国家自然科学基金(30370562)
- 作品数：20 被引量：51H指数：4
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- 去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响及其作用途径。方法:分离培养正常大鼠BMSCs,采用3H-TdR掺入实验检测不同浓度的NE(10-7-10-4M)作用8h及10-5M的NE作用不同时间(0-24h)BMSCs细胞增殖情况,realtimeRT-PCR检测肾上腺素能受体α1A-AR,α1B-AR和α1D-ARmRNA表达变化情况。结果:10-7-10-4M的NE作用8h后均促进了BMSCs细胞的增殖,并且在10-5M时NE对BMSCs的促增殖效应最为显著;正常组BMSCs细胞的α1A-AR,α1B-AR,α1D-ARmRNA表达维持在较低水平,加入10-5M的NE作用后α1-AR三个亚型mRNA表达水平均有不同程度的升高(P<0.05)。结论:NE能够促进BMSCs的增殖,并且这种促增殖作用是通过AR依赖的信号通路来调节的。
- 韩京艾国平粟永萍
- 关键词：去甲肾上腺素骨髓间充质干细胞肾上腺素能受体
- 分泌性白细胞蛋白酶抑制剂的生物学功能及其在组织修复中的作用
- 2007年
- 分泌性白细胞蛋白酶抑制剂（secretary leukocyte protease inhibitor。SLPI）也叫抗白细胞蛋白酶（antileukoprotease，AIJP）或分泌性蛋白酶抑制剂（mucous protease inhibitor，MPI），为黏膜上皮细胞分泌的非糖基化单链多肽蛋白，是一种嗜中性弹性蛋白酶阳离子抑制剂，具有抗细菌、抗病毒、抗炎症因子和诱导细胞增殖分化等生物学功能，对创伤组织的愈合也具有重要作用。SLPI基因敲除的小鼠组织愈合十分困难，
- 张炜炜艾国平
- 关键词：生物学功能PROTEASE上皮细胞分泌细胞增殖分化组织愈合
- 白细胞蛋白酶抑制因子促进真皮间充质干细胞增殖的机制被引量：4
- 2007年
- 目的研究白细胞蛋白酶抑制因子（secretory leukocyte protease inhibitor，SLPI）对真皮间充质干细胞（dermal mesenchymal stem cells，dMSCs）的增殖作用及其机制。方法利用贴壁生长的特性分离dMSCs，细胞在无血清IMDM培养液中培养48h后，加入不同浓度的SLPI，24h后加入[H^3]Thymidine，通过液闪计数器计数。提取对照组和SLPI作用后细胞的总RNA和蛋白，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测SLPI因子作用前后cyclin A、CDK2、CDK4的变化，Western blot检测SLPI因子作用前后cyclin D1、cyclin E的表达变化。结果分离的大鼠dMSCs呈梭形．在体外显示多向分化潜能。加入SLPI因子后，[H^3]Thymidine掺人活性增强。RT—PCR提示在SLPI诱导下，CDK2表达增强，而cyclin A和CDK4表达没有明显变化，Western blot提示SLPI因子作用后cyclin DI、cyclin E表达均明显增强。结论SLPI能够促进dMSCs的增殖，其机制可能是通过调节cychn D1、cyclin E、CDK2等细胞周期素的表达。
- 江德鹏向静文亮栗永萍屈纪富冉新泽程天民
- 关键词：干细胞增殖
- 创伤早期伤口液作用真皮多能干细胞差异表达cDNA文库的构建被引量：4
- 2005年
- 目的：研究创伤早期伤口液作用前后真皮多能干细胞基因表达的变化,探讨真皮多能干细胞参与创伤修复启动的分子机制。方法：取伤后1d伤口液作为创伤修复启动微环境,刺激真皮多能干细胞,24h后提取总RNA为实验方(tester),未予刺激的真皮多能干细胞总RNA为驱动方(driver)。实验方、驱动方总RNA由SMART cDNA方法合成cDNA,然后用抑制消减杂交(SSH)方法获得消减杂交产物。消减杂交产物克隆到T载体构建消减文库。对部分克隆进行杂交筛选及序列比对。结果：消减杂交文库挑取615个克隆进行PCR扩增,阳性率约为97%。取其中48个克隆进行反向Northern杂交,获得5个差异表达基因。经Genebank检索,这些差异表达基因与已知序列有较高同源性,其中大多为与创伤修复相关的基因。结论：我们成功构建了创伤早期伤口液刺激前后大鼠真皮多能干细胞差异表达cDNA文库,并筛选、克隆出部分与真皮多能干细胞参与创伤修复相关的差异表达基因。
- 屈纪富史春梦郑怀恩郝利程天民
- 关键词：真皮多能干细胞创伤愈合抑制消减杂交
- 干细胞与皮肤创伤愈合被引量：1
- 2005年
- 皮肤直接与外界接触，易于受伤，并且皮肤创伤愈合较为复杂，因此，研究皮肤创伤愈合具有重要的理论和实际意义。干细胞在多种生理和病理情况下都发挥了重要作用，在皮肤创伤愈合中也具有重要意义。本文综述了与皮肤创伤愈合密切相关的干细胞研究进展。
- 文亮屈纪富刘明华任小宝尹昌林
- 关键词：干细胞创伤愈合皮肤
- 真皮多能干细胞在创伤愈合中的作用被引量：6
- 2004年
- 目的:研究真皮多能干细胞的部分基本生物学特性,观察其在创伤愈合中的意义。方法:采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞;利用流式细胞技术观察真皮多能干细胞周期变化;四唑盐比色试验(MTT法)观察其辐射敏感性。收集伤后1,2,3和4d伤口液,观察其对真皮多能干细胞的反应性。结果:分离、纯化的真皮多能干细胞形态较为均一,增殖能力强;培养的细胞凋亡数量少,多处于静止期,对辐射极为敏感;这种细胞增殖对伤口液具有良好的反应性,尤其伤后早期伤口液作用更为明显。结论:发育成熟的个体中仍存在较为幼稚的真皮多能干细胞,它们在创伤愈合过程中具有重要意义,特别是在创伤修复启动中的作用值得进一步深入研究。
- 屈纪富史春梦麦跃郝利程天民
- 关键词：真皮多能干细胞创伤伤口愈合细胞培养细胞周期
- 通过基因芯片筛选创伤修复差异表达基因
- 2006年
- 目的通过基因芯片筛选同真皮间充质干细胞相关的创伤修复差异表达基因。方法利用贴壁生长的特性分离大鼠真皮间充质干细胞,用Tripure提取伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA。PCR扩增已构建抑制消减杂交差异表达文库中485个克隆的插入片断,送北京博奥制作基因芯片。提取的RNA反转录后分别同芯片杂交,找出在细胞水平和组织水平同时高表达的克隆。将这些克隆测序,进行生物信息学分析。结果分离的大鼠真皮间充质干细胞呈纺锤形,在体外显示多向分化潜能。抽提伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA,反转录后和基因芯片杂交,发现可能同创伤愈合相关的13条基因,其中热休克蛋白70(HSP70),基质金属蛋白酶3(MMP3),白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)等可能在创伤愈合中有重要意义。结论抑制消减杂交和基因芯片结合是筛选差异表达基因的一种有效方法。伤口液刺激前后dMSCs中差异表达基因的发现能为从基因水平探讨dMSCs参与创伤愈合的分子机制提供新的研究靶点。
- 江德鹏向静文亮粟永萍屈纪富冉新泽
- 关键词：基因芯片干细胞基因
- 创伤早期伤口液对体外培养真皮多能干细胞增殖迁移特性的影响被引量：8
- 2006年
- 目的探讨真皮多能干细胞在创伤修复启动中的作用。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞、真皮成纤维细胞和血管内皮细胞;利用四唑盐比色试验(MTT法)检测不同时间、不同浓度伤口液对上述细胞的影响。在此基础上,观察伤后1d伤口液对真皮多能干细胞贴壁力和迁移力等与创伤修复密切相关的指标变化。结果伤后不同时相不同浓度伤口液对真皮多能干细胞增殖均具有显著刺激作用,但以伤后早期的伤口液作用最为明显。成纤维细胞和血管内皮细胞对伤口液反应均显著弱于真皮多能干细胞。伤口液作用后真皮多能干细胞贴壁力和迁移能力较对照组细胞显著增加。结论真皮多能干细胞是创伤愈合,特别是创伤修复启动过程中的一种重要的间充质干细胞,对其深入研究有望为阐明创伤修复启动分子机制提供依据。
- 屈纪富江德鹏郑怀恩郝利文亮程天民
- 关键词：真皮多能干细胞伤口液
- 抑制消减杂交在干细胞研究及组织修复中的应用被引量：3
- 2003年
- 干细胞(stemcells)是指具有自我更新和多向分化潜能的细胞,它们在组织修复(细胞疗法和组织工程的种子细胞、基因治疗的载体)研究中具有无可比拟的优越性。但目前干细胞基本生物学特性及应用研究中仍有诸多问题尚未阐明,特别是基因和分子水平的机制仍远未阐明。机体组织和细胞基因表达的变化能灵敏、细致地反映生长、发育、分化的发生机制,分析细胞或组织间基因差异表达(differentialexpression)是阐明其活动机制的重要方法。抑制消减杂交(suppressionsubtractivehy-bridization,SSH)技术是一种新近发展的差异基因筛选技术,它是以抑制PCR(suppressionPCR)为基础,将标准化检测子cDNA单链步骤和消减杂交步骤合为一体的技术,具有假阳性率低、敏感性高、速度快、效率高等特点。SSH技术已被国内外很多研究者所采用,克隆了多种新基因。近来应用SSH技术对涉及干细胞分化调控机制进行了初步研究,这对深入研究干细胞生物学特性及应用奠定了基础。随着SSH技术的不断完善,它在包括干细胞及组织修复等方面的研究中将发挥重要作用。
- 屈纪富郝利程天民
- 关键词：干细胞抑制消减杂交SSH基因表达
- 骨髓间充质干细胞及其临床应用研究进展被引量：3
- 2007年
- 骨髓间充质干细胞因具有容易获得、容易体外培养增殖、长期培养的过程中始终保持多向分化的潜能、抗原性小、组织修复能力强等特征,使之成为干细胞研究领域的热点和前沿,并被认为是最有前途的组织工程种子细胞之一。以干细胞工程为代表的现代组织工程学为组织器官的修复与替代提供了一个崭新的领域,并将此领域扩展到细胞替代治疗、支持造血、基因治疗等更多方面。
- 韩京冉新泽艾国平粟永萍
- 关键词：骨髓间充质干细胞创伤修复
