湖南省科技厅重点项目(2008sk2004)
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 相关作者：李灼日聂盛丹曹友德梁珊徐伟更多>>
- 相关机构：湖南省人民医院南华大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅重点项目湖南省自然科学基金长沙市科技局科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝细胞分离技术的研究进展被引量：5
- 2011年
- 肝细胞移植在治疗急性肝衰竭和遗传代谢性肝病等方面有着十分广阔的应用前景。但肝细胞分离技术仍不完善,需进行深入研究和探讨,以提高细胞的活性和数量,保留细胞功能。文章就肝细胞基本的分离方式及主要实验物种的相关分离方法的进展进行综述。
- 袁晓华李灼日
- 关键词：肝细胞移植细胞分离
- NPPB在大鼠肝细胞分离中的应用效果及其机制
- 2015年
- 目的观察5-硝基-2(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)在大鼠肝细胞分离中的应用效果,并探讨其可能的机制。方法将12只SD大鼠随机分为观察组和对照组各6只。两组分离肝细胞后,采用改良的四步胶原酶分离技术进行消化,制备肝细胞悬液。观察组在使用灌注液进行消化的过程中加入NPPB。采用血细胞计数板计算肝细胞收获量,PAS染色后计算纯度,0.4%台盼蓝染色后计算成活率。细胞无血清培养24 h后,采用全自动生化分析仪检测上层清液中的白蛋白(ALB)、ALT。采用紫外线分光光度法检测LDH吸光度,并计算LDH释放率。采用RT-PCR法检测细胞线粒体氯通道蛋白4(CLIC4)mRNA表达,Western blotting法检测细胞CLIC4蛋白表达。结果观察组与对照组肝细胞收获量分别为(4.41±0.20)×108、(4.40±0.26)×108个,纯度分别为90%±1%、89%±2%,成活率分别为88%±2%、85%±1%;两组比较,P均>0.05。观察组与对照组ALB分别为(43.8±5.0)、(25.2±3.0)g/L,ALT分别为(47.8±6.0)、(104.3±11.7)U/L,LDH释放率分别为21.0%±2.7%、34.0%±2.4%;两组比较,P均<0.05。观察组与对照组CLIC4 mRNA相对表达量分别为1.01±0.02、1.62±0.01,CLIC4蛋白相对表达量分别为0.38±0.02、0.52±0.03;两组比较,P均<0.05。结论肝细胞分离过程中应用NPPB可以在不影响分离细胞收获量、纯度及成活率的情况下,减轻肝细胞膜结构和功能损伤,其机制可能与抑制CLIC4表达有关。
- 梁珊石詠中聂盛丹黄韧徐伟李灼日
- 关键词：氯通道阻断剂
- 缺血预处理预防肝细胞分离过程中的缺血再灌注损伤被引量：2
- 2011年
- 背景:缺血预处理能否减轻肝细胞分离过程中的缺血再灌注损伤及改善供体残留肝脏功能?经检索国内外罕见这方面的研究。目的:探讨缺血预处理对分离肝细胞及供鼠残肝缺血再灌注损伤的防治作用。方法:12只SD大鼠随机分为2组:单纯肝部分切除组和缺血预处理组,各6只。采用改良四步胶原酶灌注法分离上述切除肝脏肝细胞,同时收集术前和术后1d大鼠的血清。结果与结论:缺血预处理组切除肝脏分离肝细胞成活率、增殖活性及白蛋白合成、超氧化物歧化酶水平显著高于单纯肝部分切除组(P<0.05),而乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、丙二醛水平显著减少(P<0.05);与单纯肝部分切除组比较,缺血预处理组大鼠血清白蛋白、乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、超氧化物歧化酶、丙二醛水平差异无显著性意义(P均>0.05)。结果表明缺血预处理能减轻肝细胞分离过程中的缺血再灌注损伤,其机制可能与其自身缺血性预适应、抗氧化、清除氧自由基的能力相关,但对供鼠肝部分切除后残肝功能的影响不明显。
- 梁珊石詠中聂盛丹徐伟李灼日
- 关键词：肝切除术缺血预处理缺血再灌注肝细胞SD大鼠
- 基于肝切除手术来源的成人肝细胞移植的临床应用被引量：6
- 2009年
- 目的探讨成人肝细胞移植治疗肝衰竭的临床效果。方法从良性病变的外科肝切除组织中获取有活性的成人肝细胞,对2例肝衰竭患者采用股动脉插管介入法行脾脏内移植。结果2例患者在治疗后病情均得到一定程度的缓解,临床症状和生化指标明显改善,其肝功能有一定程度的恢复,但例1术后第3 d胆红素上升,术后第4 d出现肝昏迷而自动出院;例2于术后1周黄疸指数再次升高,术后40 d死亡。结论成人肝细胞脾脏内移植治疗肝衰竭,技术上安全可行,且具有一定临床疗效;如何增强移植后肝细胞的数量和功能将是维持受体肝功能持续改善的关键。
- 李灼日毛先海胡小萱聂盛丹石咏中向华吴金术陈海鸥杨建辉曹友德
- 关键词：肝细胞细胞移植肝功能衰竭
- CGRP对内皮素-1诱导肝细胞损伤的保护作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨内皮素1(ET-1)对人肝细胞的损伤作用及降钙素基因相关肽(CGRP)的保护作用与机制。方法外科切除肝组织分为:正常对照组(D-Hanks液灌注);ET-1(10-7M)灌注损伤组;CGRP(10-6M,10-7M,10-8M)干预组。采用胶原酶灌注法分离肝细胞,检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及丙二醛(MDA)含量,台盼蓝检测新鲜分离肝细胞成活率,并体外培养肝细胞。用MTT法观察肝细胞活力,收集细胞培养上清检测谷丙转氨酶(ALT)、白(清)蛋白(Alb),尿素(Urea)和乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果与对照组比较,ET-1组肝细胞成活百分率及活力,ALB合成及Urea代谢显著减低(P<0.05);肝组织中TNF-α及MDA含量,LDH及ALT释放增加(P<0.05);而CGRP(10-6M,10-7M,10-8M)能显著减轻ET-1诱导的肝细胞损伤,使肝细胞成活率及活力、Alb分泌及Urea代谢均显著增加(P<0.05),使LDH及ALT,TNF-α及MDA显著减少(P<0.05)。结论CGRP对ET-1诱导的肝细胞损伤具有保护作用,其机制与MDA和TNF-α释放减少有关。
- 聂盛丹李灼日曹友德吕品石泳中梁珊
- 关键词：肝细胞内皮素-1降钙素基因相关肽
- 肝细胞移植影响因素概述被引量：1
- 2010年
- 肝细胞移植作为治疗暴发性肝功能衰竭、遗传代谢性肝病及各种终末期肝病的一种的新治疗方法,其安全性和可行性已得到了临床证实。本文对肝细胞移植的影响因素进行综述。
- 廖海波李灼日
- 关键词：肝细胞移植肝功能衰竭
- CGRP预培养对肝细胞冻存损伤的保护作用及机制
- 2009年
- 【目的】探讨降钙素基因相关肽（CGRP）预培养对冻存肝细胞的保护作用与机制。【方法】外科切除肝组织分成5组：①对照组（DMEM预培养0h）；②标准预培养组（DMEM预培养8h）；③CGRP三个浓度预培养组（10^-6mol／L，10^-7mol／L，10^-8mol／L；8h）。采用胶原酶灌注法分离肝细胞，经预培养后冻存5周，复苏，台盼蓝检测新鲜分离肝细胞成活率，并体外培养肝细胞48h，用MTT法观察肝细胞活力，收集细胞培养上清检测谷白蛋白（Alb），乳酸脱氢酶（LDH）水平，检测肝细胞内活性氧（ROS）及丙二醛（MDA）含量。【结果】预培养组及各CGRP（10^-6，10^-7，10^-8）处理组细胞成活率（53±5，63±6，61±6，58±7）、Alb合成（4．8±0．6，6．5±0．7，5．8±0．7，4．9±0．6）及MTT活性（0．25±0．07，0．38±0．06，0．31±0．05，0．22±0．03）较对照组（46±7，3．9±0．6；0．11±0．01）显著增加（P〈O．05），且CGRP（10^-6，10^-7）处理组细胞成活率、Alb合成及MTT活性显著高于预培养组（P〈0．05）；预培养组及各cGRP（10^-6，10^-7，10^-8）处理组肝细胞复苏后48h内LDH释放（25±7，15±4，17±5，18±6），ROS释放（107士9．5，62±4．8，70±7．1，80±5．8）及MDA水平（0．87±0．1，0．70±0．06，0．76±0．07，0．80±0．07）较对照组（31±6，120±8．5，1．31±0．04）显著减少（P〈O．05），且与预培养对照组比较，CGRP（10^-6，10^-7，10^-8）各处理组LDH及ROS释放显著减少（P〈0．05），CGRP（10^-6，10^-7 。）处理组MDA释放显著减少（P〈0．05）。【结论】cGRP预培养对冻存引起的肝细胞损伤具有保护作用，其机制与抗氧化应激损伤有关。
- 聂盛丹李灼日曹友德石泳中吕品
- 关键词：降钙素基因相关肽
