词:荔枝核总黄酮 肝纤维化 TOLL样受体2 TOLL样受体4 荔枝核总黄酮改善胆总管结扎大鼠胆汁淤积症状的研究 被引量:6 2014年 目的观察荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能p16蛋白、3型胶原(PC3)和Ⅰ型胶原(PCⅠ)的影响。方法 40只大鼠随机分为假手术(SO)组、胆总管结扎(BDL)组、TFL组和水飞蓟宾胶囊(SIL)组。SO组、BDL组生理盐水灌胃5 mL/(kg·d),TFL组TFL灌胃200 mg/(kg·d),SIL组SIL灌胃5 mL/(kg·d),均持续4周。取血清检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、直接胆红素(BILD)、总胆红素(BILT)。取肝组织行HE、Masson染色;Western blot检测p16、PC3、PCⅠ的表达。结果 SO组ALT(IU/L:44.6±8.0)、AST(IU/L:103.8±18.1)、BILD(μmol/L:0.76±0.28)、BILT(μmol/L:1.48±0.35)值最低;BDL组ALT(147.4±86.3)高于TFL组(92.9±47.3),AST(362.7±106.6)高于TFL组(290.1±171.7)和SIL组(250.2±54.9),BILD(99.71±40.87)低于SIL组(137.01±38.86);TFL组BILD(81.48±47.50)、BILT(106.64±61.04)均低于SIL组(均P<0.05)。TFL组存在少量新生胆管,细胞水肿变性不明显,少量炎细胞浸润及胶原沉积,较BDL组肝纤维化程度明显改善。SIL组肝汇管区新生胆管较TFL组明显,有细胞变性水肿,炎细胞浸润,汇管区有纤维间隔,程度较BDL组轻,汇管区有胶原沉积。BDL组p16、PC3、PCⅠ蛋白表达高于TFL组,PC3蛋白低于SIL组,PCⅠ蛋白高于SIL组(均P<0.05),p16蛋白与SIL组差异无统计学意义;TFL组PC16、PC3蛋白表达低于SIL组(P<0.05),PCⅠ蛋白与SIL组差异无统计学意义。结论 TFL可改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能,减轻肝组织纤维化;其机制可能与抑制肝组织p16、PC3、PCⅠ蛋白表达有关。 成秋宸 赵永忠 肖绪华 刘瑞彪 黄大健 李胜联 徐庆关键词:荔枝核总黄酮 胆汁淤积性肝纤维化 P16 PC3 P16 转化生长因子-β1和骨桥蛋白在肝纤维化大鼠肝组织的表达及荔枝核总黄酮的干预 被引量:6 2013年 目的:观察荔枝核总黄酮(total flavone of litchi chinensis sonn,TFL)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法:雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组,模型组,TFL大、小剂量组。采用胆总管结扎术制备肝纤维化大鼠模型。术后第4周处死大鼠,放免法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)的水平。HE和Masson染色观察肝组织学变化及纤维化程度;免疫组化观察肝组织TGF-β1和OPN的染色部位及强度。结果:TFL大剂量组血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平以及肝组织TGF-β1、OPN的表达水平均低于模型组和TFL小剂量组,差异具有统计学意义(P<0.05),假手术组和TFL大剂量组间以及模型组和TFL小剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大剂量TFL可减轻胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝损伤及有效改善肝纤维化程度;抑制TGF-β1、OPN高表达,从而减少细胞外基质(ECM)的分泌可能是其抗肝纤维化的机制之一。 黄大健 赵永忠 卢青 周英琼 肖绪华 成秋宸 董勇 何志国关键词:荔枝核 黄酮 转化生长因子-Β 骨桥蛋白 荔枝核总黄酮对胆汁淤积性肝纤维化大鼠抗肝纤维化的机制探讨 被引量:4 2013年 目的观察荔枝核总黄酮对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能指标的影响及对胶原蛋白的影响,探讨其可能的干预机制。方法将胆总管结扎后的SD大鼠分为胆总管结扎组(BDL组),荔枝核总黄酮组(TFL组),水飞蓟宾组(SIL组),以假手术组为阴性对照。四周后处死大鼠,取血清检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、直接胆红素(BILD2)、总胆红素(BILT2)、肌酐(CREJ2)、血尿素氮(UREAL),同时,取肝组织行HE、Masson染色,western blot测定各组肝组织的PC3、PCⅠ、p16的表达。结果与BDL组比较,TFL组血清SOD含量明显升高(P<0.05),ALT,AST,BILD2,BILT2水平明显降低(P<0.05),TFL可明显改善大鼠肝纤维化程度(P<0.05),且对肾功能无明显影响(P>0.05),TFL可明显抑制p16、PC3、PCⅠ蛋白的表达(P<0.05)。结论 TFL组(300mg/kg·d)有明显改善胆汁淤积及减轻肝组织纤维化的作用且对肾功能无明显影响,明显抑制胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏p16、PC3、PCⅠ蛋白的表达,可能是通过诱导细胞凋亡途径抑制肝纤维化。 成秋宸 赵永忠 李胜联 肖绪华 刘瑞彪 黄大健 徐庆关键词:荔枝核总黄酮 胆汁淤积 肝纤维化 荔枝核总黄酮治疗胆汁淤积性肝纤维化大鼠的实验研究 被引量:9 2015年 核因子κB(NF-κB)是一个多功能核转录因子[1]。最近研究结果表明,NF-κ B在肝纤维化的发生和发展过程中起着至关重要的作用。本课题组前期研究结果显示,荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁淤积性肝纤维化大鼠有较好的抗纤维化作用。本研究采用胆总管结扎术制备继发性胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型,观察不同剂量的TFL对肝脏NF-κB蛋白表达的影响,探讨其治疗胆汁淤积性肝纤维化大鼠的分子靶向机制。 赵永忠 成秋宸 卢青 肖绪华 黄大健 刘瑞彪 李胜联 董勇关键词:核因子-ΚB 荔枝核总黄酮 荔枝核总黄酮抑制人肝星状细胞增殖作用机制的研究 被引量:3 2016年 目的研究荔枝核总黄酮(TFL)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肝星状细胞(HSC-LX2)增殖与核因子-k B(NF-кB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法体外培养HSC-LX2,TGF-β1刺激24 h后给予不同浓度的TFL(80、160、320、640、800μg/ml)干预;给药后24、48、72 h,用MTT法分别检测TFL对HSC-LX2增殖的影响;采用半定量PCR检测各组NF-кB、α-SMA mRNA的表达;Western blot检测NF-кB、α-SMA蛋白的表达情况。结果 MTT检测结果显示TFL呈时间依赖性抑制TGF-β1诱导HSC-LX2增殖,以作用48 h最为明显,其半数抑制浓度(IC50)为302μg/ml。TFL各剂量组作用48 h后,HSC-LX2细胞中NF-кB和α-SMA基因和蛋白的表达水平都降低,尤以300μg/ml和600μg/ml药物浓度组较明显,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论 TFL在体外对TGF-β1诱导的HSC-LX2的增殖有抑制作用,其作用机制可能是通过抑制细胞中NF-кB的表达,从而起到抗肝纤维化的作用。 李彩 林丽馨 肖绪华 刘燕秀 成秋宸 董勇 覃桂金 霍群 卢青 赵永忠关键词:荔枝核总黄酮 人肝星状细胞 细胞增殖