质检公益性行业科研专项项目(201010256)
- 作品数：14 被引量：93H指数：6
- 相关作者：陈青廖富荣林石明陈红运张慧丽更多>>
- 相关机构：宁波出入境检验检疫局厦门出入境检验检疫局宁波大学更多>>
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- 应用逆转录环介导等温扩增技术检测大豆种子中烟草环斑病毒被引量：3
- 2012年
- 根据烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白基因序列设计并合成了1组RT-LAMP引物,利用实时浊度仪监测反应过程,初步建立了烟草环斑病毒的RT-LAMP检测方法,并进行了特异性与灵敏度检测。结果显示,RT-LAMP灵敏度与普通RT-PCR法相当,但检测时间明显缩短,1 h即可完成反应。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可通过裸眼观察荧光的有无来判断是否有扩增。对大豆种子中携带的烟草环斑病毒进行了RT-LAMP检测,裸眼判定与仪器监测结果一致。结果证明所建立的TRSV RT-LAMP方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,不需复杂仪器设备,适合于TRSV的现场快速检测。
- 郭立新陈先锋徐亚飞邱志君朱迪琦段维军
- 关键词：烟草环斑病毒
- 玉米褪绿斑驳病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究被引量：11
- 2011年
- 玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国对外公布的检疫性有害生物。本研究根据该病毒外壳蛋白基因的保守序列,设计得到特异性引物及Taqman荧光探针,建立了MCMV的实时荧光RT-PCR方法,并对其灵敏度与特异性进行了研究。该方法针对2个不同来源的毒株均能得到典型扩增曲线,而没有从小麦线条花叶病毒、玉米粗缩病毒和玉米矮花叶病毒的RNA得到扩增曲线,表明引物与荧光探针具有良好的特异性。针对玉米褪绿斑驳病毒RNA不同稀释度样品,实时荧光RT-PCR检测低限达到10-5稀释度,检测灵敏度要比普通RT-PCR高出100倍。因此,本研究建立的MCMV实时荧光方法具有特异性强、灵敏度高和快速有效的优点。
- 闻伟刚张建成崔俊霞张颖
- 逆转录环介导等温扩增技术检测草莓潜隐环斑病毒的研究被引量：8
- 2013年
- 采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspot virus,SLRSV)检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65℃等温扩增,整个检测周期约1.5h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。
- 张吉红余澍琼徐瑛张慧丽陈先锋陈剑平陈炯
- 关键词：环介导等温扩增
- 豇豆重花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：14
- 2012年
- 豇豆重花叶病毒(Cowpea severe mosaic virus,CPSMV)是我国进境植物检疫性有害生物,本研究根据CPSMV的外壳蛋白基因序列设计引物,以期建立CPSMV的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。条件优化后,建立了CPSMV的RT-LAMP方法,该方法可将CPSMV与同属其他病毒准确区分,具有良好的特异性。灵敏度试验显示,RT-LAMP比普通RT-PCR灵敏度高10倍。说明本研究建立的RT-LAMP方法适用于CPSMV的快速、特异和灵敏的检测。
- 郭木金廖富荣陈青林石明陈红运沈建国
- 冬生疫霉的实时荧光PCR检测方法被引量：8
- 2013年
- 冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)是我国检疫性病原菌。本研究根据冬生疫霉的ITS基因序列,设计了实时荧光PCR引物PH-F和PH-R及TaqMan-MGB探针PH-Pr,建立了冬生疫霉的实时荧光PCR检测方法,可检测到冬生疫霉DNA最低浓度为50 fg/μL,而冬生疫霉的近似种、近缘种和空白对照,无荧光信号增加。因此,利用该方法可以稳定、高效的检测出冬生疫霉。
- 杜洪忠吴品珊严进张秋娥
- 关键词：PHYTOPHTHORA实时荧光PCR
- 台湾甜椒种子中辣椒轻斑驳病毒检测及其致病型鉴定被引量：5
- 2011年
- 利用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和基因序列分析法对一批台湾进境的辣椒种子进行病毒检测及致病型鉴定,同时使用特征序列扩增区域(SCAR)标记引物利用PCR方法对该辣椒品种进行L抗性基因检测。DAS-ELISA及RT-PCR结果表明,从该批种子中检测到辣椒轻斑驳病毒(Peppe rmild mottle virus,PM MoV)。PCR产物测序分析表明,该序列为PM MoV的外壳蛋白(CP)基因,与已报道的PM MoV序列同源性为92.4%～99.8%。CP蛋白氨基酸序列分析表明,该分离物(命名为TW分离物)属于PM MoV的P1,2,3致病型。抗性基因检测表明,该辣椒品种携带有L3抗性基因。TW分离物能够系统侵染该辣椒品种,意味着该分离物已经克服L3基因介导的抗性。本研究报道的PM MoV的P1,2,3致病型在中国大陆尚属首次,这对于抗病辣椒品种的选育具有重要的指导意义。
- 廖富荣沈建国吴媛郭木金黄蓬英陈青陈红运林石明
- 关键词：甜椒辣椒轻斑驳病毒种子传播外壳蛋白基因
- 基于ITS基因、Actin基因和EF-1α基因序列的新疆向日葵黑茎病菌亲缘关系分析被引量：5
- 2013年
- 对不同地理来源的向日葵黑茎病菌的ITS基因、Actin基因和EF基因进行测序,结合GenBank中的同源序列,对这3种基因的序列进行比对分析和系统进化分析,探讨ITS、Actin以及EF基因用于向日葵黑茎病菌的种内鉴定以及其系统进化的可行性。结果表明:ITS序列和Actin序列比较保守,无法作为种内鉴定的依据。EF基因序列其变异几率比较高,不同地理来源的菌株在EF-1α基因序列上表现出了比较大的差异,可以用于种内亲缘关系的研究。
- 刘启鹏赵思峰吴品珊杜洪忠张海燕王志霞
- 关键词：向日葵黑茎病基因序列亲缘关系ITS基因ACTIN基因
- 进境青菜种子携带油菜茎基溃疡病菌的检测和鉴定被引量：8
- 2013年
- 使用油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)特异性引物LmacF/LmacR对一批来自新西兰的青菜种子进行PCR检测,结果呈弱阳性;进一步挑选皱缩、干瘪、变色、小粒、残缺或有霉变的异常种子,PCR扩增后得到清晰的目标条带。挑选的异常种子经病菌分离和菌落纯化后获得3个菌株,其培养性状及形态特征与L.maculans相符,测序结果证实3个菌株均为L.maculans,此为我国口岸检疫部门从大规模商业引种中截获L.maculans的首次报道。
- 陈青黄峰廖富荣陈红运易建平林石明
- 油棕猝倒病菌实时荧光PCR检测方法被引量：3
- 2012年
- 油棕猝倒病菌(Pythiums plendens)是我国进境植物检疫性有害生物。本试验根据P.splendens rDNA ITS区序列,设计了实时荧光PCR引物pyspF/pyspR及荧光探针pyspT,建立了P.splendens荧光PCR检测方法,检测灵敏度为0.012pg/μL。
- 张慧丽王建峰段维军徐瑛高姗姗陈先锋
- 关键词：实时荧光PCR
- 进境番茄种子中番茄花叶病毒的检测与鉴定被引量：5
- 2011年
- 利用双抗夹心-酶联免疫吸附试验（DAF〉EI。ISA）和反转录-聚合酶链式反应（Rrr_PCR）方法对来自韩国的番茄种子进行种传病毒检测。结果表明，在该批番茄种子中检测到番茄花叶病毒（ToMV）和烟草花叶病毒（TMV）。PCR产物测序结果表明，ToMV特异引物（ToA／ToB）与TMV特异引物（TA／TB）扩增的片段均为ToMV的外壳蛋白（CP）基因及3’非编码区（3’-UTR），该片段与其他ToMV分离物的核苷酸序列相似性为98．2％～99．9％。本研究利用重新设计合成TMV和ToMV特异引物对该批种子进行RT-PCR检测，仅ToMV特异性引物（ToMfl／ToMrl）扩增到670bp的预期片段，TMV特异引物（TMfl／TMrl）则未出现特异性扩增，表明重新设计的引物可准确区分ToMV和TMV。以上结果证实该批番茄种子仅携带ToMV。
- 廖富荣郭木金林石明陈红运陈青黄蓬英吴媛谢惠明
- 关键词：番茄种子反转录-聚合酶链式反应番茄花叶病毒烟草花叶病毒种子传播
