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天津市应用基础与前沿技术研究计划(IOJCZDJCl8800)
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
相关作者:
王奇
孔晓红
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天津市应用基础与前沿技术研究计划
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2013
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持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移
被引量:1
2013年
目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl一copGFP(慢病毒载体质粒),与第3代慢病毒其余辅助质粒pMDLG/pRRE、pRsv.Rev及pVSV.G按照1:4:1:1共转染293T细胞包装慢病毒,超离慢病毒,测定病毒滴度,感染Hela细胞72h与14d后,分别观察Hela细胞荧光,实时定量聚合酶链反应(Real—timepcn)测定Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA含量,Transwell小室观察细胞迁移。结果测序CXCR4基因序列正确,并成功连接到pCDHl.MCS—EFl.copGFP,利用第3代慢病毒包装系统成功包装慢病毒,经超离慢病毒颗粒,流式细胞仪测定慢病毒滴度为7.89×10^5,持续观察Hela细胞荧光强度,Real.timePCR检测结果示Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA水平显著升高(72h为78.29倍,至14d为58.93倍),Transwell小室观察到高表达CXCR4的慢病毒颗粒感染组细胞迁移多(P〈0.05)。结论高效感染力并持续高表达CXCR4的慢病毒颗粒可持续促进细胞迁移,并有基质细胞衍生因子.1d(SDF一10L)浓度依赖性。
王奇
冯世庆
孔晓红
刘畅
张彬
张亮
张衍军
关键词:
慢病毒
细胞迁移
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