安徽省人才开发基金(2002Z035)
- 作品数：22 被引量：54H指数：5
- 相关作者：汪思应郑红杨晓明李菲菲倪芳更多>>
- 相关机构：安徽医科大学军事医学科学院蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：安徽省人才开发基金国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新型丝氨酸苏氨酸激酶CPK的初步克隆及功能被引量：2
- 2005年
- 从人胎肝cDNA文库中分离到一种cDNA ,推测的蛋白氨基酸序列具有明显的丝氨酸苏氨酸激酶结构域,可能编码一种新的丝氨酸苏氨酸激酶(命名为CPK ,cellproliferationassociationkinase) .CPKmRNA全长约3 0kb .RT PCR检测表明CPKmRNA在增殖活跃组织或细胞如人胚胎组织、肿瘤细胞株中呈高丰度表达,在成人组织则呈低丰度或不表达.利用PCR技术扩增大鼠同源cDNA ,以此为探针,Northern杂交发现CPK表达于多种成年小鼠组织,以脑组织丰度最高.小鼠2 3肝部分切除可迅速诱导CPKmRNA的表达,在术后2 4～4 8h达高峰,与2 3肝部分切除后细胞增殖期吻合.以小鼠同源cDNA片段为模板,合成RNA探针,原位杂交显示在胚胎发育期CPK低丰度表达在大多数组织,以神经系统组织变化最大,在第8d胚胎神经管内皮细胞中即出现表达,11～13d在端脑、脑膜、间脑、脊神经节表皮细胞、海马、小脑神经胶质细胞等多种神经细胞中表达且丰度较高,16d后这些组织的表达迅速下降到较低水平,表明CPK可能与神经系统的生长发育有一定关联.利用信号通路检测技术,观察到CPK的表达对MAPK ,p38MAPK途径的激活有明显的影响,并可显著增强表皮生长因子对这两条途径的激活,提示该激酶可能参与细胞因子的信号转导.
- 汪思应陈兵许望翔詹轶群崔玉芳李长燕杨晓明
- 新式SOE PCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨新式SOEPCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用。方法通过引物设计的改变,将6种人VH基因和11种人VL基因利用两步法直接互相两两连接为人scFv基因,并且与传统的SOE法进行对比。scFv基因用于构建噬菌体单链抗体库。结果新式SOEPCR法成功的将6种人VH基因和11种人VL基因连接成66种不同的人scFv基因,与传统的SOEPCR法相比,效率高且方法简便,经过约130次电转化后,抗体库的总库容为5·58×109。结论成功地改进了传统的SOEPCR方法,高效组装了66种不同的人scFv基因,提高了抗体库的多样性。
- 唐晓明杨俊涛王清明汪思应
- 关键词：抗体细菌免疫球蛋白类重链
- 一株新蛋白磷酸酶基因(Sy2)的原核表达载体构建及鉴定
- 2006年
- 目的用含有人Sy2酪氨酸磷酸酶基因的pOTB7质粒,构建Sy2原核表达重组子,并用该重组子转化原核细胞,表达出含Sy2的融合蛋白,为将来以此融合蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,进一步研究该基因的功能打好基础。方法用PCR扩增Sy2的PP2C结构域序列,限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pET28a(+)中,酶切、测序等鉴定后,重组子pET28a(+)-Sy2转染原核细胞,用载体标签His抗体经SDS-PAGE、Western blot方法检测Sy2重组蛋白的表达。结果成功构建出pET28a(+)-Sy2重组质粒,Western blot方法检测出融合蛋白的表达。结论成功构建原核表达载体并在原核细胞中表达成包涵体,这种包涵体可以作为抗原制备Sy2的单克隆抗体。
- 马广文陈兵鲁云霞李菲菲倪芳郑红汪思应
- 关键词：蛋白磷酸酶聚合酶链反应
- hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。
- 倪芳鲁茁壮瞿成奎胡泽斌王立生汪思应
- 关键词：腺病毒科
- 沉默hHBrk1基因对肺癌细胞增殖及迁移能力的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:研究玉米Brick1的人类同源基因hHBrk1(human homology of Brick1)对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响。方法:用质粒介导的siRNA(small interfering RNA)技术建立hHBrk1基因表达沉默的肺癌细胞模型;用细胞生长曲线、克隆形成率实验及流式细胞术分别比较不同处理的95D细胞增殖及细胞周期的变化;用Tran-swell细胞侵袭实验系统研究hHBrk1表达沉默对肺癌细胞迁移能力的影响。结果:成功筛选出hHBrk1基因表达抑制的细胞模型;hHBrk1表达沉默细胞增殖能力和细胞周期与对照组相比无明显改变,但hHBrk1表达沉默细胞迁移能力明显减弱。结论:hHBrk1可能参与调控肺癌细胞迁移能力。
- 虞红珍祝敏周平坤隋建丽王豫徐勤枝汪思应
- 关键词：基因RNA干扰细胞运动细胞增殖基因沉默
- 蛋白磷酸酶LY1基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
- 2007年
- 目的构建蛋白磷酸酶LY1基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法PCR扩增LY1的CDs基因片段,并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)-LY1。经限制性内切酶Nhe I、XhoⅠ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。SDS-PAGE、Western blot方法检测重组蛋白的表达。结果获得全长为1179bp的LY1基因片段,以构建的重组质粒pET28a(+)-LY1转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出分子量约为42kD的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中。Western blot方法检测出LY1融合蛋白的表达。结论成功构建了原核表达载体pET28a(+)-LY1,并表达出重组LY1蛋白,为进一步单克隆抗体的制备和生物信号转导的相关研究奠定了实验基础。
- 彭万仁陈兵倪芳鲁云霞郑红李菲菲汪思应
- 关键词：基因蛋白基因表达
- 大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌组织NO含量和NOS活性的影响被引量：7
- 2006年
- 目的探讨大豆异黄酮(soyisoflavones,SI)对糖尿病大鼠心肌组织NO含量和NOS活性的影响。方法SD大鼠48只,随机分为正常对照组(NC)、糖尿病对照组(DC)、SI低剂量组(L-SI)、SI中剂量组(M-SI)、SI高剂量组(H-SI)、尼尔雌醇组(NI)。后5组腹腔注射链脲佐菌素55mg·kg-1制备DM模型。第7周起,NC、DC组予0.5%CMC-Na10mL·kg-1·d-1,L-SI、M-SI、H-SI组分别予大豆异黄酮30、60、120mg·kg-1·d-1,NI组予尼尔雌醇混悬液0.1mg·kg-1(2次/周)灌胃。第12周末,测大鼠体重、空腹血糖,血清LDH、CK含量,心肌组织NO含量和NOS活性。结果(1)DC组大鼠血清LDH含量明显高于正常(P<0.01),经中、高剂量SI治疗后显著低于DC组(P<0.01),且高剂量优于中剂量组(P<0.01)。DC组大鼠血清CK含量明显高于正常(P<0.01),各治疗组与DC组差异无显著性。(2)心肌组织NO含量、NOS活性以DC组最低,M-SI、H-SI组比DC组明显升高(P<0.01)。结论中、高剂量SI可提高心肌组织NO含量和NOS活性,对糖尿病大鼠心肌具有保护作用。
- 马善峰贾强关宿东汪思应
- 关键词：大豆异黄酮糖尿病心肌损伤自由基
- THAP11转基因线虫载体的构建及转基因线虫的制备
- 2009年
- 目的构建带有线虫组织特异启动子的含不同ployQ的THAP11转基因线虫载体,并制备转基因线虫,为进一步研究THAP11基因的功能提供基础。方法设计引物,以THAP11-pcDNA3.1his/mycB真核表达载体为模板,PCR法扩增含不同ployQ的THAP11基因,将其克隆至带有线虫组织特异性启动子的pFx-unc119(Gene Marker dsRed)载体。酶切及测序鉴定正确后,用显微注射的方法制备THAP11转基因线虫,用荧光显微镜观察载体荧光表达并提取转基因线虫基因组DNA、RNA,PCR、RT-PCR方法检测其整合及表达情况。结果PCR扩增出含不同ployQ的THAP11-HIS片段,长度约1000bp,测序正确并构建pFx-unc119(THAP11)载体,THAP11转基因线虫的载体在线虫体内稳定表达红色荧光,转基因线虫基因组内有相应的THAP11插入及转录。结论成功构建的THAP11转基因线虫的载体能稳定转染线虫,将有助于THAP11功能的进一步研究。
- 杨帆李长燕任长虹赵娜杨晓明汪思应
- 关键词：动物基因修饰漂亮
- 肿瘤谱阵列芯片技术分析人体不同癌组织hHBrk1基因的差异表达被引量：1
- 2008年
- 目的检测不同肿瘤及其癌旁正常组织中hHBrk1基因的差异表达,为进一步研究hHBrk1基因对肿瘤生物学过程的影响提供线索。方法以154对正常及肿瘤组织(19种不同人体组织)和10种肿瘤细胞株的cDNA的肿瘤谱阵列芯片(Cancer profiling arrayⅡ)为研究材料,采用Northern杂交方法分析目的基因表达水平的差异。根据阳性结果收集临床肿瘤组织样本,用RT-PCR检测hHBrk1基因表达,以验证芯片结果的可靠性。结果154对组织及10个肿瘤细胞株均表达hHBrk1基因。其中肺肿瘤组织高表达hHBrk1基因,与正常配对肺组织表达丰度差异有显著性(P<0.01);在肾癌组织中的hHBrk1基因表达丰度低于配对肾组织(P<0.01)。RT-PCR证实8临床肺肿瘤组织中5例高表达hHBrk1基因。结论肿瘤谱阵列芯片技术能够快速检测hHBrk1基因在不同组织中的表达差异,hHBrk1基因可能与肺癌及肾癌的发生、发展有关。
- 祝敏虞红珍周平坤隋建丽王豫徐勤枝汪思应
- 关键词：基因表达癌基因
- B16M高低转移株的筛选及其生物学异质性的分析
- 2004年
- 目的 筛选B16M高低转移株 ,以探讨B16M的转移异质性及机制。方法 通过B16M自发肺转移模型筛选出转移性能不同的细胞株 ,并用实验性和自发性肿瘤转移模型验证其在体内生长、转移性。通过细胞增殖、3 H TdR参入实验、流式细胞技术、细胞侵袭离散实验研究了高、低转移B16M细胞株体外增殖能力、侵袭能力以及对离散因子的反应的差异 ,Western印迹实验研究细胞c -met表达及活化水平。结果 在所筛选出的 3株可疑高转移B16M细胞株中 ,H3B16M细胞接种于同系C5 7BL/ 6小鼠体内所形成的原发瘤重量、实验和自发性肺转移结节数明显高于其他细胞株 ;该细胞株增殖能力、侵袭性及对离散因子的反应能力的也明显高于其他细胞株。c met表达及磷酸化水平也升高。结论 成功的筛选出B16M高、低转移细胞株 ,两者在细胞增殖、侵袭能力、离散能力等方面有差别。这种差异可能与c met有关。
- 李春霞郑红李菲菲周颖余科科倪芳程洁瞿成奎汪思应
- 关键词：黑色素瘤肿瘤转移
