国家自然科学基金(30370598)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：韩骅梁英民王耀春都艳玲王晓明更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学唐都医院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小胶质细胞的培养及鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的:获得高纯度培养原代小胶质细胞的方法并检测Notch信号通路相关分子在小胶质细胞的表达情况。方法:取胎鼠利用反复机械振摇纯化分离小胶质细胞;利用流式细胞仪,根据CD11b及MHCII的表达水平对分离的小胶质细胞纯度进行鉴定;利用qPCR及琼脂糖凝胶电泳检测小胶质细胞中Notch通路相关分子的表达情况。结果:利用5只胎鼠采取反复机械振摇的方法可较稳定的获得1.1×106个的小胶质细胞,流式细胞术结果显示细胞纯度高达97.77%,并在小胶质细胞中检测到Notch相关分子的表达。结论:利用胎鼠反复机械振摇法可以获得较高纯度及产量的小胶质细胞,小胶质细胞表达Notch信号通路。
- 刘洪翠郑敏化张丙芳都艳玲王晓明韩骅
- 关键词：小胶质细胞原代培养纯化NOTCH通路
- Bcr-Abl酪氨酸蛋白激酶域及其突变体的构建和表达被引量：1
- 2006年
- 目的:制备Bcr-Ab l激酶域及其突变体-H is的重组蛋白.方法:用PCR方法从含有Bcr-Ab l全长的质粒pGD210中扩增出Bcr-Ab l激酶域片段,再通过重组PCR技术获得激酶域的几个主要突变体(T315 I,Y253F,E255K,E255V),测序正确后将其克隆到原核表达载体pET-32 a中,构建表达激酶域片段和H is标签融合表达的载体,IPTG诱导表达,得到的融合蛋白用镍-次氮基三乙酸(N i-NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化.结果:成功得到了Bcr-Ab l激酶域及其突变体序列,经序列分析证实后将重组质粒转入BL-21进行表达.结论:通过重组PCR技术获得了野生型激酶域及其突变体蛋白.融合蛋白表达在包涵体,占菌体总蛋白的70%以上.经N i-NTA镍珠纯化后,纯度在95%以上.
- 王淑红梁英民邢佩霓刘海妮王耀春杨曦蒋珊珊李军林李军锋
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶聚合酶链反应蛋白纯化
- RBPJ与KyoT_2真核表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的:构建含有myc-RBPJ(R218H)(recombination binding protein-J)、myc-KyoT2融合基因片段的质粒,并在真核细胞中表达、鉴定。方法:由本科室保存质粒酶切分别得到RBPJ(R218H)和myc-KyoT2基因片段,将RBPJ(R218H)基因插入载体PCMV-myc中,获得融合基因myc-RBP-J(R218H),将myc-RBPJ(R218H)和myc-KyoT2插入真核表达载体pIRES2-EGFP,构建真核表达载体myc-RBPJ(R218H)-IRES2-EGFP、myc-KyoT2-IRES2-EGFP。以其瞬时转染HEK293细胞,应用免疫印迹与流式细胞术检测融合蛋白与绿色荧光蛋白的表达。结果:正确获得myc-RBPJ(R218H)融合基因,DNA序列分析表明所构建的含myc-RBPJ(R218H)、myc-KyoT2融合基因的质粒与设计相同,myc-RBPJ(R218H)、myc-KyoT2融合蛋白与绿色荧光蛋白均正确表达。结论:成功构建了含有myc-RBPJ(R218H)、myc-KyoT2融合基因的真核表达载体,并在真核细胞中正确表达,为进一步研究慢性粒细胞白血病与Notch信号转导通路之间的关系奠定了基础。
- 尹郸丹梁英民韩骅侯丽宏王耀春胡兴斌张萍康志杰时宏伟
- 关键词：慢性粒细胞白血病NOTCH真核表达
