国家高技术研究发展计划(2012AA020809)
- 作品数：10 被引量：24H指数：3
- 相关作者：王燕一梁爱华付月君胡风云徐莹莹更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院山西省人民医院山西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 蛋白质羰基与衰老疾病关系的研究进展被引量：9
- 2015年
- 关于衰老有着许多假说,其中自由基假说和氧化应激假说得到了广泛认可。自由基可导致多种生物大分子尤其是蛋白质的改变,公认的蛋白质不可逆的氧化修饰便是蛋白质的羰基化,羰基化可导致蛋白质的失活、水解、折叠和交联,进而影响蛋白质的功能。人体内蛋白质羰基的含量与衰老及多种衰老相关疾病密切相关。现将蛋白质羰基与人体衰老、阿尔兹海默病、慢性阻塞性肺病、慢性肾衰竭、糖尿病、心血管疾病及肿瘤等的关联作一综述。用蛋白质羰基评价氧化应激和蛋白质氧化也存在着一些问题,这有待于进一步的研究。
- 王志辉王燕一
- 关键词：衰老疾病
- 全血中谷胱甘肽与N-乙基马来酰亚胺的衍生化反应条件实验
- 2017年
- 目的对全血中谷胱甘肽(glutathione,GSH)与N-乙基马来酰亚胺(N-ethylmaleimide,NEM)的衍生化反应条件进行比较,以达到完全衍生化。方法随机选取2016年4月-2016年6月解放军总医院体检中心健康成年人60例(23~79岁,男29例,女31例)。分别采集静脉血2 ml,用于衍生化反应条件实验及GSH的正常值测定。应用高效液相色谱与质谱联用技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分组分析温度、pH、反应时间等因素对衍生化过程的影响。A组:分别于室温(25℃)下反应10 min、30 min、60 min;B组:分别于50℃、60℃、70℃、80℃、90℃水浴加热10 min;C组:Tris-Cl缓冲液(pH=8)调节pH,于室温(25℃),70℃、80℃、90℃水浴加热10 min;D组:样本衍生化后,分别于室温(25℃),70℃、80℃、90℃水浴加热10 min,再加入蛋白沉淀试剂。结果 D组衍生化反应较彻底且室温25℃亚组与其他组相比未衍生化GSH相对比率最低(P<0.05)。应用D组方法检测健康成人全血中GSH为(1 471.61±269.43)μmol/L,氧化型谷胱甘肽为(0.84±0.38)μmol/L。结论当衍生化试剂NEM与沉淀蛋白试剂SSA分别加入时,无需另外调节pH以及温度就能达到较彻底的衍生化反应。
- 徐莹莹王志辉王燕一
- 关键词：谷胱甘肽衍生化色谱法高效液相
- 宏基因组学在口腔微生物研究中的应用进展被引量：6
- 2015年
- 口腔是由大量微生物组成的复杂生态系统,口腔微生物与口腔及全身的健康和疾病有着密切的联系。宏基因组学技术通过对口腔微生物基因组的测序分析,一方面使口腔微生物群落研究更加深入,另一方面为新的功能基因的获得和鉴定提供了方法。本文就口腔微生物的研究方法和宏基因组学在口腔微生物研究中的应用进行综述。
- 车宇薇王燕一
- 关键词：宏基因组口腔微生物群落
- 杆状病毒AcMNPV介导BmK IT的表达促进草地夜蛾卵巢Sf9细胞凋亡及病毒在细胞内的复制(英文)被引量：4
- 2015年
- 昆虫杆状病毒是一类寄生于节肢动物的囊膜包裹的双链环状DNA,杆状病毒作为新型生物杀虫剂逐渐应用于害虫防治。BmK IT是一种从东亚钳蝎分离出来的昆虫毒素,可以与昆虫细胞膜的钠离子通道相互作用,引起钠离子通道动作电位重复发放,并增强钠电流峰值,延缓钠传导关闭,使昆虫产生兴奋性麻痹。为了提高杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)杀虫活性,本研究将BmK IT基因插入到AcMNPV基因组中,形成重组杆状病毒AcMNPV-BmK IT。采用MTT法、TUNEL试剂、Western blot、real-time PCR及病毒滴度测定来检测AcMNPVBmK IT对草地夜蛾卵巢细胞Sf9发生凋亡及病毒在Sf9细胞内的复制情况。结果显示AcMNPV介导BmK IT的表达促进了Sf9细胞凋亡及病毒复制。此结果为揭示重组病毒AcMNPV-BmK IT的抗虫机制提供了实验依据。
- 付月君赵洁梁爱华胡风云
- 关键词：ACMNPVBMKSF9细胞
- 多位点突变提高大肠杆菌植酸酶AppA热稳定性
- 2014年
- 为提高大肠杆菌植酸酶AppA(一种已得到广泛应用的饲料添加剂,其酶活高,pH作用范围广,但热稳定性较差)热稳定性,在appA基因上组合突变了W46E、Q62W、A73P、K75C、S146E、R159Y、N204C、Y255D、Q258N和Q349N等10个位点,突变后的基因命名为appAM10。将野生型appAppA和突变体appAM10ppAM10基因转入毕赤酵母GS115进行表达,并对重组蛋白AppA和AppAM10进行了酶学性质研究与比较。结果表明:AppAM10分子量约为55kDa,比活性为3022U/mg,AppAM10的K_m=330μmo1/L,V_(max)=3147U/mg。AppAM10的最适pH值为4.5,最适反应温度为65℃。与野生型的AppA的最适pH无明显区别,比AppA的最适温度提高了5℃。经90℃孵育15min后,AppA完全失活,而AppAM10仍残留17.5%的活性,T_m值提高约8℃,说明上述10个位点的组合突变有利于提高大肠杆菌植酸酶AppA热稳定性,其中与N-糖基化有关的N204C、Q258N和Q349N3个位点可能起着重要作用。
- 王茜姚明泽宋玛丽付月君胡风云梁爱华
- 关键词：定点突变热稳定性N-糖基化毕赤酵母
- 唾液与血浆中超氧化物歧化酶抑制率的增龄性变化研究
- 2017年
- 目的:检测健康成人唾液与血浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)抑制率,分析两者的相关性以及与年龄的关系。方法:随机选取解放军总医院年龄20-79岁志愿者244例。将受试人群分为青年组(20-44岁),中年组(45-59岁),老年组(60-79岁);并以性别分组。通过水溶性四唑盐(w ater-soluble tetr azolium salt,WST)法对血浆以及唾液中超氧化物歧化酶抑制率进行检测分析。结果:健康成人血浆整体SOD抑制率为61.27±5.79%;唾液整体SOD抑制率为43.40±12.99%。青年组、中年组、老年组各组血浆以及唾液SOD抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。血浆及唾液SOD抑制率与年龄呈负相关(r=-0.61,r=-0.49,P<0.05)。血浆与唾液中SOD抑制率与年龄呈正相关(r=0.43,P<0.05)。但均未发现性别差异。结论:随着年龄的增加唾液和血浆中SOD抑制率减低,且唾液与血液中SOD抑制率正相关。因而通过唾液SOD抑制率的检测可初步评价机体的氧化应激状态。
- 徐莹莹解涓朱博王燕一
- 关键词：超氧化物歧化酶唾液血浆
- 健康成人唾液与血浆中巯基化合物浓度增龄性变化初探
- 2015年
- 目的 分析健康成人唾液与血浆巯基化合物浓度与年龄、性别的关系,探讨唾液与血浆巯基化合物浓度的关联及增龄性变化,为临床检测提供参考.方法 选取2013年12月至2014年6月于解放军总医院健康管理研究院国宾部体检中心体检的健康成年志愿者306名（151名女性,155名男性）,分为青年组（106名,20～ 44岁,48名女性,58名男性）、中年组（109名,45～ 59岁,63名女性,46名男性）和老年组（91名,60～ 79岁,40名女性,51名男性）,分别检测唾液与血浆巯基化合物浓度.结果 306名健康成人唾液与血浆巯基化合物浓度分别为（123±27）和（427±124） μmol/L.随着年龄的增加,唾液与血浆巯基化合物浓度均显著减少（P＜0.01）;老年组唾液和血浆巯基化合物浓度均显著低于青年组和中年组（P＜0.01）;唾液巯基化合物浓度的男女总体差异无统计学意义（P=0.451）,但血浆巯基化合物浓度的男女总体差异有统计学意义（P=0.006）;唾液和血浆巯基化合物浓度显著正相关（r=0.5050,P＜O.01）.结论 唾液巯基化合物浓度能大体反映血浆巯基化合物浓度,唾液巯基化合物检测有望代替血浆巯基化合物检测成为衰老的生物学指标.
- 王志辉鄂玲玲王三杏王燕一
- 关键词：巯基化合物唾液血浆衰老
- N-糖基化对植酸酶phy(QF)酶学性质的影响被引量：1
- 2015年
- 为探讨N-糖基化对植酸酶phy(QF)酶学性质的影响,将植酸酶基因phy(QF)在毕赤酵母中进行了表达,利用脱糖基化酶Endo Hf去除重组植酸酶phy(QF)的糖链,对去除糖链前后的植酸酶phy(QF)进行了纯化和酶学性质研究与比较。结果表明,糖基化的植酸酶phy(QF)分子量约为53 k Da,酶活为3 201 U/mg,Km=392μmol/L,Vmax=3 267 U/mg;糖基化的植酸酶phy(QF)最适p H值为4.5,最适反应温度为55℃,与去糖基化的植酸酶phy(QF)的最适p H值无明显区别,比去糖基化的植酸酶phy(QF)最适温度提高了5℃,Tm值提高约2℃。经70℃孵育10 min后,去糖基化的植酸酶phy(QF)完全失活,而糖基化的植酸酶phy(QF)仍残留13%的活性,说明N-糖基化作为一种重要的翻译后修饰,对植酸酶phy(QF)的稳定性有促进作用。
- 王茜宋玛丽杜军付月君胡风云梁爱华
- 关键词：植酸酶N-糖基化圆二色谱
- 谷胱甘肽的高效液相色谱及色谱联用检测方法进展被引量：2
- 2017年
- 谷胱甘肽(glutathione,GSH)是一种含有巯基的三肽化合物。机体内谷胱甘肽主要以还原型的状态存在,氧化应激后形成氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG),后者在谷胱甘肽还原酶的作用下再形成还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)。还原型谷胱甘肽具有保护细胞免遭氧化损伤的重要作用。几乎所有哺乳动物体内都有谷胱甘肽。研究机体内还原型谷胱甘肽以及氧化型谷胱甘肽的含量,可以评价机体的氧化应激情况和疾病发生的风险。虽然很多学者都对体内的氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽进行了检测,但是检测结果差异较大。这是由于GSH发生自氧化从而造成GSH的低估,及GSSG的高估和(或)GSH/GSSG的低估。本文主要对GSH的色谱以及色谱联用例如:液质联用(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)等方法进行综述。
- 徐莹莹王燕一
- 关键词：谷胱甘肽
